MicroRNA-181在食管癌组织中的表达

虎　婕，山　曦，张伟宏

(1.郑州大学第一附属医院老年病科，河南 郑州 450052；2.郑州大学护理学院，河南 郑州 450052)



MicroRNA-181在食管癌组织中的表达

虎婕1，山曦1，张伟宏2

(1.郑州大学第一附属医院老年病科，河南 郑州 450052；2.郑州大学护理学院，河南 郑州 450052)

[摘要]目的探讨microRNA-181(miR-181)在食管癌组织及细胞系中的表达及其与食管癌临床病理参数的关系。方法RT-PCR检测56对食管鳞癌、癌旁正常组织及食管癌细胞系KYSE450、EC109中miR-181的表达，并分析其表达水平与临床病理参数及生存的关系。结果与癌旁正常组织比较，食管鳞癌组织中miR-181表达明显升高(P<0.05)，食管鳞癌细胞系KYSE450、EC109中miR-181表达水平与正常永生化食管上皮细胞Het-1a中表达水平比较差异有统计学意义(P<0.05)。食管鳞癌组织中miR-181的表达量与患者的肿瘤大小、分化程度及转移情况有关。结论miR-181在食管癌组织及食管癌细胞系中高表达，并与肿瘤大小、分化程度及转移情况相关，提示miR-181能够作为食管癌治疗的新靶点。

[关键词]miR-181；食管鳞癌；转移

食管癌是发生在食管上皮组织的恶性肿瘤，在世界范围内肿瘤发病率位居第8位，肿瘤相关致死率则位居第6位[1]。我国食管鳞癌约占到食管癌总数的90%，尽管越来越多的技术被用于食管癌的诊断和治疗，但其5 a生存率仍然不能让人满意，约为15%～25%[2]。因此，研究食管癌发生、发展的机制并寻找新的治疗靶点，将对提高食管癌的疗效具有重要的临床意义。

microRNA(miRNA)是一类长度约18～25个核苷酸的非编码RNA，在转录后水平调控靶基因的表达。miRNA通过与靶mRNA的3’-UTR区结合，导致靶mRNA降解或翻译抑制，下调靶蛋白的表达，从而达到调控靶基因表达的目的。miRNA可以通过抑制肿瘤特定靶基因的表达来作为癌基因或抑癌基因。大量研究[3]表明，miRNA可以作为一种新型的标志物来评估肿瘤的发生、发展和对治疗的反应。研究者发现mir-181在结肠癌组织和耐药乳腺癌小鼠模型中高表达并与其转移及耐药相关，但尚无其在食管癌中的研究，因此该研究探讨了食管癌组织及食管癌细胞系中miR-181的表达情况及miR-181与临床病理参数的相关性。

1材料与方法

1.1实验材料

1.1.1标本收集2012年3月至2014年5月郑州大学第一附属医院胸外科手术切除的新鲜食管鳞癌标本及相对应的癌旁组织56对，肿瘤组织均经病理学证实。标本采集后，采用液氮冻存，然后于-80 ℃储存以备提取组织总RNA。

1.1.2细胞人食管上皮细胞系Het-1a和人食管鳞癌细胞系KYSE450、EC109均购于上海细胞库。

1.1.3主要试剂DMEM/HIGH GLUCOSE培养基购自美国HyClone公司；胎牛血清购自美国Gibco公司；RNAiso plus、cDNA逆转录试剂盒及SYBR Premix Ex TaqTM II购自日本Takara公司；miR-181 mimics和inhibitor由上海吉玛设计；RT-PCR引物由上海生工合成。

1.2细胞培养Het-1a、KYSE450、EC109均为贴壁细胞，培养于含体积分数10%胎牛血清、100 u·mL-1青霉素和100 u·mL-1链霉素的DMEM/HIGH GLUCOSE完全培养基中，在37 ℃、体积分数5% CO2培养箱中培养。

1.3RT-PCRTRIzol法提取Het-1a及食管癌细胞和食管癌及癌旁正常食管组织中总RNA，检测RNA的纯度及浓度。结果显示OD260/OD280比值在1.80～2.0之间，符合实验要求。按照反转录试剂盒说明书合成cDNA，按SYBR Green试剂说明书用实时荧光定量PCR仪进行扩增。

2结果

2.1miR-181在食管鳞癌组织及食管癌细胞系中的表达食管癌组织、癌旁正常食管组织中miR-181的相对表达量分别为2.951 0±0.608 9、0.285 3±0.098 4，差异有统计学意义(t=4.322，P<0.05)。食管鳞癌细胞系KYSE450和EC109中miR-181的相对表达量分别为Het-1a的2.21倍和2.71倍，差异均有统计学意义(P均<0.05)。见图1、2。

图1　miR-181在食管鳞癌及相应癌旁正常食管组织中的表达

图2　miR-181在不同食管鳞癌细胞系中的表达

2.2miR-181的表达与食管鳞癌临床病理参数的关系食管鳞癌组织中miR-181的表达量与患者的肿瘤大小、分化程度及转移情况有关。见表1。

3讨论

肿瘤与miRNAs相关的研究正在受到越来越多的重视，研究者发现miRNAs在多种肿瘤的致癌和抑癌中发挥着重要的作用。miRNAs能够参与肿瘤的进展，并影响其预后。例如，上调miR-143可以降低口腔鳞癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力，增加其凋亡率。低表达的miR-143与口腔鳞癌较差的预后密切相关[4]。miR-153能够通过靶向SNAI1来抑制细胞的侵袭和迁移，并且能用来预测胰腺导管腺癌患者的预后[5]。对于食管鳞癌来说，许多miRNAs被证明可以作为新型的预测标志物，例如miR-382、miR-1294的低表达和miR-142-3p、miR-503的高表达与食管鳞癌差的预后相关[6-7]。我们的研究证明，与癌旁正常食管组织比较，miR-181在食管鳞癌组织中高表达，并且食管鳞癌细胞系与正常食管上皮细胞系相比，也显示出了相同的趋势。在食管鳞癌中miR-181与患者临床病理参数的相关性分析中发现，其表达与肿瘤大小、分化程度及淋巴结转移密切相关,而与性别、年龄无相关性。这就证明了miR-181可能在食管癌的发生、发展及临床预后方面发挥着重要的作用，能够为食管癌的诊断提供新型的标志物。

表1miR-181的表达与食管鳞癌临床病理参数的关系

临床病理参数nmiR-181高表达低表达P性别 男3220120.578 女24177年龄/岁 <60211290.565 ≥60352311肿瘤直径/cm <52914150.029 ≥527216分化程度 高分化211110 中分化171250.005 低分化18162转移 有211830.041 无352115

miR-181最早发现是在神经元细胞中高表达，后来在肌肉和造血系统中也被发现表达升高[8]。而miR-181在肝脏干细胞和在B淋巴细胞存在预示着其在调节分化状态方面发挥着重要的作用[9]。有研究[10-11]发现miR-181在多种肿瘤中高表达，包括慢性淋巴细胞白血病和乳腺癌，但是在一些肿瘤中则表现为表达下调，例如胶质母细胞瘤和垂体腺瘤等。Huang等[12]证明了miR-181可以通过靶向Bcl-2来抑制肺癌细胞增殖侵袭和迁移，从而证明了miR-181在肺癌发生发展中的作用。Tong等证明了mir-181在前列腺癌中高表达，可以通过靶向DAX-1来促进前列腺癌细胞的增殖和细胞周期的进程，从而说明了miR-181在前列腺癌中是促癌miRNA[13]。

综上所述，miR-181在食管鳞癌组织及食管鳞癌细胞系中高表达，并且与食管鳞癌患者的临床病理参数密切相关，miR-181可能作为食管癌新型的诊断指标和潜在的治疗靶点。本课题组下一步的工作是研究mir-181在食管癌中的作用机制，为其在食管癌治疗中的应用提供参考依据。

参考文献：

[1]Napier KJ,Scheerer M,Misra S.Esophageal cancer: A Review of epidemiology,pathogenesis,staging workup and treatment modalities[J].World J Gastrointest Oncol,2014,6(5):112-120.

[2]Pennathur A,Farkas A,Krasinskas AM,et al.Esophagectomy for T1 esophageal cancer: outcomes in 100 patients and implications for endoscopic therapy[J].Ann Thorac Surg,2009,87(4):1048-1055.

[3]Reddy KB.MicroRNA (miRNA) in cancer[J].Cancer Cell Int,2015,15:38.

[4]Ni ZY,Lin FO,Liu DF,et al.Decreased microRNA-143 expression and its tumor suppressive function in human oral squamous cell carcinoma[J].Genet Mol Res,2015,14(2):6943-6952.

[5]Bai Z,Sun J,Wang X,et al.MicroRNA-153 is a prognostic marker and inhibits cell migration and invasion by targeting SNAI1 in human pancreatic ductal adenocarcinoma[J].Oncol Rep,2015,34(2):595-602.

[6]Qi B,Lu JG,Yao WJ,et al.Downregulation of microRNA-382 is associated with poor outcome of esophageal squamous cell carcinoma[J].World J Gastroenterol,2015,21(22):6884-6891.

[7]Liu K,Li L,Rusidanmu A,et al.Down-Regulation of MiR-1294 is Related to Dismal Prognosis of Patients with Esophageal Squamous Cell Carcinoma through Elevating C-MYC Expression[J].Cell Physiol Biochem,2015,36(1):100-110.

[8]Dostie J,Mourelatos Z,Yang M,et al.Numerous microRNPs in neuronal cells containing novel microRNAs[J].RNA,2003,9(2):180-186.

[9]Chen CZ,Li L,Lodish HF,et al.MicroRNAs modulate hematopoietic lineage differentiation[J].Science,2004,303(5654):83-86.

[10]Shi L,Cheng Z,Zhang J,et al.hsa-mir-181a and hsa-mir-181b function as tumor suppressors in human glioma cells[J].Brain Res,2008,1236:185-193.

[11]Visone R,Rassenti LZ,Veronese A,et al.Karyotype-specific microRNA signature in chronic lymphocytic leukemia[J].Blood,2009,114(18):3872-3879.

[12]Huang P,Ye B,Yang Y,et al.MicroRNA-181 functions as a tumor suppressor in non-small cell lung cancer (NSCLC) by targeting Bcl-2[J].Tumour Biol,2015,36(5):3381-3387.

[13]Tong S J,Liu J,Wang X,et al.microRNA-181 promotes prostate cancer cell proliferation by regulating DAX-1 expression[J].Exp Ther Med,2014,8(4):1296-1300.

Expression of MicroRNA-181 in the Esophageal Cancer

Hu Jie1,Shan Xi1,Zhang Weihong2

(1.DepartmentofGerontology,theFirstAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversity,Zhengzhou450052,China;2.TheNursingCollege,ZhengzhouUniversity,Zhengzhou450052,China)

[Abstract]ObjectiveTo investigate the expression of miR-181 in the esophageal cancer and cell line,and the relationship between miR-181 with the clinical significance of esophageal cancer.MethodsThe expression level of miR-181 was determined by RT-PCR in the 56 human esophageal cancer tissue specimens and matched tumor-adjacent esophageal tissue specimens,and esophageal cancer cell line KYSE450,EC109.The association of miR-181 expression with clinicopathological characteristics in the patients with esophageal cancer was analyzed.ResultsCompared with the tumor-adjacent esophageal specimens,miR-181 was significantly high-regulated in the esophageal cancer tissue specimens (P<0.05).The miR-181 expression was elevated in the esophageal cell line KYSE450,EC109 compared with the Het-1a cell line (P<0.05).In the esophageal cancer tissue,the miR-181 expression was related with tumor size,pathological differentiation and metastasis.ConclusionHighly-expressed miR-181 is observed in the esophageal cancer tissues and cell lines,and it has significant correlation with tumor size,pathological differentiation and metastasis.The miR-181 represents a new potential therapeutic target for esophageal cancer treatment.

[Key words]miR-181; esophageal cancer; metastasis

(收稿日期：2015-12-10)

[中图分类号]R735.1；R730.23

[文献标识码]A

[文章编号]1673-5412(2016)02-0116-03

DOI:10.3969/j.issn.1673-5412.2016.02.007

作者简介：虎婕(1985-)，女，主管护师，主要从事临床护理研究工作。E-mail：xixibaby0329@126.com通信作者：张伟宏(1974-)，男，博士，副教授，主要从事社区老年病基础与临床护理研究工作。E-mail：zwhong306@zzu.edu.cn