天然冰片、冰片和艾片的鉴别Δ

李海艳，杨　全，庞玉新，胡　璇，吴丽芬1,，邹　婧1,(1.广东药学院中药学院，广东 广州　510006； 2.中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所，农业部华南作物基因资源与种质创制重点开放实验室，海南 儋州　571737； 3.海南省艾纳香工程技术研究中心，海南 儋州　571737)



天然冰片、冰片和艾片的鉴别Δ

李海艳1,2,3*，杨全1 #，庞玉新2,3，胡璇2,3，吴丽芬1,2,3，邹婧1,2,3(1.广东药学院中药学院，广东 广州510006； 2.中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所，农业部华南作物基因资源与种质创制重点开放实验室，海南 儋州571737； 3.海南省艾纳香工程技术研究中心，海南 儋州571737)

DOI10.14009/j.issn.1672-2124.2016.02.017

摘要目的:分析天然冰片、冰片和艾片的鉴别方法，为其质量控制及合理应用提供参考。方法：采用性状鉴别、薄层鉴别、旋光测定及气相色谱法对天然冰片、冰片和艾片进行鉴别。结果：天然冰片、冰片和艾片的药材性状相似度较大，但在形状大小和色泽方面存在微小差异；天然冰片和艾片的薄层色谱及气相色谱较接近，但冰片与二者有明显区别；三者的旋光度有较大差异。结论：综合性状鉴别、薄层鉴别、旋光测定和气相色谱鉴定分析，可以达到区分、检测天然冰片、冰片和艾片的目的，为其质量控制及合理应用提供参考依据。

关键词天然冰片； 冰片； 艾片； 性状鉴定； 薄层鉴定； 旋光测定； 气相色谱分析

Identification of Borneolum，Borneolum Syntheticum and L-BorneolumΔ

LI Haiyan1，2，3， YANG Quan1， PANG Yuxin2，3， HU Xuan2，3， WU lifen1，2，3， ZOU Jing1，2，3(1.School of Traditional Chinese Medicine，Guangdong Pharmaceutical University，Guangdong Guangzhou 510006，China； 2.Tropical Crops Genetic Resources Institute，Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences/Key Laboratory of Crop Gene Resources and Germplasm Enhancement in Southern China，Hainan Danzhou 571737，China； 3.Hainan Provincial Engineering Research Center for Blumea balsamifera，Hainan Danzhou 571737，China)

ABSTRACTOBJECTIVE：To analyze the identification method of borneolum，borneolum syntheticum and l-borneolum， and to provide reference for the quality control and rational application. METHODS：Method of macroscopy identification， thin-layer identification，polarimetry and gas chromatography were used to identify borneolum，borneolum syntheticum， l-borneolum. RESULTS：The medicinal properties of borneolum，borneolum syntheticum and l-borneolum were similar， but the shape，size and color had tiny differences.The thin-layer identification and gas chromatography of borneolum and l-borneolum was similar，but there was a clear difference between these two and borneolum syntheticum.And specific rotation of the three has a bigger difference. CONCLUSIONS：The method of macroscopy identification， thin-layer identification，polarimetry and gas chromatography could distinguish borneolum，borneolum syntheticum， l-borneolum，and provide reference for the quality control and rational application.

KEYWORDSBorneolum； Borneolum Syntheticum； L-Borneolum； Macroscopy identification； Thin-layer identification； Polarimetry； Gas chromatography analysis

冰片为常用芳香开窍类中药，具开窍醒神、清热止痛的功效，在医药[1-3]、日用化工[4]、美容护肤[5]和食品[6]等领域都有应用。根据2010版《中国药典》规定[7]，冰片有三种来源，包括天然冰片、冰片和艾片。其中，天然冰片为樟科植物樟的新鲜枝、叶经提取加工制成的结晶，主要成分为右旋龙脑；艾片为菊科植物艾纳香新鲜叶的提取加工制成品，主要成分为左旋龙脑；合成冰片是用分馏松节油所得的α-蒎烯酯化合成或将樟脑与二氧化碳、钠右苯反应生成异龙脑[8]。三种冰片来源不一，其外观性状、理化性状、旋光特性及主要化学成分都不尽相同，采用个别鉴定方法对冰片的鉴定分析研究已有一些报道[9-13]，但尚缺乏较详细的系统研究。本研究拟从外观性状、薄层鉴定、旋光度测定及含量分析等几方面综合对天然冰片、冰片和艾片进行对比鉴别，为其质量控制及合理应用提供参考依据。

1材料

1.1仪器

WZZ-2S 自动数显旋光仪(上海精密仪器有限公司)；电子天平(Sartorius公司)；安捷伦7890A气相分析仪(配有氢火焰离子化检测器FID)。

1.2药品与试剂

硅胶G预制板(青岛海洋化工分厂)；天然冰片(吉安市林科天然冰片厂，批号140719)；冰片(四川青神康华制药有限公司，批号140704)；艾片(湖北俊辉医药公司，批号2014120102)；对照品龙脑(东京化成工业株式会社,批号201307，纯度≥98.0%)；异龙脑(中国食品药品检定研究院，批号111512-200802，纯度≥97. 5%)；樟脑(Aladdin 公司，批号21506，纯度≥98.0%)；内标物水杨酸甲酯(天津市光复精细化工研究所，批号201304，纯度≥99.5%)；乙酸乙酯为色谱纯；其余试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.1性状鉴定

天然冰片、冰片、艾片性状外观极为相似，均为半透明块状白色结晶，均具有香气，但也存在一定的差异，如图1，性状鉴定结果见表1。

图1　天然冰片、冰片和艾片外观图Fig 1　Exterior view of Borneolum, borneolum syntheticum and l-borneolum

性状天然冰片冰片艾片形状片状或块状结晶片状结晶块状或颗粒结晶大小直径2～13mm,厚1～5mm直径1～10mm,厚0.5～2mm直径2～8mm,厚1～4mm色泽白色白色白色质地稍硬而脆,手捻不易碎较疏松而脆,手捻即粉碎紧密而脆,手捻可粉碎气味气芳香,清凉味较弱气芳香,清凉味浓烈气芳香,清凉味较浓烈水试几乎不溶几乎不溶几乎不溶火试有浓烟有浓烟有黑烟

2.2薄层鉴定

分别取天然冰片、冰片和艾片5 mg，加乙醇2 ml使溶解，作为天然冰片、冰片和艾片供试品溶液。另取龙脑对照品，加乙醇制成每1 ml含2 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录ⅥB)试验[14]，吸取上述三种供试品溶液和对照品溶液各2～5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯(V∶V=17∶3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的紫色斑点，如图2所示。

1.天然冰片；2.冰片；3.艾片；4.龙脑；5.异龙脑1.borneolum；2.borneolum syntheticum；3.l-borneolum；4.borneol；5.isoborneol图2　天然冰片、冰片、艾片薄层色谱图Fig 2　Thin-layer identification of borneolum, borneolum syntheticum and l-borneolum

2.3旋光测定

按《中国药典》2010版一部附录ⅦE旋光度测定法[15]，在23 ℃的条件下，分别取天然冰片、冰片和艾片适量，精密称定，加乙醇制成每1 ml含0.1 g的溶液，以乙醇作空白校正，置于旋光计内检测读数，得旋光度，照下列公式计算，即得样品比旋度，测定结果见表2。

式中：[α]为比旋度；D为钠光谱的D线；t为测定时的温度(℃)；l为测定管长度(dm)；α为测得的旋光度；c为每100 ml溶液中含有被测物质的质量(按干燥品或无水物计算，g)。由表2数据可知，天然冰片的主要成分为右旋龙脑，其比旋度为(+35.1°)。冰片为消旋龙脑，其比旋度为0°。艾片为左旋龙脑，其比旋度为(-37.8°)。三者成分各异，旋光不同，可以应用旋光测定进行天然冰片、冰片和艾片之间的鉴别。

2.4气相色谱分析

2.4.1色谱条件:色谱柱为Agilent HP-5毛细管柱(30 m×0.32 mm，0.25 μm)；升温程序：80 ℃保持3 min，以5 ℃/min升温至120 ℃；再以20 ℃/min升至180 ℃；分流比9∶1；FID检测器温度 250 ℃；进样口温度220 ℃；载气为高纯氮气，体积流量25 ml/min，空气体积流量400 ml/min，氢气体积流量30 ml/min；进样量 1.0 μl。

表2　天然冰片、冰片和艾片的比旋度结果

注： 测定管长度为20 cm

Note：measuring tube length is 20 cm

2.4.2对照品、供试品及内标溶液的制备:混合对照品储备液：分别精密称取龙脑、异龙脑、樟脑对照品适量，以乙酸乙酯溶解并定容，制成龙脑、异龙脑、樟脑质量浓度分别为2.072、1.190、2.098 mg/ml的混合液，作为混合对照品储备液。供试品溶液：分别取样品天然冰片、艾片约50 mg，冰片约75 mg，精密称定，以乙酸乙酯溶解，置10 ml量瓶定容即得。内标溶液：精密量取水杨酸甲酯1.00 462 g，以乙酸乙酯溶解，置100 ml量瓶定容，作为内标溶液。

2.4.3适应性:选用水杨酸甲酯为内标，龙脑、异龙脑、樟脑和内标物水杨酸甲酯的分离度均>4，水杨酸甲酯与各对照品较好地分离，加内标对照品和加内标供试品的GC图谱见图3。各物质的保留时间均在6 min内，测定速度较快。以龙脑、异龙脑、樟脑和水杨酸甲酯色谱峰计算的理论塔板数分别为23 086、20 045、23 046、23 116、23 124和26 476，远远高于《中国药典》2010年版规定的理论塔板数超过3 000的要求。

1. 樟脑；2.异龙脑；3.龙脑；4.水杨酸甲酯1.camphor；2. Isoborneol；3.borneol；4. methyl salicylate图3　混合对照品(A)；加标天然冰片(B)；加标冰片(C)；加标艾片(D)GC图Fig 3　Hybrid reference substance(A), marked borneolum(B), marked borneolum syntheticum (C) and marked l-borneolum(D)

2.4.4线性关系考察:精密量取混合对照品储备液0.1、0.2、0.4、1.0、2.0、4.0 ml，分别置10 ml容量瓶中，再加入1.0 ml内标溶液，加乙酸乙酯稀释并定容，摇匀，分别进样测定，每次1.0 μl。以各对照品与内标物的峰面积比为横坐标(X)，对照品与内标物的质量浓度比为纵坐标(Y)进行线性回归，计算回归方程。龙脑、异龙脑、樟脑的线性关系结果见表3。

表3　3种对照品线性回归方程相关系数、线性范围

2.4.5精密度试验：对同一加内标对照品储备液连续测定6次，结果龙脑、异龙脑、樟脑与内标物的峰面积比的RSD分别为1.11%、0.22%、0.12%。

2.4.6重复性试验：分别取天然冰片、冰片、艾片样品5份，平行制备加内标供试品溶液，测定，结果天然冰片中龙脑、樟脑的平均质量分数的RSD分别为2.05%、2.51%；合成冰片中异龙脑、龙脑的平均质量分数的RSD分别为0.62%、0.71%；艾片中龙脑、樟脑的平均质量分数的RSD分别为2.26%、2.53%。

2.4.7稳定性试验：分别在0、0.5、1、2、4、8、16、24 h对加内标供试品溶液进行测定，结果天然冰片中龙脑、樟脑与内标峰面积比的RSD分别为0.70%、1.15%；冰片中异龙脑、龙脑与内标峰面积比的RSD分别为0.91%、0.58%；艾片中龙脑、樟脑与内标峰面积比的RSD分别为0.39%、0.95%，结果说明被测溶液在24 h内稳定。

2.4.8加样回收率试验：分别精密称定样品天然冰片、冰片、艾片约25 mg，各9份，分别置10 ml量瓶中，3份为1组作为一个水平的平行样，每组分别精密加入对照品混合储备液0.5、1.0、1.5 ml，每个量瓶中加入内标溶液1.0 ml，加乙酸乙酯稀释并定容，摇匀，每个样平行测定3次，测定各成分的含量，计算得天然冰片中龙脑、樟脑的平均回收率分别为99.88%、102.07%，RSD分别为1.27%、1.94%；冰片中异龙脑、龙脑的平均回收率分别为96.13%、95.43%，RSD分别为1.37%、1.77%；艾片中龙脑、樟脑的平均回收率分别为96.82%、100.99%，RSD分别为1.83%、1.37%。

2.4.9样品测定：精密称定样品天然冰片、冰片、艾片50 mg，置10 ml量瓶，加乙酸乙酯稀释并定容，摇匀，再精密量取1 ml至10 ml量瓶中，加入1 ml内标溶液，加乙酸乙酯稀释并定容，摇匀，进样测定，进样量为1.0 μl，每个样品平行测定3份，各成分测定结果见表4。

表4　天然冰片、冰片、艾片含量测定结果(n=6，RSD<3%)

注：“—”表示无相关数据

Note: “—” stands for no relevant data available

3讨论

本试验通过对天然冰片、冰片、艾片的性状、薄层、旋光性和气相色谱多方面的鉴别比较，显示出三种冰片药材的区别特征。

在药材性状方面，天然冰片、冰片和艾片冰片的相似度较大，其气味、质地、水试、火试都难以区分，但天然冰片多为块状，冰片多为片状，艾片多为颗粒状，三者的大小和色泽也存在微小差异。单独以性状鉴别可以区分三种冰片，但难度较大。

天然冰片和艾片的薄层色谱较接近，均只有一个以龙脑对应的斑点，但冰片与二者有明显区别，具有两个斑点，一个以龙脑对应，一个以异龙脑对应。通过薄层色谱法可以鉴别冰片，但难以区分天然冰片和艾片。

由于三种冰片来源不一，其主要化学成分存在一定差异，天然冰片中的龙脑为右旋，冰片中的龙脑为消旋，艾片中的龙脑为左旋，因此，三者的旋光度有较大差异，可以通过测定旋光度区分三种冰片。气相色谱分析结果也为天然冰片、冰片和艾片的鉴定分析提供了可靠的信息。从分析结果可以看出，天然冰片和艾片仅含有龙脑和樟脑，而不含异龙脑；而冰片同时含有龙脑和异龙脑，樟脑含量低，基本检测不到。

综上所述，通过性状鉴别、薄层鉴别、旋光测定和气相色谱鉴别分析，可以达到区分、检测天然冰片、冰片和艾片的目的，可为三种药材的临床应用和进一步开发利用奠定基础。

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[15]国家药典委员会.中华人民共和国药典1部[S].北京:中国医药科技出版社,2010:附录44.

(收稿日期：2015-10-21)

中图分类号R927

文献标志码A

文章编号1672-2124(2016)02-0186-04

#通信作者：教授。研究方向：中药资源与开发研究。E-mail: yangquan7208@vip.163.com

Δ基金项目：国家自然科学基金：黎药“娜龙”的品种整理及用药规律研究(NO.81374065)；贵州省重大科技专项计划项目：贵州地道药材艾纳香产业化开发关键技术研究与集成应用(NO.20136011)。

*硕士研究生。研究方向：中药制剂研究与开发。E-mail: lihaiyan1990@126.com