南海珊瑚共附生真菌NG-15-3中蒽醌和含氮类次生代谢产物研究*

李秀婷，刘炳新，胡谷平，汪玉梅，张翠仙

( 1. 广州中医药大学中药学院，广东 广州 510006;2. 中山大学化学与化学工程学院，广东 广州 510275)

南海珊瑚共附生真菌NG-15-3中蒽醌和含氮类次生代谢产物研究*

李秀婷1，刘炳新1，胡谷平2，汪玉梅1，张翠仙1

( 1. 广州中医药大学中药学院，广东 广州 510006;2. 中山大学化学与化学工程学院，广东 广州 510275)

为了研究南海珊瑚共附生真菌NG-15-3次生代谢产物，采用硅胶柱层析和HPLC等分离手段从乙酸乙酯提取部位分离得到单体化合物，结合现代波谱技术、物理常数对照对单体化合物的结构进行结构鉴定。从其分离得到4个蒽醌类：emodin (2)、1-O-methylemodin(3)、physcion(4)、carviolin(5)和6个含氮类次生代谢产物：preechinulin(1)、cyclo-(Phe-Gly) (6)、cyclo-(Gly-Pro)(7)、3H-imidazole-4-carboxylicacid(8)、2-methyl-3H-imidazole-4-carboxylicacid(9)和1H-pyrrole-2-carboxylicacid(10)。所有化合物均为首次从该真菌中分离得到，且化合物1为单去氢2,5-二酮哌嗪类化合物的前体物质，具有丰富的生理活性。

珊瑚共附生真菌；NG-15-3；蒽醌；含氮类化合物；结构鉴定

由于海洋具有高压、高盐、低光照等特殊的物理化学环境，使得生存其中的微生物有异于陆生微生物的独特生物合成代谢途径[1]，并产生结构丰富、活性多样的次生代谢产物，是创新药物及其先导结构的重要来源[2-3]。前期实验研究表明，OSMAC策略对南海珊瑚共附生真菌NG-15-3次生代谢产物产生明显影响，并采用TLC及HPLC方法对其建立指纹图谱，筛选出最佳培养条件。本文对真菌NG-15-3在最佳GPY培养基(发酵液和菌丝体)乙酸乙酯提取部位进行次生代谢产物研究，通过柱层析(硅胶、ODS和Sephadex LH-20等)及HPLC分离纯化，共分离得到10个单体化合物，经过NMR和MS及物理常数对照确定结构为preechinulin (1)、emodin (2)、1-O-methylemodin(3)、physcion(4)、carviolin(5)、cyclo- (Phe-Gly) (6)、cyclo-(Gly-Pro)(7)、3H-imidazole-4-carboxylicacid(8)、2-methyl-3H-imidazole-4-carboxylicacid(9) 和1H-pyrrole-2-carboxylicacid(10)。所有化合物均为首次从该真菌中分离得到。

图1 南海珊瑚共附生真菌NG-15-3中蒽醌(2，3，4，5)和含氮类化合物(1,6，7，8，9，10)Fig.1 Compounds 1，2，3，4，5，6，7，8，9，10 from the coral-derived symbiotic fungi NG-15-3 of South China Sea

文献调研表明：叶立德类化合物大多来自真菌，主要有抗氧化、抗菌和免疫调节活性[4]。朱伟明研究小组[5]研究了该类化合物的抗肿瘤与抗氧化活性，结果表明C-10/C-11双键的存在可以大大加强此类化合物的抗氧化活性。化合物1为单去氢2,5-二酮哌嗪类化合物的前体物质，这类化合物有多种官能团，是进行结构修饰或改造的较好的前体物质，可以通过化学方法或生物转化的方法提高该类化合物的活性，得到能够成药高活性的先导化合物。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

仪器：(单人)超净工作台(苏州净化设备厂)；LX-B75L型立式自动电热压力蒸汽灭菌器(合肥华泰医疗设备有限公司)；HYG-A全温摇瓶柜(常州市三盛仪器制造有限公司)；RE-2010恒温水油浴锅(巩义市予华仪器有限责任公司)；ER-120A电子天平(日本A&D公司)；VANCEAV400超导核磁共振仪(瑞士Bruker公司)；VGZABHS质谱仪(美国Finnigan公司)；LCQDE-CAXP高效液相色谱-质谱联用仪(美国Finnigan公司)；QuikSep高效液相色谱仪(北京慧德易科技有限责任公司)。

试剂：蛋白胨、酵母膏(生物试剂，广东环凯微生物科技有限公司)；葡萄糖(AR，天津市大茂化学试剂厂)；海盐(微生物养殖用)；马铃薯(市场购买)；石油醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、正丁醇、甲醇(AR，天津市富宇精细化工有限公司)；SephadexLH-20葡聚糖凝胶(GE医疗集团)，GF254薄层层析硅胶板(青岛海洋化工厂)，柱层析硅胶(200～300目，青岛海洋化工厂)。

PDA培养基：马铃薯200g/L、葡萄糖w=2.0%、土豆汁用陈海水作溶剂配制，pH自然。

GPY培养基(w)：葡萄糖1.0%、海盐0.25%、酵母膏0.2%、蛋白胨0.1%，pH=7.0～7.5。

1.2 实验材料

实验用菌株NG-15-3于2012年采自中国南海东锣岛附近海域珊瑚的共附生真菌，种属未鉴定，菌种(No.NG-15-3)保存在广州中医药大学中药学院海洋天然药物实验室。

1.3 共附生真菌NG15-3活化与发酵

1.3.1 活化 用接种环从NG-15-3菌种保存管中取适量的种子，接种到装有40 mL PDA培养基的100 mL三角瓶中，在28 ℃的摇床中165 r/min培养2 d，获得NG-15-3的种子培养液。

1.3.2 发酵 吸取该种子液5 mL加入装有500 mL GPY培养基的1 L三角烧瓶中，在28 ℃下静置培养60 d，与空白培养基对比观察是否有明显的菌株生长，成长完便停止发酵(共发酵菌液208 L)。

1.4 提取与分离

菌液用纱布过滤，收集菌丝体和发酵液。培养液在75 ℃水浴条件下浓缩至10 L，所得浓缩液依次用等体积的乙酸乙酯(EtOAc)、正丁醇(n-BuOH)进行分配萃取3～5次，分别减压回收溶剂后得到发酵液的EtOAc浸膏44 g及n-BuOH浸膏76 g。菌丝体用甲醇浸泡提取3次(1次/d)，所得提取液减压浓缩共得到甲醇浸膏56.5 g，该浸膏用水涅溶，依次用等量的EtOAc和n-BuOH进行分配萃取，分别萃取3次，得到菌丝体的EtOAc浸膏0.5 g和n-BuOH部位浸膏5 g。经TLC追踪显示，发酵液与菌丝体的EtOAc相成分相似，故合并二者EtOAc相(共44.5 g)。

取EtOAc部位浸膏(44.5 g)经硅胶柱分离，以PE/EtOAc体系梯度洗脱，TLC薄层跟踪并合并流份得到10个不同极性的组分(标记为Fr1-10)。从Fr1流份中抽滤并重结晶得到化合物4 (9 mg)。Fr2流份经硅胶柱层析(PE/EtOAc洗脱)得到9个不同极性组分(Fr2-1～2-9)，Fr2-5经HPLC纯化(φ=35% MeOH-H2O)得到化合物2 (5 mg)。Fr4流份经硅胶柱层析(PE/EtOAc洗脱)得到8个不同极性组分(Fr4-1～4-8)，Fr4-3经HPLC纯化(φ=75% MeOH-H2O)得到化合物3 (15 mg)。Fr5流份经经硅胶柱层析(PE/EtOAc洗脱)得到6个不同极性组分(Fr5-1～5-5)，Fr5-2经HPLC纯化(φ=25% MeOH-H2O)得到化合物10 (8 mg)。从Fr6流份中抽滤并重结晶得到化合物5 (90 mg)。Fr7流份经硅胶柱层析,经PE/EtOAc洗脱,得到化合物8 (30 mg)和化合物9 (10 mg)。Fr8流份经硅胶柱层析(PE/ EtOAc洗脱)并经HPLC纯化(φ=25% MeOH-H2O)得到化合物1 (14 mg)。Fr9流份经硅胶柱层析(PE/EtOAc洗脱)得到化合物6 (5 mg)。从Fr10流份中重结晶得到化合物7 (5 mg)。

1.5 物理常数与波谱数据

化合物1，分子式为C19H23N3O2，白色固体(甲醇)，θmp为210～214 ℃，碘蒸气显色。ESI-MSm/z: 324[M-H]-。1H NMR(500 MHz,Pyr-d5)δH: 11.30(1H,s),9.38(1H,s), 7.98(1H,dd, 6.0,3.0 Hz), 7.43～7.34(1H,m),7.23(2H,m),6.34(1H,dd,17.4,10.5 Hz), 5.20(1H,dd,17.4,1.1 Hz),5.14(1H,dd,10.5,1.2 Hz),4.81～4.76(1H,m),4.39(1H,dd,7.0,2.5 Hz),4.10(1H,dd,14.4, 3.1 Hz),3.65(1H,dd,14.4,11.1 Hz),1.75(3H,d,7.1 Hz),1.63(6H,d,15.5 Hz);13C NMR(100 MHz,Pyr-d5)δC: 168.3(C),168.1(C),146.5(CH), 142.1(C),135.3(C),129.5(C),121.0(CH), 118.9(CH),118.4(CH),111.0(C),110.9(CH),105.6(CH2),56.4(CH),51.2(CH),39.1(C),31.9(CH2), 28.1(CH3),28.0(CH3),21.2(CH3)。

化合物2,分子式为C15H10O5，橙红色针状结晶(甲醇)，θmp为262～265 ℃，紫外灯365 nm下呈红色荧光。ESI-MSm/z: 269[M-1]-。1H NMR(400 MHz,Pyr-d5)δH: 12.43(2H,s),7.71(1H,s), 7.70(1H,d,4,0 Hz),7.13(1H,s),7.0(1H,d,4.0 Hz);13C NMR (100 MHz,Pyr-d5)δC: 190.17(C), 181.67(C),166.96(C),165.40(C),162.12(C),147.85(C),133.25(C),124.03(CH),120.59(CH), 113.68(C),109.61(CH),109.17(C),108.34(CH),29.44(C),21.18 (CH3)。

化合物3，分子式为C16H12O5，砖红色片状结晶(甲醇)，θmp为265～267 ℃，紫外灯365 nm下呈红色荧光。ESI-MSm/z: 283[M-1]-。1H NMR(400 MHz,Pyr-d5)δH: 13.9(1H,s), 7.80(1H,d,2.3 Hz),7.67(1H,d,1.1 Hz),7.14(1H,s),7.06(1H,d,2.3 Hz),3.90(3H,s),2.22(3H,s);13C NMR(100 MHz,Pyr-d5)δC: 186.9(C),182.7(C),165.5(C),163.7(C),162.4(C), 146.1(C),137.5(C), 132.5(C),124.1(CH),119.2(CH),114.9(C),113.3(C),107.5(CH),105.1(CH),55.8(OCH3),21.1(CH3)。

化合物4，分子式为C16H12O5，橙黄色针状结晶(甲醇)，θmp为203～207 ℃，紫外灯365 nm下呈红色荧光。ESI-MSm/z: 283[M-1]-。1H NMR(400 MHz,Pyr-d5)δH: 13.00(1H,s), 12.29(1H,s),7.69(1H,s),7.50(1H,s),7.13(1H,s),6.90(1H,s),3.78(3H,s),2.25(3H,s);13C NMR(100 MHz,Pyr-d5)δC: 190.4(C),181.3(C),166.4(C),165.04(C),162.17(C),148.2(C),135.0(C),133.1(C), 124.1(CH),120.8(CH),113.6(C),110.1(C),108.0(CH),106.4(CH),55.6 (OCH3),21.2 (CH3)。

化合物5，分子式为C16H12O6，橙黄色针状结晶(甲醇)，θmp为284～286 ℃，紫外灯365 nm下呈红色荧光。ESI-MSm/z: 299[M-1]-。1H NMR(400 MHz,Pyr-d5)δH: 13.99(1H,s), 8.11(1H,s),7.80(1H,d,2.2 Hz),7.67(1H,s),7.06(1H,d,2.2 Hz),4.98(2H,s), 3.91 (3H,s);13C NMR(100 MHz,Pyr-d5)δC: 187.0(C),182.7(C),165.6(C),163.8(C),162.8(C),151.6(C),137.6(C), 132.8(C),121.1(C),116.0(CH),115.7(CH),113.4(C),107.5(CH),105.2(CH),62.8(CH2OH), 55.8(OCH3)。

化合物6，分子式为C11H12N2O2，白色粉末(甲醇)，θmp为266～268 ℃，碘蒸气显色。ESI-MSm/z: 203[M-H]-。1H NMR(400 MHz，Pyr-d5)δH: 9.29(1H,s), 9.01(1H,s), 7.24～7.45(2H,m), 7.26～7.19(3H,m),4.59(1H,m),3.96(1H,dd,17.2,3.2 Hz),3.50(1H,d,17.2 Hz), 3.45(1H,dd, 13.2,5.6 Hz),3.29(1H,dd,13.2,4.4 Hz)；13C NMR(100 MHz,Pyr-d5)δC: 168.4(C), 166.7(C), 136.9(C),130.7(2CH),128.7(CH),127.2(2CH),57.3(CH),45.0(CH2),40.8(CH2)。

化合物7，分子式为C7H10N2O2，无色透明固体(甲醇)，θmp为220～223 ℃，紫外灯254 nm下有暗斑。ESI-MSm/z: 153[M-H]-。1H NMR(400 MHz,MeOD-d4)δH: 4.26～4.15(1H,m), 4.09(1H,ddd,16.8,2.0,1.0 Hz),3.73(1H,d,16.8 Hz),3.53(2H,ddd,17.3,11.9,6.0 Hz), 2.39～2.24(1H,m),2.06～1.86 (3H,m)；13C NMR(100 MHz,MeOD-d4)δC: 171.31(C),165.64(C), 60.18 (CH), 48.24 (CH2),46.58 (CH2),30.09 (CH2),23.89 (CH2)。

化合物8，分子式为C4H4N2O2，白色粉末(甲醇)，θmp为212～214 ℃，碘蒸气显色，紫外灯254 nm下有深暗斑。ESI-MSm/z: 111[M-H]-。1H NMR(400 MHz,Pyr-d5)δH:7.52(1H,s), 5.82(1H,d,7.6 Hz);13C NMR(100 MHz,Pyr-d5)δC: 167.0(C),154.5(C),143.3(CH),102.5(CH)。

化合物9，分子式为C5H6N2O2，白色粉末(甲醇)，θmp为248～252 ℃，碘蒸气显色，紫外灯254 nm下有深暗斑。ESI-MSm/z: 125[M-H]-。1H NMR(400 MHz,Pyr-d5)δH:7.26(1H,s), 1.92(3H,s);13C NMR(100 MHz,Pyr-d5)δC:170.3(C),166.2(C),153.2(C),137.9(CH), 19.2(CH3)。

化合物10，分子式为C5H5NO2，棕色柱状固体(甲醇)，θmp为204～208 ℃，硫酸/香草醛显砖红色，ESI-MSm/z: 110[M-H]-。1H NMR(400 MHz,Pyr-d5)δH:13.05(1H,s), 7.42(1H,ddd, 3.7,2.3,1.6 Hz), 7.32(1H,td,2.7,1.6 Hz),6.48(1H,dt,3.6,2.4 Hz);13C NMR(100 MHz,Pyr-d5)δC:163.8(COOH),125.1(C),123.3(C),115.3(C),109.9(C)。

2 结果分析与讨论

化合物1，白色固体(甲醇)，碘蒸气显色，ESI-MSm/z: 324[M-H]-结合NMR推断其分子式为C19H23N3O2，不饱和度为10。1H NMR (400 MHz,Pyr-d5)δH11.30 (1H,s),9.38(1H,s)提示有氮上活泼氢的存在，δH7.98(1H,dd,6.0,3.0 Hz),7.43～7.34(1H,m),7.23(2H,m)则显示化合物1的芳香区有1,2-二取代的苯环上4个芳氢，氢谱上还出现了一个反异戊烯基信号δH6.34(1H,dd,17.4,10.5 Hz),5.20(1H,dd,17.4,1.1 Hz),5.14(1H dd,10.5,1.2 Hz), 1.63(6H,d,15.5 Hz)和丙氨酸信号δH3.65(1H,dd,14.4,11.1 Hz),1.75(3H,d,7.1 Hz)，一个亚甲基δH4.39(1H,dd,7.0,2.5 Hz),4.10(1H,dd,14.4,3.1 Hz)和一个次甲基信号4.81～4.76(1H,m)。结合氢谱和碳谱中显示的亚甲基、脂肪族仲碳和叔碳信号，这些结果说明1中通过亚甲基将吲哚环和二酮哌嗪连接起来。将1的NMR数据与文献preechinulin[6]数据对照，基本一致。故确定1为preechinulin。

2007年Kimoto等[7]从一株真菌EurotiumrubrumHiji025代谢产物中分离得到一新的echinulin类化合物neoechinulin A，由于结构中存在C-10/C-11双键，该化合物具有保护来源于SIN-1的过氧亚硝酸引发的神经元细胞PC12死亡的作用以及抗氧化和抗硝化活性。C-10/C-11为双键时，一个完整二酮哌嗪基团的是反硝化活性必不可少的，但反氧化剂或细胞保护活性不需要[4]，但Preechinulin的C-10/C-11位只存在单键，所以其抗氧化活性比较弱。Preechinulin这类化合物有多种官能团，是进行结构修饰或改造的较好的前体物质，可以通过化学方法或生物转化的方法提高该类化合物的活性，得到能够成药高活性的先导化合物。

化合物2，橙红色针状结晶(甲醇)，紫外灯365 nm下呈红色荧光，KOH显色呈粉红色，提示为蒽醌类物质。ESI-MSm/z: 269[M-1]-，结合NMR推断其分子式为C15H10O5，不饱和度为11。13C NMR中δC190.17(C)和181.67(C)出现两个羰基信号；同时1H NMR谱中显示在δH12.43(2H,s)出现2个与羰基形成分子内氢键的酚羟基信号；在7.71(1H,s),7.70(1H,d,4,0 Hz),7.13(1H,s),7.0(1H,d,4.0 Hz)出现了苯环上的4个取代的氢信号；另外还有1个与芳香环相连的甲基信号2.24(3H,s)。将2的NMR数据与文献emodin[8]数据对照，基本一致。故确定2为emodin。

化合物3，砖红色片状结晶(甲醇)，KOH显色呈红色，提示为蒽醌类物质，紫外灯365 nm下呈红色荧光。ESI-MSm/z:283[M-1]-，结合NMR推断其分子式为C16H12O5，不饱和度为11。δC186.9(C)和182.7(C)出现两个羰基信号，δH13.90(1H,s)为分子内氢键的酚羟基信号，同时δH7.80(1H,d,2.3 Hz)和7.06(1H,d,2.3 Hz),7.67(1H,d,1.1 Hz),7.14(1H,s)又可推断有4个芳香氢取代并且间位耦合，3.90(3H,s)和 2.22(3H,s)分别显示有甲氧基和甲基基团。将3的NMR数据与文献1-O-methylemodin[8-9]数据对照，基本一致。故确定3为1-O-methylemodin。

化合物4，橙黄色针状结晶(甲醇)，紫外灯365nm下呈红色荧光，KOH显色呈红色，提示为蒽醌类物质。ESI-MSm/z:283[M-1]-，结合NMR推断其分子式为C16H12O5，不饱和度为11。1H NMR谱中显示在δH13.00(1H,s),12.29(1H,s)出现2个与羰基形成分子内氢键的酚羟基信号，在δH7.69(1H,s),7.50(1H,s),7.13(1H,s),6.90(1H,s)出现了苯环上的4个取代的氢信号，另外还有2个单峰甲基信号δH3.78(3H,s)和2.25(3H,s)。将4的NMR数据与文献physcion[8]数据对照，基本一致。故确定4为physcion。

化合物5，橙黄色针状结晶(甲醇)，紫外灯365 nm下呈红色荧光，KOH显色呈红色，提示为蒽醌类物质。ESI-MSm/z: 299[M-1]-，结合NMR推断其分子式为C16H12O6，不饱和度为11。δC186.9(C)，182.7(C)出现两个羰基信号，δH13.99 (1H,s)为分子内氢键的酚羟基信号，同时δH8.11(1H,s)和7.67(1H,s)、7.80(1H,d,2.2 Hz)和7.06(1H,d,2.2 Hz)又可推断有4个芳香氢取代并且间位耦合，4.98 (2H,s)显示有亚甲基存在，3.91(3H,s)则是甲氧基信号。将5的NMR数据与文献carviolin[9]数据对照，基本一致。故确定5为carviolin。

化合物6，白色粉末(甲醇)，碘蒸气显色。ESI-MSm/z: 203[M-H]-，结合其NMR数据确定分子式为C11H12N2O2，不饱和度为7。1H NMR(400 MHz,Pyr-d5)谱中δH9.29(1H,s)和9.01(1H,s)为2个氮上的氢信号，13C NMR(100 MHz,Pyr-d5)谱中δC168.4(C),166.7(s)为两个酰胺羰基碳信号，说明该化合物可能是一环二肽类化合物。7.24～7.45(2H,m),7.26～7.19(3H,m)为典型单取代芳环上的质子信号，同时δC168.4(C),136.9(C),130.7(2CH),128.7(2CH),127.2(CH)碳信号与苯丙氨酸片段的碳信号接近，δH3.45(1H,dd,13.2,5.6 Hz)及3.29(1H,dd,13.2,4.4 Hz)为1个亚甲基上的2个质子信号且化学环境不同，结合δH4.6(1H,m)及δC57.3(CH),40.8(CH2)可推断化合物含苯丙氨酸片段；δH3.96(1H,dd,17.2,3.2 Hz), 3.50(1H,d,17.2 Hz)和δC166.7(C),45.0(CH2)，提示该化合物含甘氨酸片段。将6的NMR数据与文献cyclo-(Phe-Gly)[10-12]数据对照，基本一致。故确定6为cyclo-(Phe-Gly)。

化合物7，无色透明固体(甲醇)，紫外灯254 nm下有暗斑。ESI-MSm/z: 153[M-H]-，结合NMR推断其分子式为C7H10N2O2，不饱和度为4。1H NMR(400 MHz,MeOD-d4)δH4.26～4.15(1H,m),3.53(2H,ddd,17.3,11.9,6.0 Hz),2.39～2.24(1H,m),2.06～1.86(3H,m)推断结构中含有脯氨酸片段，δH4.09(1H,ddd,16.8,2.0,1.0 Hz),3.73(1H,d,16.8 Hz)的耦合信息提示含有甘氨酸片段。将7的NMR数据与文献[13-15]数据对照基本一致。故确定7为cyclo-(Gly-Pro)。

化合物8，白色固体(甲醇)，紫外灯254 nm下有深暗斑。ESI-MSm/z:111 [M-H]-。结合NMR数据推测分子中可能含偶数个N，进而推断分子式是C4H4N2O2，不饱和度为4。1H NMR(400 MHz,Pyr-d5)谱中仅显示两组信号峰：δH7.52(1H,d,8.0 Hz)和5.82(1H,d,7.6 Hz)，均为N杂环中的H信息。且13C NMR(400 MHz,Pyr-d5) 显示出四个C信号：δC167.0(C)为羰基C；δC154.5(C)和143.3(CH)推测出为一个烯丙基；另δC102.5(CH)提示可能结构中还有一个双键。除上述不饱和度信息外，并无其他任何不饱和官能团，因而推测该化合物具有一个环状结构。将8的NMR数据与文献3H-imidazole-4-carboxylic acid[16]数据基本一致。故确定8为3H-imidazole-4-carboxylic acid。

化合物9，为白色固体(甲醇)，紫外灯254 nm下有深暗斑。ESI-MSm/z:125[M-H]-。结合NMR数据推测分子中可能含偶数个N，进而推断分子式是C5H6N2O2，不饱和度为4。1H NMR(400 MHz,Pyr-d5)谱中δH7.26 (1H,s),1.92 (3H,s)只有两组峰，且13C NMR(400 MHz，Pyr-d5)δC170.3(C),166.2 (C),153.2 (C),137.9 (CH),19.2 (CH3)四个碳推测可能含有一环状结构。根据NMR数据显示发现其母核信息与化合物8一致，推测9也是一咪唑类化合物；与8结构对比，咪唑环上多出一甲基取代。将9的NMR数据与文献2-methyl-3H-imidazole- 4-carboxylic acid[16]数据对照，基本一致。故确定9为2-methyl-3H-imidazole- 4-carboxylic acid。

化合物10，褐色结晶(甲醇)，硫酸/香草醛显砖红色。ESI-MSm/z: 110[M-H]-，结合其NMR数据确定分子式为C5H5NO2，不饱和度为4。其1H NMR(400 MHz,Pyr-d5)δH13.05(1H,s)显示羧基氢信号，11.51 (1H,s)为氮氢信号，δH7.42(1H,m)、7.34(1H,dd)、6.47(1H,dd)显示了芳香氢的特征。13C NMR(400 MHz,Pyr-d5)上显示有5个碳信号，δC164.20(s)为羧基碳，推测母核为吡咯类化合物。将10的NMR数据与文献1H-pyrrole-2-carboxylic acid[17]数据对照，基本一致。故确定10为1H-pyrrole-2-carboxylic acid。

致谢：感谢2015年广东省攀登计划专项资金申报平台基金资助及小组成员戴黎蓉、黄素超、胡紫微、陈美慧、卓丹伦的实验付出；同时感谢中山大学分析测试中心陈晓红、关山越、李玮、姚俊华、冯小龙老师等在结构鉴定中给予的支持。

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Anthraquinones and nitrogen secondary metabolites from the coral-derived symbiotic fungi NG-15-3 of South China Sea

LIXiuting1,LIUBingxin1,HUGuping2,WANGYumei1,ZHANGCuixian1

(1. School of Chinese Material Medica,Guangzhou University of Chinese Medicine,Guangzhou 510006,China;2.School of Chemistry and Chemical Engineering,Sun Yat-sen University,Guangzhou 510275,China)

In order to study the secondary metabolites from the coral-derived symbiotic fungi NG-15-3 of South China Sea, the compounds were isolated by silica gel column chromatography and HPLC. Their structures were identified on the basis of spectral data and physical constant comparison. Four anthraquinones and six nitrogen compounds were isolated as preechinulin (1),emodin (2),1-O-methylemodin(3),physcion(4),carviolin(5),cyclo-(Phe-Gly) (6),cyclo-(Gly-Pro) (7),3H-imidazole-4-carboxylicacid(8),2-methyl-3H-imidazole-4-carboxylicacid(9)and1H-pyrrole-2-carboxylicacid(10).Allthesecondarymetaboliteswerefirstlyacquiredfromthecoral-derivedsymbioticfungiNG-15-3ofSouthChinaSeaandcompound1wasaprecursorsofthemonodehydro-2,5-diketopiperazines,whichshowedvariedbiologicalactivity.

coral-derived symbiotic fungi; NG-15-3; anthraquinones; nitrogen compounds; structural identification

10.13471/j.cnki.acta.snus.2016.01.017

2015-09-05

广东省自然科学基金资助项目(2014A030313411)；国家自然科学基金资助项目(81001370)；广东省科技计划资助项目(2015A020216017)；中国科学院海洋生物资源可持续利用重点实验室联合基金资助项目(LMB101002)；2015年广东省大学生科技创新培育专项资金资助项目(粤财教[2015]219号)

李秀婷(1993年生)，女；研究方向：天然药物化学；通讯作者: 张翠仙；E-mail:zhangcuixian@aliyun.com

O629.7;R

A

0529-6579(2016)01-0096-06