不同产地牵牛子生品及炒制品咖啡酸含量测定

冯　鑫，袁　杰，金传山，刘丛彬，张　伟，胡　雨，张　悦

(1.安徽中医药大学药学院，安徽 合肥　230012；2.安徽省食品药品检验研究院，安徽 合肥　230051)



不同产地牵牛子生品及炒制品咖啡酸含量测定

冯鑫1，袁杰2，金传山1，刘丛彬1，张伟1，胡雨1，张悦1

(1.安徽中医药大学药学院，安徽 合肥230012；2.安徽省食品药品检验研究院，安徽 合肥230051)

[摘要]目的 通过测定不同产地牵牛子生品及炒制品中咖啡酸含量，探讨产地和炮制方法对牵牛子质量的影响。方法采用高效液相色谱法测定牵牛子生品及炒制品中咖啡酸的含量。色谱柱：Shim-pack ODS(4.6 mm×150 mm，5 μm)；柱温：30 ℃；流动相：乙腈-0.04%磷酸水溶液，梯度洗脱；检测波长为325 nm。结果河南产牵牛子咖啡酸含量最高，山西产牵牛子咖啡酸含量最低，其他产地牵牛子咖啡酸含量居中，牵牛子炒制品较生品中咖啡酸含量均有不同程度的降低。结论不同产地牵牛子咖啡酸含量不同，炮制后，咖啡酸含量降低，咖啡酸可作为牵牛子的评价指标之一。

[关键词]牵牛子；产地；咖啡酸；高效液相色谱

牵牛子为旋花科植物裂叶牵牛Pharbitisnil(L.)Choisy或者是圆叶牵牛Pharbitispurpurea(L.)Voigt的干燥成熟种子[1-2]，始载于《名医别录》，又名黑丑、白丑。牵牛子味苦，性寒，有毒，归肺、肾、大肠经，具有泻水通便、消痰涤饮、杀虫攻积之功效[3]。牵牛子的主要成分是咖啡酸，咖啡酸又名3，4-二羟基肉桂酸[4-5]，具有保护心血管、抗诱变、抗癌、抗菌、抗白血病、免疫调节、利胆止血及抗氧化等药理作用[6-8]。牵牛子生用偏于逐水消肿，杀虫；炮制后可降低毒性，缓和药性，以消食导滞见长。目前，关于牵牛子质量、炮制及产地优选方面的研究鲜有报道。基于此，本实验以牵牛子的主要成分咖啡酸为测定指标，通过测定不同产地牵牛子生品及炒制品中咖啡酸含量，观察产地和炮制方法对牵牛子质量的影响，以期为牵牛子药材的产地优选及其资源的合理利用提供实验依据。

1仪器及试剂

1.1仪器高效液相色谱仪：岛津LC-2010AHT，PDA型检测器；CP225D型电子天平：德国Sartorius公司；KQ-200KDB超声波清洗器：江苏省昆山超声仪器有限公司；Milli-Q Advantage超纯水机：美国Millipore 公司；756MC紫外-可见分光光度计：上海精密科学仪器有限公司生产；HL-200A型打粉机：上海塞耐机械有限公司。

1.2试剂及药材咖啡酸对照品(纯度98%)：中国药品生物制品检定所，批号110885-200102；色谱甲醇：上海星可高纯溶剂有限公司，批号 67-56-1；磷酸：天津四友精细化学品有限公司，批号 113004-113005；石油醚(60～90 ℃)：天津四友精细化学品有限公司，批号 223009-12962；三氯甲烷：上海中试化工总公司，批号 283009-22962；蒸馏水：自制。牵牛子样品：均收购于中原正信药材有限公司，经过安徽中医药大学金传山教授鉴定为牵牛属裂叶牵牛Pharbitisnil(L.)Choisy的干燥成熟种子。

2方法和结果

2.1牵牛子样品的收集及信息统计共购买8批牵牛子样品及其相应的炒制品，分别由浙江杭州，安徽亳州、六安等5家饮片厂生产，来源于河南、江苏、四川、湖北、山西、辽宁、安徽共7个产地。具体样品信息见表1。

表1　牵牛子生品、炒制品样品信息

2.2咖啡酸含量测定

2.2.1色谱条件[9]色谱柱：Shim-pack ODS(4.6 mm×150 mm，5 μm)；柱温：30 ℃；流动相为：乙腈(A)-0.04%磷酸水溶液(B)，梯度洗脱(0～12 min， 13% A，87% B；12～13 min， 13% A→54% A，87% B→46% B；13～19 min，54% A，46% B)；检测波长为325 nm；其理论板数按咖啡酸峰计算不低于4 000。

2.2.2对照溶液配制取咖啡酸对照品3.02 mg，精密称定，然后置于10 mL的棕色容量瓶中，用色谱甲醇定容，摇匀，得到浓度为302 μg/mL的咖啡酸母液。用移液管移取1 mL转移到10 mL的容量瓶中，用色谱甲醇定容即可。

2.2.3供试溶液制备[9]精密称定牵牛子样品粉末(过65目筛)2 g，放到索氏提取器中，加石油醚(60～90 ℃)试剂，水浴回流提取2 h，过滤，舍弃石油醚液，余下滤渣挥干石油醚，加甲醇-三氯甲烷(1∶3)混合液提取6 h，回收溶剂至提取液少许，然后转移到10 mL量瓶中，用相同有机溶剂清洗容器后移至上述10 mL量瓶中，定容，摇匀即可。

2.2.4线性关系考察取咖啡酸对照品3.02 mg，精密称定，然后置于10 mL容量瓶中，加甲醇定容，制成咖啡酸标准贮备液(302 μg/mL)，分别配成1.887 5、3.75、7.55、15.1、30.2 μg/mL的系列对照品液，依次吸取20 μL进样测定，以峰面积(y)为纵坐标，对照品浓度(x)为横坐标，得线性方程：咖啡酸y=111 853x-18 600 (r=0.999 5)。从结果可知，咖啡酸在1.887～30.2 μg/mL的浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.2.5精密度试验精密吸取咖啡酸溶液20 μL，进样6次，结果得到咖啡酸峰面积的RSD为1.69%，表明该仪器的精密度良好。

2.2.6重复性试验精密称定牵牛子样品6份，每份约2 g，分别制备供试品溶液6份，进样，测定咖啡酸的峰面积，计算咖啡酸含量，结果咖啡酸含量的RSD为1.98%，表明本方法的重复性良好。

2.2.7稳定性试验精密称定牵牛子样品2 g，制备供试品溶液，分别在0、4、8、12、16 h进样，测定咖啡酸的峰面积，计算其RSD为1.90%，表明制备的供试品溶液在16 h内稳定性良好。

2.2.8加样回收率试验精密称定牵牛子样品6份，每份约1 g，分别加入咖啡酸适量，按“2.2.3”制备供试品溶液，分别进样，测得平均回收率为99.39%，RSD=1.72%。

2.2.9样品中咖啡酸含量测定精密称取8批牵牛子生品及炒制品各3份，每份约2 g，按“2.2.3”制备供试品溶液，然后进样，样品以干燥品计算，测定各样品中咖啡酸含量，结果见表2。牵牛子生品、炒制品的高效液相色谱图见图1。

图1　咖啡酸对照品(A)、牵牛子生品(B)、牵牛子炒制品(C)的高效液相色谱图

注：比值=生品咖啡酸含量/炒制品咖啡酸含量。

3讨论

《中华人民共和国药典》2005版一部[9]牵牛子项下的含量测定对咖啡酸和咖啡酸乙酯的总量进行测定，但在实验中发现牵牛子生品和炒制品的所用样品中几乎测不出咖啡酸乙酯，因此笔者只对样品中咖啡酸进行测定。在《中华人民共和国药典》2005版一部牵牛子项下含量测定色谱条件的基础上，通过方法学考察确定咖啡酸的含量测定方法。

由8批不同产地牵牛子生品中咖啡酸含量的测定结果可以看出，河南产牵牛子咖啡酸含量最高，山西产牵牛子咖啡酸含量最低，其他产地牵牛子咖啡酸含量居中，据此可以得出产地对牵牛子中咖啡酸的含量影响较大，可以一定程度上通过咖啡酸含量的高低判断牵牛子药材的质量。另一方面，也为今后能够更合理、更充分、更高效地利用牵牛子药材资源提供实验依据。

本研究结果表明，8批牵牛子生品经炒制后咖啡酸含量均有不同程度的降低，降低幅度最大的是四川产牵牛子，降低幅度最小的为山西产牵牛子。炒制过程是一个加热的过程，而咖啡酸对热不稳定[10]，故牵牛子在炒制后其咖啡酸含量降低。如何确定牵牛子炮制过程中咖啡酸的含量变化与炒制程度之间的关系及寻找牵牛子炮制过程的具体参数是当前研究的难点，也是课题组下一步的研究方向。此外，关于牵牛子炮制减毒的具体机制，今后将进一步的深入研究。

参考文献：

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[3]敖冬梅，魏群.牵牛子研究进展[J].中国中医药信息杂志，2003，10(4):77-80.

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[6]田连起，张振凌，张本山.牵牛子药理、毒副作用及临床应用的研究进展[J].光明中医，2008， 23(11):1864-1865.

[7]陈立娜，李萍.牵牛子化学成分研究[J].中国天然药物，2004，2(3):146-148.

[8]陈立娜，李萍.牵牛子化学成分研究：Ⅱ[J].林产化学与工业，2007，27(6):105-108.

[9]国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[M].北京：化学工业出版社，2005:177-178.

[10]王初，孙建宇.炮制对牵牛子有效成分及药效的影响[J].医药导报，2008，27(7):781-782.

Determination of Caffeic Acid in Raw and Stir-friedSemenPharbitidisfrom Different Producing Areas

FENGXin1,YUANJie2,JINChuan-shan1,LIUCong-bin1,ZHANGWei1,HUYu1,ZHANGYue1

(1.SchoolofPharmacy，AnhuiUniversityofChineseMedicine,AnhuiHefei230012,China;2.AnhuiInstituteforFoodandDrugControl,AnhuiHefei230051,China)

[Abstract]ObjectiveTo determine the content of caffeic acid in raw and stir-fried Semen Pharbitidis from different producing areas, and to investigate the influence of producing area and processing method on the quality of Semen Pharbitidis. MethodsHigh-performance liquid chromatography (HPLC) was applied to determine the content of caffeic acid in raw and stir-fried Semen Pharbitidis. HPLC was performed on a Shim-pack ODS column (4.6 mm × 150 mm, 5 μm) with a mobile phase of acetonitrile-0.04% phosphoric acid solution for gradient elution at a column temperature of 30 ℃ and a detection wavelength of 325 nm. ResultsSemen Pharbitidis produced in Henan Province had the highest caffeic acid content, Semen Pharbitidis produced in Shanxi Province had the lowest caffeic acid content, and Semen Pharbitidis produced in other areas had a medium caffeic acid content. Compared with raw Semen Pharbitidis, stir-fried Semen Pharbitidis had varying degrees of reduction in caffeic acid content. ConclusionThe content of caffeic acid varies across Semen Pharbitidis from different producing areas, and it is reduced after Semen Pharbitidis is processed. The content of caffeic acid can be used as an index for the assessment of Semen Pharbitidis.

[Key words]Semen Pharbitidis; Producing area; Caffeic acid; High-performance liquid chromatography

(收稿日期：2015-12-11；编辑：曹健)

[中图分类号]R284[DOI]10.3969/j.issn.2095-7246.2016.02.028

通信作者：袁杰，dsyuanjie@126.com

作者简介：冯鑫，男(1974-)，硕士，讲师

基金项目：安徽中医药大学自然科学基金项目(2016zr015)；安徽省高校科研创新平台团队(中药饮片产地加工与炮制一体化关键技术研究创新团队)建设项目(2015TD035)