牡丹籽皮总黄酮提取工艺研究

◎ 顾菲菲，晋晓峰，程雪芬，吴媛霞

（国家铜铅锌及制品质量监督检验中心，安徽 铜陵 244000）

黄酮类化合物广泛存在于植物的根、皮、叶、果实中，通常以苷类的形式存在，是植物经光合作用产生的一类天然物质，属于植物在长期自然选择过程中产生的次级代谢产物。黄酮类化合物泛指两个具有酚羟基的苯环（A-与B-环）通过中央三碳原子相互连结而成的一系列化合物，其基本母核为2-苯基色原酮[1]。目前黄酮类化合物可分为10多个类别，现已发现的黄酮类化合物达4 000多种[2]。黄酮类化合物的作用极其广泛，其药理性作用有：调节心血管系统，对心脑、胆、肝等具有保护作用；抗炎调节免疫、防癌抗病毒作用。其生物性作用有：具有良好的抗氧化活性和清除氧自由基能力；改善皮肤过敏症状、吸收紫外辐射、预防骨质疏松、祛痰、提高记忆力、活血化瘀等[3]。

牡丹属毛茛科芍药属木本植物，有“花中之王”的美誉，是重要的景观植物和资源植物。牡丹籽是牡丹植株的精华结晶，具有自身独特的营养成分。牡丹籽油富含不饱和脂肪酸，是生产牡丹皮的副产品牡丹籽经压榨、脱色、脱臭等工艺制作而成。牡丹籽皮占牡丹籽质量的1/3，是牡丹籽油生产过程中的中间产物，一般当作垃圾处理，不仅污染环境，还造成资源浪费。但目前国内对于牡丹籽皮的研究较少，其中牡丹籽皮总黄酮提取工艺的文献鲜有报道。本课题采用超声波提取法提取牡丹籽皮总黄酮，通过对影响因素进行正交试验，确定牡丹籽皮总黄酮的最佳提取工艺，本次实验研究也为牡丹籽皮的综合开发利用提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 实验材料

原料为干燥的牡丹籽皮，由铜陵瑞璞牡丹产业发展有限公司提供；芦丁（BR），国药集团化学试剂有限公司；亚硝酸钠（AR），无锡市展望化工试剂有限公司；硝酸铝（AR），国药集团化学试剂有限公司；氢氧化钠（AR），无锡市展望化工试剂有限公司；乙醇（AR），烟台市双双化工有限公司；UV1102紫外可见分光光度计，上海天美仪器公司。

1.2 实验方法

1.2.1 标准曲线的测定

准确称取9.2 mg干燥至恒重的芦丁标准品，置于50 mL容量瓶中，以50%的乙醇溶液配成浓度为0.184 mg/mL的溶液备用。

分别量取上述标准溶液0.0、0.5、1.0、1.5、2.0 mL和4 mL于10 mL容量瓶中，并补加50%乙醇至5 mL。加入0.3 mL 5%亚硝酸钠溶液，摇匀，放置6 min后，加入0.3 mL 5%硝酸铝溶液，摇匀，静置6 min；加4 mL 4%氢氧化钠溶液，加水稀释至刻度，摇匀，静置15 min后，于510 nm波长处测定吸光度。以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，得出回归方程为：

1.2.2 牡丹籽皮总黄酮的提取

黄酮类化合物常用的提取方法有水提取法、有机溶剂萃取法、微波萃取法、超声波提取法和超临界流体萃取法等[4-5]，本研究采用超声波提取法。影响牡丹籽皮总黄酮提取的因素有很多，本方法应用L9（33）正交表，对提取剂（A）、投料比（B）、提取时间（C）三因子在三水平上进行优选，因素水平见表1。

表 1 L9（33） 因素水平表

精密称取1.0 g的牡丹籽皮样品，置于50 mL三角瓶中，加入一定体积和浓度的乙醇溶液，提取一定时间，过滤，残渣用50%乙醇洗涤2次，过滤，合并滤液，置于100 mL容量瓶中，以50%乙醇定容至100 mL作为样品溶液待测。

1.2.3 牡丹籽皮总黄酮的测定

取上述待测样品溶液1 mL，按标准曲线的测定方法进行测定，得出牡丹籽皮中总黄酮浓度。样品中黄酮含量按式（1）进行计算。

其中，A为测定用样液中总黄酮含量，mg；m为样品质量，g；V1为样品配成溶液时的体积，mL；V2为测定用样液体积，mL。

2 结果与讨论

为全面考察影响牡丹籽皮总黄酮的提取因素，设计三因子三水平的正交试验，结果见表2。

表2 正交试验直观分析结果表

由直观分析结果可确定，超声波提取牡丹籽皮总黄酮的最优提取条件为：A1B2C2，即50%乙醇溶液，料液比1∶20，提取时间1.5 h。各因子对提取率的影响依次为：提取剂＞提取时间＞投料比。在最佳超声提取条件下所得牡丹籽皮总黄酮提取物含量为7.8%。

目前市面上有许多产品为保持产品营养价值和提高产品稳定性在食品中添加合成抗氧化剂，如特丁基对苯二酚（TBHQ）、丁基羟基茴香醚（BHA），这些抗氧化剂在保持产品质量上有着显著效果，但同时对人体的健康有着潜在的威胁。因此，天然抗氧化剂越来越为人所熟知和喜欢，牡丹籽皮总黄酮的提取也就存在着研究的意义。牡丹籽皮作为一种副产品，很具开发潜力。目前牡丹籽皮总黄酮的提取方法有很多，每种方法都有各自的优点，但也存在着提取液量大、溶剂回收率低、成本高等缺点[6]。本研究采用超声法提取牡丹籽皮总黄酮，提取速度快、耗能低、目标成分提取效率高，为进一步研究牡丹籽皮总黄酮的提取提供了理论依据，同时对于牡丹的资源化利用，牡丹籽皮的废物利用，具有巨大的经济价值和环保价值。

参考文献：

[1]窦勇博.牡丹花黄酮的抗氧化活性研究[J].中国果菜，2016（4）：23-36.

[2]PCH Hollman，MB Katan. Dictary Flavonoids: Intake,Health effects and Bioavailability[J].Food and Chemical Toxicology，1999（9-10）：937-942.

[3]朱 丹，袁 芳，孟 坤等.黄酮类化合物的研究进展[J].中华中医药杂志，2007（6）：387-389.

[4]张 俞，刘婷婷，刘 洋，等.蒙古栎种壳多酚的超声输助提取及抗氧化能力[J].植物研究，2010（5）：623-628.

[5]林 平，张 莹，祖元刚，等.核桃楸叶片中总黄酮的最佳提取工艺研究[J].植物研究，2007（5）：616-618.

[6]孟庆焕，王 化，王洪政，等.牡丹种皮黄酮提取及对ABTS自由基清除作用[J].植物研究，2013（4）：504-507.