吲哚胺2，3-双加氧酶的表达与宫颈癌发生和病理进程的关系研究

李华强　郭春芳　谢黎明



吲哚胺2，3-双加氧酶的表达与宫颈癌发生和病理进程的关系研究

李华强郭春芳谢黎明

【摘要】目的探讨吲哚胺2，3-双加氧酶(IDO)的表达情况与女性宫颈癌的发生与病理进程的相关性。方法

选取宫颈癌手术治疗后的石钠组织标本75例(宫颈癌组)，宫颈上皮瘤变Ⅰ级标本30例(CINⅠ级组)、宫颈上皮瘤变Ⅱ～Ⅲ级标本30例(CINⅡ～Ⅲ级组)、体检收集的正常宫颈标本30例(正常组)，采用免疫组织化学法检测各组样本中的IDO阳性表达率，并追踪观察IDO表达与宫颈癌患者病理及生存与后的关系。结果宫颈癌组标本的IDO阳性表达率显著的高于CINⅠ级组、CINⅡ～Ⅲ级组和正常组(P＜0.05) ; CINⅡ～Ⅲ级组IDO阳性表达率显著的高于正常组(P＜0.05)。低分化宫颈癌患者、Ⅲ+Ⅳ期宫颈癌患者、发生淋巴结转移的宫颈癌患者的IDO阳性率表达显著的增高，IDO阳性表达与患者的分化程度、FIGO分期、淋巴结转移具有一定的关系(P＜0.05)。经过36个月的随访，IDO阳性表达53例患者中有7例死亡、2例失访，IDO阴性表达患者22例中有3例死亡，1例失访，IDO表达阳性与阴性患者的3年病死率差异无统计学意义(P＞0.05) ; IDO阴性表达患者的3年生存中位时间35.4个月与IDO阳性表达患者的34.2个月差异无统计学意义(P＞0.05)。结论IDO在宫颈癌组织中高表达，与宫颈癌的分化程度、FIGO分期、淋巴结转移具有一定的关系，与患者的3年生存预后关系不显著，需进一步延长随访时间进行观察。

【关键词】吲哚胺2，3-双加氧酶;宫颈癌;病理进程

作者单位: 401320重庆市巴南区人民医院病理科(李华强、郭春芳)，妇科(谢黎明)

宫颈癌为近年来严重威胁已婚女性生命健康的重要生殖系统恶性肿瘤，随着宫颈常规筛查的普及，宫颈癌的临床检出率逐年升高。相关基础领域研究证实，宫颈上皮局部组织的免疫调节异常可能显著参与到了宫颈上皮来源恶性肿瘤的发生发展过程［1］。吲哚胺2，3-双加氧酶(IDO)于1963年首次于兔子肠道中发现，并被证实与多种自身免疫性疾病、移植免疫、肿瘤免疫以及母胎免疫耐受相关［2，3］，部分学者认为IDO在宫颈癌的发生发展过程中参与到了肿瘤细胞免疫逃逸等过程［4］，但迄今无明确临床研究证实。本次研究重在分析IDO的表达情况与女性宫颈癌的发生与病理进程的相关性，报告如下。

1　资料与方法

1.1一般资料选取我院妇科收集的宫颈癌手术治疗后的石蜡组织标本75例(宫颈癌组)，宫颈上皮瘤变Ⅰ级标本30例(CINⅠ级组)、宫颈上皮瘤变Ⅱ～Ⅲ级标本30例(CINⅡ～Ⅲ级组)、体检收集的正常宫颈标本30例(正常组)。宫颈癌组75例患者，年龄33～69岁，平均年龄(48.5±10.6)岁;鳞癌67例、腺癌8 例;国际妇产联盟(FIGO)分期:Ⅰ期31例、Ⅱ期20例、Ⅲ期17例、Ⅳ期7例;淋巴结转移17例、未发生淋巴结转移58例。CINⅠ级组30例患者，年龄30～68岁，平均年龄(46.3±9.6)岁。CINⅡ～Ⅲ级组30例患者，年龄29～65岁，平均年龄(47.5±10.4)岁。正常组30例，年龄26～63岁，平均年龄(45.2±10.5)岁。4组标本的年龄构成差异无统计学意义(P＜0.05)。

1.2纳入与排除标准

1.2.1纳入标准:①宫颈癌患者、宫颈上皮瘤变患者的诊断均经过手术后病理标本检查证实;②正常组标本来自于我院女性体检取活组织标本经病理学检查证实为正常宫颈组织;③宫颈癌患者、宫颈上皮瘤变患者术前未接受相关治疗;④对宫颈癌患者进行了随访观察。

1.2.2排除标准:①合并其他部位肿瘤的患者;②术前接受过放疗、化疗的宫颈癌患者。

1.3实验方法标本放置于90℃烤箱中烘烤25 min，二甲苯溶液浸泡2次，5 min/次，采用不同浓度的乙醇水化后PBS洗涤3次，5 min/次，过氧化氢溶液室温孵育10 min，柠檬酸缓冲盐进行热抗原修复，之后分别加入一抗和二抗(抗体均采用PBS缓冲液1∶100稀释配置，一抗以及二抗均购自南京凯基生物科技有限公司)。DAB显色后，采用苏木素复染、脱水、透明、封片，显微镜下观察。

1.4免疫组织化学法结果判定标准免疫组织化学法的结果判定标准，IOD阳性表达为细胞质内棕黄色颗粒，按照着色强度进行分级，无色: 0分;淡黄色: 1 分;棕黄色:2分，褐色:3分;显微镜下染色阳性细胞计数:＜5%:0分;5%～29%: 1分; 30%～70%: 2分;＞ 70%:3分;两个得分项目相加为最终评分，(－)为总分0～1分，阴性表达; (+)为2～3分，弱阳性表达; (++)为4～5分，中阳性表达; (+++)为6分，强阳性表达。阳性表达=弱阳性+中阳性+强阳性。

2　结果

2.1不同组别标本中IDO阳性表达率比较宫颈癌组标本的IDO阳性表达率(62.67%)显著高于CINⅠ级组、CINⅡ～Ⅲ级组和正常组(P＜0.05) ; CINⅡ～Ⅲ级组IDO阳性表达率显著高于正常组(P＜0.05)。见表1。

表1　不同组别标本中IDO阳性表达率比较　例

2.2宫颈癌患者IDO阳性表达与患者的临床病理特征关系低分化宫颈癌患者、Ⅲ+Ⅳ期宫颈癌患者、发生淋巴结转移的宫颈癌患者的IDO阳性率表达显著的增高，IDO阳性表达与患者的分化程度、FIGO分期、淋巴结转移具有一定的关系(P＜0.05)。见表2。

表2　宫颈癌患者IDO阳性表达与患者的临床病理特征关系例

2.3宫颈癌患者的3年随访情况经过36个月的随访，IDO阳性表达53例患者中有死亡7例、失访2例，IDO阴性表达患者22例中有死亡3例，失访1例，IDO表达阳性与阴性患者的3年病死率差异无统计学意义(P＞0.05)。IDO阴性表达患者的3年生存中位时间35.4个月与IDO阳性表达患者的34.2个月差异无统计学意义(χ2=1.084，P＞0.05)。见表3，图1。

表3　IDO表达阳性、阴性患者的3年生存率比较　例(%)

图1　IDO表达阳性、阴性患者的3年生存函数图

3　讨论

宫颈癌为严重威胁女性生命健康的疾病，每年死于宫颈癌的病例可达30万人，多年来基础领域研究以及临床分析研究均在试图寻找宫颈癌的发生机制，进而为临床治疗提供理论基础，然而迄今为止尚无重大发现，但在此过程中部分学者发现，宫颈局部上皮组织微环境中的免疫调节平衡的打破可能为宫颈癌的早期发生发展提供了有利条件，认为肿瘤微环境的改变以及部分细胞因子导致的促免疫逃逸是宫颈癌的重要病因［5，6］。既往研究认为IDO主要分布于子宫内膜腺体和表面上皮细胞、螺旋动脉以及毛细血管内皮［5］，而近年来相关学者进一步研究后发现，IDO在宫颈腺体间质以及输卵管上皮内均存在不同程度的表达，随着对于IDO的免疫逃逸机制的研究的深入，部分研究者发现IDO在宫颈癌鳞状上皮细胞内存在一定程度的表达［4，7］，但并无组织学以及临床分析研究证实，本次研究重在分析IDO的表达情况与女性宫颈癌的发生与病理进程的相关性，进而为宫颈癌的免疫治疗提供一定的理论基础。

笔者发现，不同组别标本中IDO阳性表达率存在明显差异，宫颈癌组标本的IDO阳性表达率显著高于宫颈CIN组，而宫颈CIN的病例其IDO的阳性表达率明显高于正常对照宫颈组织，提示IDO随着宫颈病变程度的加深，其阳性表达水平显著增加，部分研究者分析认为，肿瘤细胞刺激巨噬细胞和树突细胞后，可以产生IDO进而改变局部色氨酸以及其代谢产物的浓度，并抑制T细胞的肿瘤抗原的特异性克隆增殖［6，8］，提示宫颈病变组织通过表达IDO来抑制T细胞的肿瘤杀伤性作用，协助肿瘤细胞逃脱免疫监察、促进细胞增殖和侵袭转移［9］;笔者对于宫颈癌患者IDO阳性表达与患者的临床病理特征关系也证实了这一点，低度分化、中晚期期宫颈癌、发生淋巴结转移的患者，其IDO表达阳性率明显增加，在此过程中，溶细胞性T淋巴细胞相关抗原与DC细胞表明的B7受体相结合，通过色氨酸的耗竭来抑制CD8+T淋巴细胞的增殖，进而发挥负性免疫调节作用，诱导其对于局部宫颈上皮环境的免疫耐受能力［10］。Ferns等［11，12］研究也发现，在发生腹主动脉旁淋巴结以及髂总淋巴结转移的宫颈癌患者中，IDO的表达与淋巴结转移具有较好的一致性，同时其在中晚期宫颈癌患者特别是ⅡB期以后的患者，IDO的阳性表达水平的增高能在一定程度上预测患者远期临床预后。但笔者发现本次临床研究中相关随访结果并未提示IDO具有明显的预后价值，IDO阳性组以及IDO阴性组的3年病死率差异无统计学意义(P＞0.05)，同时其术后生存时间也并无明显差异，提示相关结论仍需要进一步证实。

IDO在宫颈癌组织中高表达，与宫颈癌的分化程度、FIGO分期、淋巴结转移具有一定的关系，表明IDO可能显著参与到了宫颈癌的发生发展过程，对于IDO在宫颈癌发生发展过程中的免疫耐受以及免疫逃逸的研究，将可能为宫颈癌的免疫治疗提供新的思路。

参考文献

1徐红园，路喜安.IDO和FoxP3表达与宫颈癌发生和病理进程关联的分析.江苏医药，2014，23:103-104.

2魏薇，罗殿中，党裔武.宫颈癌组织中FOXP3的表达及其意义.右江民族医学院学报，2011，22:132-134.

3王冬冬，王晓黎，林蓓.IDO基因转染对裸鼠体内宫颈癌种植瘤生长的影响.中国医科大学学报，2012，41:201-203.

4 Sucher R，Kurz K，Weiss G，et al.IDO-Mediated tryptophan degradation in the pathogenesis of malignant tumor disease.Int J Tryptophan Res，2010，3:113-120.

5廖琪.IDO在不同宫颈病变组织中的表达及意义.江苏医学，2013，23:283-284.

6蒋艳萍，曹来英，洛若愚.Treg细胞和IDO在HPV感染相关宫颈疾病组织中表达及意义.实用癌症杂志，2012，27:32-35.

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8顾卓伟，狄文，叶薇怡，等.IDO和FoxP3表达与宫颈癌发生和病理进程的相关性.上海交通大学学报(医学版)，2011，33:604-609.

9 Kojima S，Kawana K，Tomio K，et al.The prevalence of cervical regulatory T cells in HPV-related cervical intraepithelial neoplasia (CIN) correlates inversely with spontaneous regression of CIN.Am J Reprod Immunol，2013，69:134-141.

10陈琬玲，杜美翠，师娟，等.宫颈癌组织中IDO表达与外周血中T细胞亚群的相关性研究.武警后勤学院学报(医学版)，2014，17: 18-22.

11Ferns DM，Kema IP，Buist MR，et al.Indoleamine-2，3-dioxygenase (IDO) metabolic activity is detrimental for cervical cancer patient survival.Oncoimmunology，2015，4:81-87.

12 Hibbitts S.TA-CIN，a vaccine incorporating a recombinant HPV fusion protein (HPV16 L2E6E7) for the potential treatment of HPV16-associated genital diseases.Curr Opin Mol Ther，2010，12:598-606.

·论著·

Study on the correlation between the expression of indolakylamine 2，3 dioxygenase and the pathogenesis and pathological process of cervical cancer

LI Huaqiang，GUO Chunfang，XIE Liming.
People’s Hospital of Ba’nan District， Chongqing City，Chongqin 401320，China

【Abstract】ObjectiveTo investigate the correlation between the expression of indolakylamine 2，3 dioxygenase (IDO) and the pathogenesis and pathological process of cervical cancer.Methods Seventy－five cases of stone sodium tissue specimens after cervical cancer surgery (cervical cancer group) were collected in Department of Gynaecology and Obstetrics of our hospital，and 30 cases of cervical intraepithelial neoplasia class I (CIN gradeⅠgroup)，30 cases of cervical intraepithelial neoplasia classⅡ～Ⅲ(CIN gradeⅡ～Ⅲgroup)，30 cases of normal cervical tissues (control group)，were collected in the study.The positive expression rates of IDO were detected by immunohistochemical method in all the groups，moreover，the correlation between the expression of IDO and pathological process of cervical cancer，survivorship and prognosis of patients was analyzed.Results The positive expression rates of IDO in cervical cancer group were significantly higher than those in CIN gradeⅠgroup，CIN gradeⅡ～Ⅲgroup，control group (P＜0.05).The positive expression rates of IDO inⅡ～Ⅲgroup were significantly higher than those in control group (P＜0.05).The positive expression rates of IDO in patients with poorly differentiated cervical cancer，patients withⅢ+Ⅳstage cervical cancer，patients with lymph node metastasis，were obviously increased，furthermore，the positive expression rates of IDO were closely correlated to the differentiation degree of cervical cancer，FIGO staging and lymph node metastasis (P＜0.05).After 36－month follow up，among 53 patients with positive expression of IDO，7 patients died and 2 patients were failure to follow up，among 22 patients with negative expression of IDO，3 patients died and 1 patient was failure to follow up.There was no significant difference in 3－year mortality between patients with positive expression of IDO and patients with negative expression of IDO (P＞0.05).The 3－year survival neutral time in patients with negative expression was 35.4 months，which in patients with positive expression of IDO was 34.2 months，there was no significant difference between them (P＞0.05).ConclusionThe high－expression of IDO is observed in cervical cancer，which is correlated to differentiation degree of cervical cancer，FIGO staging，lymph node metastasis at certain extent，however，which is not related with 3－year survival prognosis of patients，it is need to lengthen follow up time to observe further.

【Key words】indolakylamine 2，3 dioxygenase; cervical carcinoma; pathological process

(收稿日期:2015－09－25)

doi:10.3969/j.issn.1002－7386.2016.05.003

【中图分类号】R 711.74

【文献标识码】A

【文章编号】1002－7386(2016) 05－0653－03