龙葵多糖对四氯化碳致小鼠肝损伤的保护作用及其机制

郑岳，孙伟，卢坤玲，郑继尧，王益民，李健( 秦皇岛市第一医院，河北秦皇岛066000； 燕山大学)



·基础研究·

龙葵多糖对四氯化碳致小鼠肝损伤的保护作用及其机制

郑岳1，孙伟1，卢坤玲1，郑继尧1，王益民1，李健2(1 秦皇岛市第一医院，河北秦皇岛066000；2 燕山大学)

摘要：目的探讨龙葵多糖对四氯化碳(CCl4)所致肝损伤的保护作用及其机制。方法选择昆明种小鼠40只，随机均分为百赛诺组、龙葵多糖低剂量组、龙葵多糖高剂量组、对照组、模型组。百赛诺组、龙葵多糖低剂量组、龙葵多糖高剂量组分别予百赛诺200 mg/kg、龙葵多糖200 mg/kg、龙葵多糖400 mg/kg灌胃，对照组、模型组给予等体积生理盐水灌胃，均连续灌胃14天。末次灌胃1 h，对照组腹腔注射豆油溶液，其余四组腹腔注射含2% CCl4的豆油溶液。禁食12 h，龙葵多糖低剂量组、龙葵多糖高剂量组分别予龙葵多糖200、400 mg/kg灌胃，百赛诺组予百赛诺200 mg/kg灌胃，对照组和模型组予等体积生理盐水灌胃。灌胃30 min，摘除眼球取血，检测血清AST、ALT；断颈处死小鼠，取肝脏，检测肝脏指数及肝组织匀浆脂质过氧化产物(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)。结果与对照组比较，模型组肝脏指数增加(P<0.01)；龙葵多糖高剂量组及百赛诺组肝脏指数均较模型组降低(P均<0.05)。与对照组比较，模型组血清AST、ALT水平均升高，肝组织匀浆SOD水平降低、MDA水平升高(P均<0.05)；与模型组比较，龙葵多糖低、高剂量组及百赛诺组血清AST、ALT水平均降低，肝组织匀浆SOD水平均升高，MDA水平均降低(P均<0.05)。结论龙葵多糖对CCl4所致的肝损伤具有保护作用，其机制可能与增加肝组织抗氧化能力有关。

关键词：肝损伤；龙葵多糖；四氯化碳；抗氧化作用；小鼠

龙葵全草及果实含有红色素、氨基酸、维生素、多糖类、生物碱类等多种物质[1~3]，具有清热消肿、消炎止咳、抗肿瘤等作用[4]，目前已应用于食品、染料、医药等领域[5]。研究表明，龙葵多糖主要通过调节免疫细胞实现对机体的免疫调节，是一种免疫增强剂，通过提高抗氧化酶活性、清除自由基、抑制脂质过氧化而发挥保护生物膜的作用[6]。但龙葵多糖是否具有肝保护作用，国内外鲜见报道。2015年3~6月，本研究观察了龙葵多糖对四氯化碳(CCl4)致小鼠肝损伤的保护作用，现分析结果并探讨其机制。

1材料与方法

1.1材料健康雄性昆明种小鼠40只，6～8周龄，体质量(20±2)g，购自中国医学科学院实验动物中心。颗粒饲料喂养，实验期间自由摄食、饮水。龙葵多糖[制备：取干燥的龙葵全草，加入4倍体积水，微沸浸提5 h，过滤，滤渣重复提取3次，合并3次的水提液。静置去沉淀后浓缩，逐渐加入95%乙醇(1∶4)并不断搅拌，4 ℃静置24 h。抽滤沉淀，分别用无水乙醇、丙酮、石油醚淋洗3次，得到浅黄色粉末状物质，干燥。将其溶于水中，加入等体积Savage液(氯仿∶正丁醇=4∶1)，振荡、混匀、离心，弃下层有机相，重复上述操作10次，将游离蛋白除尽，保留上清液，干燥后称质量。500 g龙葵全草经过上述操作后得到龙葵粗多糖47.1 g(9.42%)]。AST、ALT试剂盒和MDA、SOD试剂盒均购于南京建成生物工程研究所；其他试剂均为国产分析纯。

1.2动物分组及处理所有小鼠适应性喂养1周，随机分为百赛诺组、龙葵多糖低剂量组、龙葵多糖高剂量组、对照组、模型组，每组8只。前三组分别予百赛诺200 mg/kg、龙葵多糖200 mg/kg、龙葵多糖400 mg/kg灌胃，后两组予等体积生理盐水灌胃，灌胃体积均为0.3 mL，均连续灌胃14天。末次灌胃1 h，对照组腹腔注射豆油溶液，其余四组腹腔注射含2% CCl4的豆油溶液，注射体积均为0.2 mL。禁食12 h，龙葵多糖低剂量组、龙葵多糖高剂量组分别予龙葵多糖200、400 mg/kg灌胃，百赛诺组予百赛诺200 mg/kg灌胃，对照组和模型组予等体积生理盐水灌胃。

1.3相关指标观察①血清AST、ALT：灌胃30 min，摘除眼球取血，分离血清，采用AST、ALT试剂盒检测血清AST、ALT。②肝脏指数：小鼠称质量后断颈处死，取出肝脏称质量，计算肝脏指数。肝脏指数=肝脏质量/体质量×1 000[5]。③肝组织脂质过氧化产物(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)：肝脏组织匀浆，离心获上清，制备成10%组织匀浆液，采用MDA、SOD试剂盒检测MDA、SOD。

2结果

2.1各组血清ALT、AST水平比较见表1。

表1　各组血清ALT、AST水平比较

注：与对照组比较，*P<0.05；与模型组比较，#P<0.05；与百赛诺组比较，△P<0.05。

2.2各组肝脏指数比较见表2。

表2　各组肝脏指数比较±s)

注：与对照组比较，*P<0.01；与模型组比较，#P<0.05。

2.3各组肝组织匀浆SOD、MDA比较见表3。

表3　各组肝组织匀浆SOD、MDA水平比较

注：与对照组比较，*P<0.05；与模型组比较，#P<0.05。

3讨论

龙葵全草均可入药，具有抗肿瘤、抑菌、抗病毒作用，对神经系统、心血管系统疾病具有较好疗效[7～10]。龙葵经水提醇沉法可获得水溶性多糖，即龙葵多糖。研究表明，龙葵多糖具有良好的抑瘤效果和免疫调节功能[11]，但其对肝损伤是否具有保护作用鲜见报道。

CCl4诱导的肝损伤模型是急性肝损伤研究的典型模型。目前认为，CCl4引起肝细胞中毒与其自由基代谢产物导致机体脂质过氧化有关，其机制是CCl4经肝细胞微粒体细胞色素P450氧化酶系统代谢、激活后生成三氯甲烷自由基、二氯甲烷自由基及过氧化三氯甲烷自由基，攻击肝细胞膜或激活膜上的磷酸化酶，引起细胞膜和细胞器质膜过氧化损伤，进一步导致细胞中蛋白质合成发生障碍。CCl4诱发急性肝损伤的病理表现为肝细胞弥漫性变性、坏死、大量炎性细胞浸润，与临床病毒性肝炎病理变化极为相似。百赛诺(双环醇片)可保护肝细胞膜和线粒体，减轻肝脏的炎性损伤，防止肝纤维化；可增强肝脏蛋白质的合成，促进肝细胞再生，可作为肝损伤阳性对照药物。

ALT和AST主要存在于肝细胞的胞质和线粒体中，血清含量很低。血清ALT、AST水平可反映肝细胞膜损伤程度，是评价肝细胞坏死的重要指标[12]。肝脏指数是反映肝细胞炎性病变的重要指标，其水平与肝脏损伤程度呈正相关。肝损伤后细胞膜通透性增加，ALT、AST逸出细胞，导致血清ALT、AST升高。本研究结果显示，模型组肝脏指数及血清AST、ALT水平均较对照组显著升高。说明小鼠急性肝损伤模型制备成功。

正常生理状态生物体内不断生成自由基，机体可以通过自身的抗氧化酶系统进行清除，不至于引起组织细胞的脂质过氧化而出现肝损伤。SOD是体内代谢活性氧游离基的主要酶，其功能是将细胞内外产生的活性氧游离基代谢为过氧化氢，生成的过氧化氢在过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化酶的催化下分解为水，以消除自由基，阻止自由基的脂质过氧化。CCl4诱发肝细胞产生的大量自由基可引起脂质过氧化，产生大量脂质过氧化物(LPO)，LPO进一步氧化成终产物MDA。MDA含量可反映组织脂质过氧化程度。本研究结果表明，龙葵多糖低、高剂量组肝脏指数及血清ALT、AST水平均较模型组降低，说明龙葵多糖对急性肝损伤具有一定的保护作用，且效果与临床常用保肝药物百赛诺相近。龙葵多糖可以显著增加肝损伤小鼠肝组织SOD活性，降低MDA水平，提示龙葵多糖可能通过增强肝细胞的抗氧化能力，维持细胞质膜正常结构，减轻肝组织损伤程度。

综上所述，龙葵多糖对CCl4所致的急性肝损伤具有保护作用，其机制可能与增加肝组织抗氧化能力有关。

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(收稿日期：2015-07-10)

中图分类号：R575.5

文献标志码：A

文章编号：1002-266X(2016)08-0023-03

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2016.08.008

通信作者：王益民(E-mail: drwangyimin@126.com)

基金项目：河北省科技计划项目(14397702D)。