Tp7/Treg相关细胞因子在肠白塞病发病机制中的作用

罗　丹　申　艳　邹　峻　管剑龙

(复旦大学附属华东医院免疫风湿科　上海　200040)



Tp7/Treg相关细胞因子在肠白塞病发病机制中的作用

罗丹申艳邹峻管剑龙△

(复旦大学附属华东医院免疫风湿科上海200040)

【摘要】目的通过检测血清Tp7/Treg相关细胞因子水平,探讨Tp7/Treg在肠白塞病(Behcet′s disease,BD)发病机制中的作用。方法参照1987年日本学者制定的BD诊断标准和2009年韩国学者提出的肠BD诊断标准,共入选肠BD 32例,同时选择21例性别、年龄匹配的健康志愿者作为对照。疾病活动度采用2011年韩国学者制定的肠BD活动性评分系统(DAIBD)。采用ELISA法检测血清IL-17、IL-23、IL-35和IL-10。应用SPSS 17.0软件统计分析。结果与健康人比较,肠BD组Tp7细胞相关的IL-17[(581.77±260.37)pg/mL vs.(172.72±33.44)pg/mL,P=0.000]和IL-23[(588.31±192.14)pg/mL vs. (340.84±112.26)pg/mL,P=0.000]水平升高,Treg细胞相关的IL-35[(875.86±436.12)pg/mL vs.(183.19±60.84)pg/mL,P=0.000]和IL-10[(463.85±299.96)pg/mL vs.(84.47±51.06)pg/mL,P=0.000]水平升高。IL-17和IL-23水平与患者外周血白细胞计数及DAIBD评分呈正相关。结论Tp7/Treg细胞可能在肠BD的发生和发展过程中发挥一定作用。

【关键词】肠白塞病；临床特征；Th7/Treg细胞；细胞因子

*This work was supported by Shanghai Municipality Health System Key Joint Research Project on Important Diseases of the Second Batch (2014ZYJB0010).

白塞病(Behcet′s disease,BD)又称丝绸之路病,以复发性口腔溃疡、生殖器溃疡和皮肤红斑为常见症状,可累及眼睛、胃肠道、中枢神经、心脏、全身大小血管、关节和血液等多个系统。肠BD是比较常见的一种重症类型[1-2],临床表现多种多样,且缺乏特异的实验室指标,致病机制至今未明。既往研究发现,肠BD常发生在东亚人群,欧美罕见[2-3],以回盲部单发、直径>1 cm的类圆形溃疡为主,也可同时累及结肠或十二指肠[4-5]。肠BD早期可出现轻微腹部症状,腹痛、腹泻常见,也可无先兆症状,突发肠出血、肠穿孔或类似阑尾炎急腹症。本研究总结肠BD患者临床资料、检测血清中Tp7/Treg相关细胞因子表达水平的变化,同时分析Tp7/Treg相关细胞因子与疾病活动度和实验室指标的相关性,初探Tp7/Treg细胞在肠BD发病机制中的作用。

资 料 和 方 法

病例来源收集复旦大学附属华东医院免疫风湿科2012年10月至2014年12月住院的430例典型BD患者临床资料、血清标本,从中选择肠BD 32例,另设健康志愿者21人作为对照,性别与年龄相匹配。本研究得到复旦大学附属华东医院伦理委员会批准,入选者均签署知情同意书。

诊断标准BD诊断参照1987年日本学者制定的BD诊断标准[6]。肠BD病例均行消化道内窥镜检查,诊断参照Cheon等[7]于2009年提出的标准,回肠末端有典型的椭圆形大溃疡或在小肠或结直肠有溃疡或炎症,且临床表现达到BD诊断标准。疾病活动度评分标准采用2011年Cheon等[8]提出的肠BD活动性评分系统(disease activity index for intestinal BD,DAIBD),评价标准包括患者一般状况、发热、肠外症状(包括口腔溃疡、生殖器溃疡、眼炎、皮肤受损和关节炎)、腹痛、腹部包块、腹部柔韧度、消化系统并发症(包括瘘、穿孔、脓肿和梗阻)和稀便次数。

排除标准排除系统性红斑狼疮、其他系统性血管炎等结缔组织病和以其他内脏损害为主要表现的BD亚型患者。同时排除克罗恩病、溃疡性结肠炎、肠结核、应激性溃疡、药源性溃疡(糖皮质激素或非甾体类抗炎药)和淋巴瘤等其他疾病。

血清收集与细胞因子检测本研究收集肠BD临床资料的同时留取血清2 mL,分装于冻存管,-80 ℃保存备用。IL-17、IL-23、IL-35和IL-10的检测采用酶联免疫吸附法(ELISA),试剂盒均购自Bio-Swamp公司,严格按照说明书流程操作。

结果

临床资料本研究共纳入肠BD32例,男性17例,女性15例,平均年龄(33.8±13.7)岁,平均病程(7.1±6.1)年,32例肠BD均有回盲部溃疡,其中回盲部单发溃疡16例(11例直径大于1cm),回盲部多发溃疡7例,回盲部伴横结肠溃疡6例,回盲部伴全结肠溃疡3例(图1～2)。多数肠BD患者消化道症状轻微,可表现为右下腹麦氏点压痛,少数患者有腹泻或者粪便常规潜血阳性,2例以肠穿孔、肠出血为首发症状。

32例肠BD患者中,口腔溃疡32例(100.0%),生殖器溃疡26例(81.3%),食管溃疡1例(3.1%),胃十二指肠溃疡2例(6.3%),结节性红斑7例(21.88%),多形性红斑1例(3.13%),假性毛囊炎9例(28.13%),针刺反应阳性4例(12.5%),神经系统受累2例(6.3%),关节炎/关节痛10例(31.3%),静脉血栓1例(3.1%)。所有纳入肠BD患者均无葡萄膜炎、视网膜炎,无动脉狭窄、动脉瘤及心脏瓣膜累及。

实验室检查示(表1)：肠BD组与健康对照组在性别、年龄上的差异均无统计学意义(P>0.05)。两组间外周血WBC、Hb、ESR 和CRP的差异均有统计学意义(P<0.05),而PLT、免疫球蛋白和补体C3的差异均无统计学意义(P>0.05)。

Tp7/Treg相关细胞因子检测与健康人比较,肠BD组患者IL-17、IL-23、IL-35和IL-10表达均显著升高(P<0.001,表2)。

相关性分析将患者外周血WBC、Hb、PLT、ESR和CRP水平以及DAIBD评分与IL-17、IL-23、IL-35和IL-10水平进行相关性分析(表3)。

表1　肠BD组与健康对照组一般资料和实验室指标比较Tab 1　Demographic features and laboratory findings in±s)

表2　肠BD和健康对照Tp7/Treg相关细胞因子比较

表3　Tp7/Treg相关细胞因子与化验指标和DAIBD评分相关性分析

(1)Pearson′s correlation analysis.

讨论

肠BD是以消化道损害为主要表现的BD临床亚型,常发生回盲部溃疡,严重患者可出现横结肠溃疡甚至全结肠的溃疡[4]。少数患者以肠穿孔为首发症状,手术治疗后刀口长期不愈合甚至形成吻合口瘘。但肠BD早期临床表现不典型,容易与炎症性肠病等混淆。目前有关肠BD的研究较少,日本曾报告BD患者肠道累及可达50%[9-10]。BD发病可能与HLA-B51、感染及环境因素相关[11],但具体机制尚待进一步研究。

Tp7/Treg细胞在多种自身免疫病中发挥调节作用[12-13],但在BD患者中研究较少[14]。Tp7细胞产生的IL-17可以使中性粒细胞聚集,导致炎性反应和组织损伤。IL-23则在Tp7细胞的稳定和增殖过程中发挥着重要作用[15]。Treg细胞具有免疫负向调节作用,Treg细胞分泌的IL-35、IL-10和TGF-β等可抑制其他T细胞活性,介导免疫耐受和免疫自稳。Geri等[16]研究发现,BD患者Tp7细胞明显增加,而不是既往认为的Tp细胞,提示Tp7/Treg细胞失衡在BD发病过程中可能发挥作用。有研究显示,环孢素主要通过抑制IL-17表达来治疗BD,临床佐证了IL-17在BD发病过程中的作用[17-18]。Ferrante等[19]发现,肠BD患者的肠溃疡部位Tp7/Tp细胞比例降低,推测Tp和Tp7细胞可能与肠BD有关。本研究发现,肠BD患者血清IL-17和IL-23水平均高于健康人,肠BD患者IL-17、IL-23水平与外周血WBC、DAIBD评分呈正相关,提示肠BD患者Tp7细胞显著活跃,处于炎性反应激活状态。目前生物制剂(如TNF-α拮抗剂Infliximab)已用于肠BD的治疗,并体现出一定的临床价值[20]。Secukinumab是IL-17的单克隆抗体,可选择性地结合IL-17A,近期研究提示其可用于治疗强直性脊柱炎[21]和中、重度银屑病[22]。IL-23拮抗剂Guselkumab可抑制Tp7细胞活性,有效控制银屑病皮损症状[23]。因此,Secukinumab和Guselkumab用于肠BD具有治疗前景,有必要进行下一步临床验证。

本研究显示,与健康人比较,肠BD患者血清Treg相关细胞因子IL-10和IL-35过表达,与既往报道不一致[16],推测可能与该组肠BD病例肠溃疡均处于活动期,Tp7细胞介导的炎性反应剧烈,促使Treg细胞激活,IL-10、IL-35分泌增加，参与免疫炎症负反馈调节有关。本研究结果初步提示,Tp7/Treg相关细胞因子在BD肠道损害过程中可能发挥一定作用,具体机制尚有待进一步研究。

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The role of Tp7/Treg in the pathogenesis in patients with intestinal Behcet′s disease

LUO Dan, SHEN Yan, ZOU Jun, GUAN Jian-long△

(DepartmentofImmunologyandRheumatology,HuadongHospital,FudanUniversity,Shanghai200040,China)

【Abstract】ObjectiveTo discuss the role of Tp7/Treg in the pathogenesis of intestinal Behcet′s disease (BD) by detecting the expressions of serum Tp7/Treg related cytokines.MethodsAccording to the diagnostic criteria of BD developed by Japaness scholars in 1987 and the diagnostic criteria of intestinal BD developed by korean scholars in 2009,32 patients with intestinal BD were recruited,and 21 healthy volunteers were selected as control.Disease activity was evaluated by DAIBD developed by Korean scholars.Serum IL-17,IL-23,IL-35 and IL-10 were detected using ELISA.SPSS 17.0 software was used to analyze the data.ResultsCompared to healthy control,serum levels of IL-17 [(581.77±260.37) pg/mL vs.(172.72±33.44) pg/mL,P=0.000] and IL-23 [(588.31±192.14) pg/mL vs.(340.84±112.26) pg/mL,P=0.000] were increased in intestinal BD group; Treg related cytokines IL-35 [(875.86±436.12) pg/mL vs.(183.19±60.84) pg/mL,P=0.000] and

IL-10[(463.85±299.96) pg/mLvs.(84.47±51.06) pg/mL,P=0.000] were also overexpressed.The levels of IL-17 and IL-23 were positively correlated with the white blood cell count and DAIBD score.ConclusionsTp7/Treg cells may play a role in the pathogenesis of intestinal BD patients.

【Key words】intestinal BD;clinical characteristics;Tp7/Treg cell;cytokines

(收稿日期:2015-08-14;编辑:段佳)

【中图分类号】R597+.9

【文献标识码】A

doi:10.3969/j.issn.1672-8467.2016.02.005

上海市卫生系统第二批重要疾病联合攻关重点项目(2014ZYJB0010)

△Corresponding authorE-mail:guanjianlong@medmail.com.cn