口香糖中多种色淀类色素的检测方法

◎ 房英杰，颜显辉，于军强

（荣成出入境检验检疫局，山东 荣成 264300）

随着食品工业的发展，色素由于可有效改善食品的色泽，被广泛应用于食品加工业中[1]。食用色素是以食品着色为目的的一类食品添加剂[2]，我国对色素的使用范围及使用量在GB 2760-2014中有明确规定[3]。色素在口香糖中的使用通常以色淀的方式添加，色淀由于水溶性差，检测时提取困难。因此，研究一种可行的口香糖色素（含色淀）的检测方法，可有效地控制色素的含量，保障消费者的安全。本研究在参考各种文献[4-6]的基础上，建立了一种适合于口香糖中色素的测定方法。

1 试验材料

1.1 仪器

超声波清洗仪，HSC-12A；半自动固相萃取仪，美国supelco公司；Agilent 1260液相色谱仪，美国Agilent公司；ODS色谱柱，ZORBAX SB-C18，5 μm，150 mm×4.6 mm；漩涡混合器，IKA MS3；纯水仪，密理博；电子天平，MELLTER AB204-S；离心机，日立；冰箱。

1.2 试剂及溶液

柠檬黄标准品、日落黄标准品、亮蓝标准品、靛蓝标准品、诱惑红标准品和柠檬黄铝色淀，浓度36%～39%；日落黄铝色淀，浓度38%～42%；亮蓝铝色淀，浓度28%～31%；靛蓝铝色淀，浓度30%～～36%；诱惑红铝色淀，浓度38%～42%；赤藓红铝色淀，浓度38%～42%。以上各试剂均购自美国卡乐康公司。

甲醇，色谱纯；乙腈，色谱纯；乙酸铵，优级纯；氢氧化钠，分析纯；PEP-plus 500 mg/6 mL固相萃取小柱，艾杰尔；C18固相萃取小柱500 mg/6 mL；乙酸铵，分析纯；氢氧化钠，分析纯；氮气。

2 试验方法

2.1 样品提取

称取2.0 g样品于50 mL离心管中，加入15 mL 60 ℃0.02 moL/L氢氧化钠溶液，再加入5 g海砂，涡旋混匀1 min，再以3 500 r/min离心10 min，取上清。残渣加入10 mL提取液重复提取一次，以3 500 r/min离心10min，取上清与第一次提取液合并混匀。将上清液转移至125 mL的容量瓶中，加入30 mL正己烷，振荡混合1 min，静置分层后弃去正己烷层。下层液体加入30 mL的正己烷，振荡混合1 min，静置分层后取下层12.5 mL液体作净化处理。

2.2 样品的净化

采用PEP-plus 500 mg/6 mL固相萃取小柱净化，固相萃取小柱分别用5 mL甲醇，5 mL水淋洗，12.5 mL提取液过柱，再用2 mL水淋洗柱子，吹干固相萃取小柱内的液体，用3 mL 5%氨水甲醇洗脱。洗脱液置40 ℃水浴中氮吹至1～2 mL，加水定容至5 mL，取1.5 mL溶液置1.5 mL离心管中，10 000 r/min转离心5 min，取上清液上机测定。

2.3 仪器条件

流速：1.5 mL/min；柱温：25℃；色谱柱：ZORBAX SB-C18，5 μm，150 mm×4.6 mm； 进 样 量：20 μL；流动相：A为pH7.5的1%的乙酸铵溶液，B为甲醇∶乙腈=80∶20（体积比）；梯度洗脱程序为：0～2.0 min，100% A；2.0～22.0 min，100%～48%A；22.0～40.0 min，48%～10%A；40.0～43.0 min，10%～100%A。二极管阵列检测器检测波长变化程序为：0～8.5 min，427～ 610 nm；11.0～ 14.0 min，485～ 505 nm；18～23 min，630～530 nm。

3 结果与讨论

3.1 标准曲线

在0.2、0.4、1.0、4.0 mg/kg和10.0 mg/kg 5个浓度范围内，柠檬黄、靛蓝、日落黄、诱惑红、亮蓝和赤藓红6种色素均具有较好的线性，相关系数均为0.9998。

3.2 分离条件

本研究中采用梯度洗脱的方式对色素进行分离，从图1可看出，柠檬黄、靛蓝、日落黄、诱惑红、亮蓝和赤藓红6种色素基线完全分离，峰形尖锐对称。

图1 6种色素液相色谱图

3.3 检测波长的选择

目前国家标《食品中合成着色剂的测定》（GB/T 5009.35-2003）采用的检测波长为254 nm，检验检疫行业标准《食品中的诱惑红、酸性红、亮蓝、日落黄的含量检测 高效液相色谱法》（SN/T 1743-2006）也采用这一检测波长。本实验中，采用DAD检测器对目标色素的最大吸收波长进行扫描，从扫描的结果可看出，柠檬黄、靛蓝、日落黄、诱惑红、亮蓝和赤藓红的紫外区外最大吸收波长分别为：427、610、485、505、630 nm和530 nm。

3.4 回收率

从表1中可看出，在0.5、1.0、5.0 mg/kg 3个浓度下，柠檬黄的回收率在73.2%～77.0%，靛蓝的回收率在78.6%～82.4%，日落黄回收率在78.6%～82.4%，诱惑红回收率在80.5%～86.3%，亮蓝回收率在70.8%～74.1%，赤藓红回收率在72.6%～74.3%，6种色素均具有较好的回收率。

表1 不同添加浓度下6种色素的回收率表

3.5 精密度

从表2中可看出，在0.5、1.0、5.0 mg/kg 3个浓度下，柠檬黄精密度在4.0%～5.6%，靛蓝精密度在5.0%～6.3%，日落黄精密度在3.1%～4.8%，诱惑红精密度在5.5%～6.6%，亮蓝精密度在3.5%～5.3%，赤藓红精密度在4.6%～5.1%，6种色素均具有较好的精密度。

表2 不同添加浓度下6种色素的精密度表

3.6 检出限

以1.0 mg/kg的色素标准品添加空白样品，根据3倍信噪比计算检出限，柠檬黄、靛蓝、日落黄、诱惑红、亮蓝和赤藓红的检出限分别为0.01、0.04、0.01、0.02、0.01 mg/kg和 0.02 mg/kg。

4 结语

口香糖中的柠檬黄、靛蓝、日落黄、诱惑红、亮蓝和赤藓红6种色素在0.2～10.0 mg/kg内均具有良好的线性，加标回收率在70%～87%，本方法具有灵敏度高、重复性好等特点，适用于口香糖中色素的测定。

参考文献：

[1]霍艳敏，王 骏，张 卉，等.高效液相色谱法同时测定冰淇淋中的10种合成色素[J].分析测试学报，2011（6）：670-673.

[2]顾宇翔，葛 宇，印 杰，等.饮料和糖果中32种水溶性色素的HPLC筛选性检测[J].食品工业，2012（8）：142-145.

[3]中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会. GB 2760-2014 食品安全国家标准 食品添加剂使用标准[S].北京：中国标准出版社，2014.

[4]张国华，孙磊龙，杨志华.高效液相色谱测定雪糕中色素[J].中国卫生检验杂志，2013（9）：2043-2045.

[5]李 伟，穆永娟，吴 凡，等.饮料中色素含量的高效液相色谱-二极管阵列测定法[J].职业与健康，2015（12）：1618-1621.

[6]王 妍，于忠飞，王丽丽.高效液相色谱法测定山楂糕中色素的方法探讨[J].分析与测试，2012（5）：45-47.