HPLC法测定不同厂家盐酸环丙沙星片的含量及其溶出度*

刘秋月　王　莉　齐永秀　李　珂

(泰山医学院药学院，山东 泰安　271016)



HPLC法测定不同厂家盐酸环丙沙星片的含量及其溶出度*

刘秋月王莉齐永秀李珂

(泰山医学院药学院，山东 泰安271016)

摘要：目的建立盐酸环丙沙星的高效液相色谱测定法，对盐酸环丙沙星片剂进行含量及溶出度测定。方法采用高效液相色谱法,色谱柱为HypersilODS2-C(18)(250 mm×4.6 mm,5 μm)，流动相为0.05 mol/l枸橼酸溶液-甲醇(70∶30)，用三乙胺调pH值为3.0,流速为1.0 ml/min ，检测波长为276 nm,进样量20 μl。结果环丙沙星标准溶液在3.20~12.80 μg/ml范围内浓度与峰面积线性关系良好(r=0.9994)；盐酸环丙沙星片的平均回收率分别为94.72%(RSD=0.75%,n=9)，93.72% (RSD=0.65%,n=9)，93.08 %(RSD=0.83%,n=9) ；浙江亚太药业股份有限公司、JINGXIN、济南东方制药厂、山东健康制药有限公司的盐酸环丙沙星片的标示量的百分含量分别为94.75%、101.82%、98.02%、103.2%；浙江亚太药业股份有限公司、JINGXIN、济南东方制药厂的盐酸环丙沙星片的溶出度分别为106.70% 、96.84% 、109.48%。结论该含量测定方法准确，快速，有效，重现性较好，可用于盐酸环丙沙星片含量及其溶出度的测定。

关键词：盐酸环丙沙星；HPLC法；含量测定；溶出度

盐酸环丙沙星为第三代喹诺酮类抗菌药，为广谱抗菌药。原料药，片剂，胶囊，滴眼液等均已收载于《中国药典》2010年版二部，其含量测定均采用HPLC法[1]。本实验采用HPLC法对不同厂家的盐酸环丙沙星片进行含量及溶出度的测定，并进行了方法性考察，方法简便，准确，重现性好，灵敏度高。

1仪器与试剂

1.1仪器

岛津高效液相色谱仪(岛津国际贸易有限公司)；ZRS-8G 智能溶出试验仪(天大天发有限公司)；UV-2450/2550 紫外分光光度仪器(岛津国际贸易有限公司)；KQ-500E型医用超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；GR-202型电子分析天平(赛多利斯科学仪器(北京)有限公司)；TGL-16G台式离心机(上海安亭科学仪器厂);PHS-29A型离子酸度计(上海精密科学仪器有限公司)。

1.2材料和试剂

环丙沙星对照品(中国药品生物制品检定所，84.9% 批号：130451-200302)；盐酸环丙沙星片(浙江亚太药业股份有限公司，国药准字H33021281，批号：111002)；盐酸环丙沙星片(JINGXIN，国药准字 H33020388批号：1109192);盐酸环丙沙星片(薄膜衣片)(济南东方制药厂，国药准字 H37022087批号：041103)；盐酸环丙沙星片(山东健康药业股份有限公司，国药准字 H37022727批号：0408002)；甲醇 色谱纯(天津市凯通化学试剂有限公司)；冰乙酸分析纯(天津市富宇精细化工有限公司)；三乙胺分析纯(天津市富宇精细化工有限公司)；柠檬酸分析纯(天津市河东区红岩试剂厂)；盐酸分析纯(36%~38% 莱阳市康德化工有限公司)；蒸馏水(试验室自制双蒸水)。

2试验方法与结果

2.1溶液配制

2.1.1对照品溶液的制备精密称取环丙沙星对照品10.0 mg置50 ml容量瓶中，加1~2滴冰乙酸并用甲醇使溶解，稀释至刻度，摇匀，超声混匀10 min，过有机微孔滤膜，即得。取2.5 ml 用纯水稀释至25 ml，即得。

2.1.2供试品溶液的制备取盐酸环丙沙星片20片，精密称定，研细，精密称取20.0 mg 置于25 ml 容量瓶中，加纯水稀释至25 ml，摇匀，并超声溶解10 min 然后过微孔滤膜，即得。取2.5 ml 用纯水稀释至25 ml ，取3 ml用纯水稀释至25 ml ，即得。

2.2方法学考察和样品测定

2.2.1色谱条件和系统适用性试验色谱柱：Hypersil ODS (250 mm × 4.6 mm，5 μm)(伊利特公司)；流动相：0.05 mol/l柠檬酸溶液-甲醇(70∶30)用三乙胺调pH为3.0 ；流速：1.0 ml/min；检测波长：276 nm。在此条件下，分别进蒸馏水空白，环丙沙星对照液、盐酸环丙沙星供试品溶液，理论塔板数按环丙沙星峰计不低于2000。

2.2.2专属性试验取空白溶液、对照品溶液、供试品溶液适量，按“2.2.1”项下色谱条件进样，记录色谱，详见图1。由图1可见，空白溶液色谱在对照品色谱相应位置处无吸收峰，表明在该试验条件下，制剂辅料对测定结果均无干扰，专属性较好。

(a) 空白溶剂色谱图

(c) 盐酸环丙沙星样品色谱图

2.2.3线性关系的考察

精密称取环丙沙星对照品10.0 mg置于50 ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度并加1~2滴冰醋酸，摇匀。精密吸取上述溶液2.5 ml用纯水稀释至25 ml；再精密吸取上述溶液4 ml、6 ml、12 ml、14 ml、16 ml，分别置于25 ml容量瓶中，用纯水定容，摇匀。按上述色谱条件进样20 μl，测定峰面积A，以A对浓度C作线性回归，得回归方程：A=2×108C-49619，r=0.99945，表明环丙沙星在3.20~12.80 μg/ml范围内浓度与峰面积线性关系良好。

2.2.4精密度试验取线性关系项下的5号溶液，以“2.2.3”项下的方法，取20l进样，连续进样6次，记录色谱图，计算峰面积。其RSD=0.828% ，表明本法精密度较好。

2.2.5稳定性试验取东方制药厂的盐酸环丙沙星片，按“2.1.2”项下的方法制备供试品溶液，按“2.2.1”项下的色谱条件进样，于室温下放置，分别在0，2，4，7，12，24 h不同时间段内重复进样3次，每次进样20 μl，测定盐酸环丙沙星峰面积，RSD分别为0.52%，1.50%,0.79%,2.21%,1.79%,2.61%,表明供试品溶液24 h内基本稳定。

2.2.6重复性试验精密称取同一批号的盐酸环丙沙星片6份，按“2.1.2”项下的方法制备供试品溶液，依法测定峰面积，计算平均标示量的百分含量为102.02%，RSD为1.37%。

2.2.7回收率试验分别按“2.1.2”、“2.1.1”项下的方法制备供试品溶液和对照品溶液。取供试品溶液9份，分别精密加入环丙沙星的对照品适量(约相当于制剂中盐酸环丙沙星含量的80%，100%，120%)，按“2.2.1”项下色谱条件进样20 ?l，测定其含量，计算其回收率。盐酸环丙沙星片的平均回收率分别为94.72%(RSD=0.75%)，93.72% (RSD=0.65%)，93.08 %(RSD=0.83%)。

2.2.8样品的含量测定取4种样品各适量，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，并按“2.2.1”项下色谱条件进样测定，计算标示百分含量及RSD。浙江亚太药业股份有限公司、JINGXIN、济南东方制药厂、山东健康制药有限公司的盐酸环丙沙星片的标示量百分含量分别为94.75%、101.82%、98.02%、103.2%，RSD分别为0.68%、1.38%、1.76%、0.63%。

2.2.9样品溶出度的测定取本品，照溶出度测定法(按中国药典 2010版 附录X C第二法)，以0.1 mol/l盐酸溶液900 ml为溶出介质，转速为每分钟50转，依法操作，经30 min时，取溶液10 ml，滤过，精密量取续滤液1 ml，置25 ml量瓶中，加0.1 mol/l盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，然后取3.5 ml, 置25 ml量瓶中，加0.1 mol/l盐酸溶液稀释至刻度，摇匀, 即得，然后按“2.2.1”项下的色谱条件测定其溶出度。其结果见表1，其溶出度均在标示量的80%以上，符合中国药典 2010版规定[2]。

表1　浙江亚太药业股份有限公司，JINGXIN ，济南东方制药厂盐酸环丙沙星片的溶出度结果

3讨论

3.1流动相的选择

本实验中，流动相选用甲醇和0.05 mol/l柠檬酸溶液。0.05 mol/l柠檬酸溶液：甲醇=85∶15条件下检测不到色谱峰；0.05 mol/l柠檬酸溶液：甲醇=80∶20条件下色谱峰太宽；0.05 mol/l柠檬酸溶液：甲醇=70∶30条件下峰严重拖尾且保留时间太长；0.05 mol/l柠檬酸溶液：甲醇=70∶30，用三乙胺调pH=3.0条件下，色谱峰峰形对称，保留时间适中，确定流动相为：0.05 mol/l柠檬酸溶液：甲醇=70∶30并用三乙胺调pH=3.0；同时通过观察色谱峰的峰高可知当C=0.00256 mg/ml S/N约为13，而当C=0.032 mg/ml,S/N约为120 ，所以其浓度约为0.003 mg/ml~0.03 mg/ml。

3.2影响因素

环丙沙星是两性物质，在流动相中能解离，对组分的保留和峰形都会造成不良影响，此时在流动相中加入三乙胺以消除柱表面硅羟基的作用，同时将流动相的pH调至3.0来抑制解离或用来改变峰形[3]。制剂在体外溶出和体内吸收好坏，除和药物本身性质有关外，还受药厂生产工艺的影响。分析部分厂家提供的片剂处方发现，大部分厂家采用淀粉和羟甲基淀粉钠作为崩解剂，部分厂家还加入了微晶纤维素和交联聚维酮。虽然采用相同的崩解剂但药物的溶出行为仍存在差异[4]。有文献报道[5]以淀粉和羟甲基淀粉钠作崩解剂采用内外加的方法，崩解效果优于内加或外加。由此可知，药厂生产工艺的技术含量会直接决定药品的内在质量。

参考文献：

[1]赫爱平，张亚杰，王巍，等. 盐酸环丙沙星片含量测定方法的改进[J].中国药事，2004,18(8)：497-498.

[2]中国药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[S]. 北京：化学工业出版社，2010：412-413，720，722.

[3]孙效东，曲芬. 胎儿软骨中环丙沙星药物浓度RP—HPLC测定法[J].药物分析杂志,1998,18(6):380-384.

[4]杨倩，郭福庆，曹晓云，等.国产盐酸环丙沙星片及胶囊溶出度比较[J].药物分析杂志，2010，30(8)：1578-1581.

[5]卢建云，陈仙.盐酸环丙沙星片溶出工艺研究[J].中国药业，2007，16(1)：37.

Determination of ciprofloxacin hydrochloride tablets in different factories content and dissolution by HPLC

LIUQiu-yueWANGLiQIYong-xiuLIKe

( Pharmacy Department，Taishan Medical University，Taian 271016，China)

Abstract:Objective: To establish a HPLC method for Ciprofloxacin hydrochloride tablets，to determin content and dissolution of Ciprofloxacin hydrochloride Tablets. Method: HPLC method was adopted, The determination was performed on HypersilODS2-C(18) (250 mm×4.6 mm, 5μm) column with mobile phase consisted of 0.05 mol/l Citric acid solution-methanol (70∶30) ，used triethylamine adjust the solution pH3.0，at flow rate of 1.0 ml/min, the detection wavelength was set at 276 nm，the sample size is 20 μl.Results: Ciprofloxacin standard solution has good Linear relationship between concentration and peak areain in the range of 3.20~12.80 μg/ml(r=0.9994)；Average recovery rate of ciprofloxacin hydrochloride tablets were 94.72%(RSD=0.75%,n=9)，93.72% (RSD=0.65%,n=9)，93.08%(RSD=0.83%,n=9) ；Percentage of the labeled amount of Ciprofloxacin hydrochloride tablets in Zhejiang Asia Pacific pharmaceutical Limited by Share Ltd，JINGXIN，Ji'nan Oriental pharmaceutical factory，and Shandong Health Pharmaceutical Co., Ltd. were 94.75%，101.82%，98.02%，103.2%；Dissolution degree of ciprofloxac hydrochloride tablets in Zhejiang Asia Pacific pharmaceutical Limited by Share Ltd.，JINGXIN and Ji'nan Oriental pharmaceutical factory were 106.70%，96.84%，109.48%. Conclusion: The content determination method is accurate, fast, effective and reproducible,and can be used to determine the content and dissolution rate of ciprofloxacin hydrochloride tablets.

Key words:ciprofloxacin hydrochloride; HPLC ; content determination; dissolution rate

(收稿日期2015-11-19)

doi:10.3969/j.issn.1004-7115.2016.02.002

中图分类号：R917

文献标识码：A

文章编号：1004-7115(2016)02-0124-03

*作者简介：刘秋月( 1991— ) , 女, 山东德州人，泰山医学院在读硕士。通讯作者 ：李珂，女，副教授，研究方向：药物分析。E-mail: kli@ tsmc. edu. cn。