人工结香沉香质量评价体系的研究

刘肖林　蔡艳芳　何兆锦（广东省佛山市第一人民医院药学部中药房　佛山　528000）



人工结香沉香质量评价体系的研究

刘肖林蔡艳芳何兆锦（广东省佛山市第一人民医院药学部中药房佛山528000）

摘要：目的：探讨建立人工结香沉香的质量评价体系及结香作用机制的初探。方法：采用“小孔滴注法”真菌诱导结香的方式，选取不同产地白木香树，按照2010年《中国药典》中对沉香药材性状描述、显微鉴别、薄层鉴别、醇溶性浸出物含量方法，建立切实可行的沉香质量评价标准。结果：苄基丙酮是沉香样品中的化学成分，不同批次人工结香沉香药材性状、显微特征、薄层色谱与对照药材相同，醇溶性浸出物含量在12.07%～25.00%之间。结论：不同批次的人工结香沉香药材质量符合药典的规定，苄基丙酮成为结香的标志进行含量测定评价沉香药材质量具有科学价值。

关键词：沉香人工结香质量评价苄基丙酮薄层色谱

沉香为瑞香科（Thymelaeaceae）沉香属（Aquilaria spp.）的部分种以及拟沉香属（Gyrinops spp.）的部分种，沉香可以通过自然、微生物或者人工方式发生生物化学过程，从而形成具有香味的木材[1]。沉香的形成过程称之为结香[2]。近几年来，人们对沉香过度采伐，造成了白木香植物资源的匮乏，白木香植物已经列为国家二级保护野生植物[3]。因此，人们多采用人工结香的方式如砍伤法、凿洞法、钻孔灼烧法、接菌法等促进结香，满足市场中对于药材的用药需求[4]。本文中采用了“小孔滴注法”真菌诱导结香的方式，建立人工结香沉香的质量评价体系及结香的作用机制初探。

1　仪器及试药

1.1仪器：显微镜（尼康株式会社，型号：ECLIP80），显微成像系统（尼康株式会社），紫外分析仪器（北京电泳设备股份有限公司，型号：JY025），电子分析天平（美国梅特勒，型号：MTL02），恒温水浴锅（北京化工科技有限公司，型号：HH-6）。

1.2试剂：沉香对照品（中国食品药品检定所，批号：20141223），薄层层析板（北京科技生物公司，批号：HX041725，10cm× 20cm），香草醛溶液（北京化工科技公司，生产批号：20131225），盐酸溶液、乙醚溶液、三氯甲烷溶液，乙醇溶液（北京化工科技公司）均为分析纯，水为三蒸水，95%乙醇溶液由乙醇溶液+三蒸水配制而成。分别取经“小孔滴注法”真菌诱导法结香的白木香树，经专业人士鉴定为白木香，按照2010版《中国药典》[5]的要求将沉香药材剖取出，批次根据沉香结香的时间编号（20120212、20121202、20130526、20131112、20131212），样品信息见表1。

表1　5批沉香药材基本资料表

2　质量评价方法与结果

2.1显微鉴别：根据《中国药典》2010年版第一部中关于沉香药材的显微鉴别要求，对上述5批沉香药材显微特征通过显微镜进行镜下观察。各批次药材观察到射线、导管以及木间韧皮部等显微结构[6]。其中导管圆多角形，有的含有棕色的树脂。韧皮部均扁长椭圆状或者是条带状，射线部分与之相交，细胞壁较薄，有棕色树脂。

2.2醇溶性浸出物含量测定：按照《中国药典》2010年第一部的测定方法，将样品进行粉碎，电子分析天平精密称取粉末4.0g，置于200mL锥形瓶中，加入95%乙醇溶液100mL后胶塞将锥形瓶口密封后称重，静置2h后将回流冷凝管连接，水浴锅中加热至沸腾状态后保持沸腾1h。以室温将锥形瓶取出，密塞后再进行重量的称定，继续采用95%乙醇溶液将损失后的重量进行补齐，摇匀后进行过滤，采用移液管精密吸取滤液50mL放置于干燥的蒸发皿中，水浴锅上蒸干，置于100℃的恒温保温箱中恒温干燥4h，取出后置于干燥器中冷却1h，进行精密称定。以干燥品计算供试品中乙醇浸出物中样品的含量。

2.3显色鉴别：取“2.2”项下的各个不同批次样品的醇溶性浸出物适量置于蒸发皿中，蒸发皿上盖一块玻璃片后放置于三脚架上，采用酒精灯进行加热，待盖玻片上出现油状物质后停止加热，后加1滴盐酸溶液及香草醛少量，后滴加2滴乙醇溶液，观察记录样品溶液染色的变化情况。见表2。

表2　沉香醇溶性浸出物的成分含量和显色反应

2.4薄层色谱鉴别：各个批次的沉香样品经粉碎机粉碎后过26目筛，按照“2.1”项下的配制方式进行提取配制，取各个批次的浸出液20mL，置于蒸发皿中水浴上加热蒸干后，用95%乙醇溶液将残渣进行溶解后，采用移液管吸取2mL浸出物溶液移入5mL容量瓶中，乙醇溶液定容至刻度后摇匀，放置于-20℃冰箱中作为供试品溶液备用。另一方面取沉香对照药材1.0g，按照同样的配制方式制成对照品溶液。按照薄层色谱法实验方法，吸取供试品溶液及对照品溶液各15μL，分别点于同一硅胶薄层色谱板上，以三氯甲烷：乙醚=9∶1作为展开剂进行薄层色谱分析，取出后将薄层板晾晒至干燥，置于紫外分析仪器中，于366nm处进行观察，各个批次的样品在与对照品药材色谱相对的位置上均显示相同颜色的荧光斑点。

3　小结

沉香药材虽然与其他常用药材比较相对名贵，文献中对于沉香药材质量的评价方面研究报道相对滞后，具有分散性缺乏系统的描述。随着社会经济的发展及人们生活水平的不断提高，临床上对于沉香的认识及药用价值越来越受到重视，药材的需求量逐年提高。人工结香沉香的技术主要通过真菌侵入性诱导有分泌出来，经过几年的沉淀形成沉香，沉淀的时间越长沉香的品质越好，其经济价值也越高，因此，采用先进的分析技术建立完善的沉香质量评价体系和标准至关重要。研究中在分析沉香样品中发现苄基丙酮是沉香的化学成分，在健康的白木香组织中未发现苄基丙酮，因此选择苄基丙酮并进行含量的测定是评价人工结香沉香药材质量的评价标准[7]。

另一方面结香机制假说的发展为人工结香技术的发展提供了理论指导，目前对于沉香的结香作用机制通过文献参考可以包括以下几个方面：①病理学假说认为沉香的形成与感病状况有一定的关联性[8]，沉香经真菌感染白木香树而得到，上个世纪三十年代国外开展大量接菌结香的研究，认为沉香的形成主要因树干损伤后由真菌侵入寄生，作用于木薄壁细胞贮存的淀粉出现一系列变化经过常年的沉积得到；②“创伤性”假说表明沉香的形成主要是被开放性的伤口所引起，并不是因特殊的真菌所产生[9]，由一些生理性的阻碍作用，如创伤、昆虫等联合形成而沉积成沉香；③“非病理”假说认为物理、化学性的伤害是沉香形成的主要因素，对植物的木质部的伤害可以产生沉香类的物质，对于活细胞的伤害强度越大沉香形成的面积也越大[10]，但是这种原因仍然需要进一步研究调查证实；④防御反应诱导结香假说认为伤害或者真菌侵染均作为激发子诱导白木香产生防御的反应，从而产生了具有抑菌活性的防御性物质，抵御外界物理的、化学的伤害对白木香的深入性损伤[11]。但这些机制还需要在研究中提供更加充分的实验数据对假说进行数据支持，从而为沉香结香的机制提供科学的参考数据。

参考文献

[1]中华人民共和国濒危物种进出口管理办公室，中华人民共和国濒危物种科学委员会.濒危野生动植物种国际贸易公约附录II[S].2007：11.

[2]梅文莉，左文健，杨德兰，等.沉香结香机理、人工结香及其化学成分研究进展[J].热带作物学报，2013，34（12）：2513-2515.

[3]梅全喜，汪科元，林焕泽，等.沉香的结香、采收与鉴别方法[J].中国医药指南，2013，11（12）：268-270.

[4]李红念，梅全喜.沉香的化学成分、药理作用和临床应用研究进展[J].中国药房，2011，22（35）：3349-3351.

[5]国家药典委员会.中华人民共和国药典（2010年版）[S].一部.北京：化学工业出版社，2010：357.

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[8]林峰，戴好富，王辉，等.两批接菌法所产沉香挥发油化学成分的气相色谱-质谱联用分析[J].时珍国医国药，2011，21（8）：1901-1903.

[9]赵艳艳，房志坚.一种新的人工结香沉香挥发油成分GC-MS分析[J].中药材，2013，36（6）：929-931.

[10]张争，杨云，魏建和，等.白木香结香机理研究进展及防御反应诱导结香假说[J].中草药，2010，41（1）：19-21.

[11]田燕泽，秘效媛，朴香兰.沉香的化学成分、药理活性与临床应用研究进展[J].中央民族大学学报（自然科学版），2011，19 （1）：77-81.

The preliminary study of artificial knot fragrant incense quality evaluation and edgeworthia mechanism

Abstract：Objective：To establish the system establishment of preliminary study of artificial knot fragrant incense quality evaluation and edgeworthia mechanism. Methods：Hole instillationfungus-induced ddgeworthia way was taken. Aquilaria trees of different places were chosen. Based on the 2010“Chinese Pharmacopoeia”the description of the medicinal properties of incense，microscopic identification，TLC，alcohol extract content method，practical incense quality evaluation criteria were created. Results：Benzyl acetone was the sample of the chemical composition of incense. Different batches of fragrant incense knot artificial medicinal properties，microscopic characteristics，TLC were the same with reference drug. The content of alcohol -soluble extract was between 12.07%～25.00% . Conclusion：The different batches of fragrant incenseknot artificial quality ingredients confirm the formulation of pharmacopoeia. Benzyl acetone knot become the symbol of edgeworthia，and it has scientific value for the determination of quality evaluation of medicinal incense.

Key words：Incense Artificial knot incense Quality evaluation Benzyl acetone TLC

中图分类号：R284.1

文献标识码：B

文章编号：1672-8351（2016）04-0132-02