苦参碱纳米柔性脂质体的制备及包封率测定

赵 宁， 李伟泽，2*

（1.西安医学院药学院，陕西西安710021；2.烟台威特纳瑞医药科技有限公司，山东烟台264000）



苦参碱纳米柔性脂质体的制备及包封率测定

赵 宁1， 李伟泽1，2*

（1.西安医学院药学院，陕西西安710021；2.烟台威特纳瑞医药科技有限公司，山东烟台264000）

摘要:目的 制备苦参碱纳米柔性脂质体并测定其包封率，并与苦参碱普通脂质体比较。方法 以1，2-丙二醇为膜柔软剂，用薄膜分散法制备苦参碱纳米柔性脂质体，采用激光粒度分布仪和透射电子显微镜考察其药剂学性质，采用葡聚糖凝胶G-50分离脂质体，并用高效液相色谱（HPLC）法测定其对苦参碱的包封率。结果 苦参碱纳米柔性脂质体的外观为椭球形或圆球形，粒径为219.2 nm，表面电位为-48.5 mV，其包封率（80.48±1.82）％是普通脂质体（50.79±2.24）％的1.58倍。结论 薄膜分散法制备的纳米柔性脂质体与普通脂质体相比，对苦参碱具有更好的包封效果，而且稳定性较理想，可作为苦参碱的一种新型给药载体。

关键词:苦参碱；纳米柔性脂质体；包封率；薄膜分散法；HPLC

dol:10.3969/j.issn.1001-1528.2016.02.048

苦参碱（Matrine）为喹诺里西啶类生物碱，是豆科植物苦参等的主要药效成分之一。临床药理研究表明，苦参碱具有良好的药理作用，如抗菌、抗炎、抗病毒、抗纤维化、保肝、抗肿瘤、抗心律失常与镇痛等多种活性［1］，有着非常广泛的应用前景。目前，对苦参碱的新剂型研究大多集中在抗肝损伤及肝纤维化、抗肿瘤、抗心血管疾病与妇科感染等方面，其中外用新型给药系统的研究成为热点。

柔性脂质体是一种新型的透皮与透黏膜的给药载体，是在脂质体的双分子层中加入不同的柔软剂，使得脂质体膜具有较强的柔顺性和变形性，其变形能力比普通脂质体大5个数量级，可通过自身大小1/5的小孔，因此可作为不同极性与分子量药物的载体，具有快速、渗透性强的特点［2-3］，还可在一定程度上提高药物稳定性，因而具有广阔的开发潜力。柔性脂质体中常用的柔软剂主要有聚山梨酯类［4］、去氧胆酸盐［5-6］、乙醇与1，2-丙二醇［7-8］等，其中据报道［9］，以1，2-丙二醇为柔软剂的纳米柔性脂质体具有更佳的稳定性和包封率。本实验建立苦参碱的HPLC含有量测定方法，制备苦参碱纳米柔性脂质体，并比较其与普通脂质体的包封率，可为该制剂的深入研究与进一步应用提供理论依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器 RE-2000A旋转蒸发仪（巩义市予华仪器有限责任公司）；FJ-200高速分散匀质机（上海标本模型厂）；TDL-80-2B低速台式离心机（上海安亭科学仪器厂）；FA1004B电子天平（上海越平科学仪器有限公司）；JEM-1400透射电子显微镜（德国西门子公司）；ZEN3600 Zetasizer激光粒度分布仪（英国马尔文仪器有限公司）；Agi1ent 1260高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）；UV-160A紫外分光光度仪（日本岛津公司）；KQ5200E超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

1.2 试药 苦参碱标准品（中国食品药品检定研究院，批号110805-200508）；苦参碱（纯度98％，西安开来生物工程有限公司，批号K121225）；大豆卵磷脂（天津市科密欧化学试剂开发中心）；胆固醇（上海山浦化工有限公司）；葡聚糖凝胶G-50（上海蓝季科技有限公司，100～200目）。所用试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 苦参碱纳米柔性脂质体的制备工艺 精密称取处方量的卵磷脂、胆固醇与苦参碱，置于250 mL干燥洁净的茄形瓶中，加入无水乙醇80 mL，溶解均匀后于50℃水浴中减压蒸发除掉乙醇，直至在瓶壁上形成均匀的脂质膜。取1，2-丙二醇20 mL，溶于处方量的纯化水中，混合均匀，得到水相，50℃水浴预热后，缓慢滴注于茄形瓶内，于旋转条件下与磷脂膜水合60 min，将所得混悬液经高速匀质5 min后，0.22 μm微孔滤膜循环2次，即得苦参碱纳米柔性脂质体混悬液，4℃冰箱保存。同法不加1，2-丙二醇，制备苦参碱普通脂质体，备用。

2.2 苦参碱纳米柔性脂质体的外观形状 将苦参碱纳米柔性脂质体样品用纯化水稀释后，滴于铜载网上，自然晾干，1.5％磷钨酸溶液负染色，自然晾干，置于透射电子显微镜下观察，并拍照记录。结果显示，苦参碱纳米柔性脂质体外观形状为椭圆或圆球形，见图1。

图1　苦参碱纳米柔性脂质体的透射电镜图

2.3 苦参碱纳米柔性脂质体粒径分布与表面电位 将苦参碱纳米柔性脂质体及普通脂质体样品分别用纯化水稀释，取1 mL，测定其粒径与表面Zeta电位。结果显示，苦参碱纳米柔性脂质体的粒径约为219.2 nm，分布均匀，表面Zeta电位为-48.5 mV，而苦参碱普通脂质体的粒径约为220.8 nm，与前者差异不大，但表面Zeta电位为-8.70 mV，表明前者表面具有较多的净电荷，故脂质体由于微粒之间较大的静电排斥力而具有较强的物理稳定性［10］，见图2和图3。

图2　苦参碱纳米柔性脂质体的粒径分布

图3　苦参碱纳米柔性脂质体的Z e t a电位分布

2.4 苦参碱体外含有量测定方法的建立

2.4.1 色谱条件 HC-C18色谱柱（5.0 μm，4.6 mm× 150 mm）；流动相为甲醇-0.2％三乙醇胺（65∶35）；检测波长为220 nm；体积流量为1.0 mL/min；进样量为20 μL；柱温25℃。

2.4.2 标准曲线的绘制 精密称取苦参碱标准品适量，无水乙醇溶解，制备成质量浓度分别为20、40、60、100、200、400 μg/m L的梯度标准溶液，0.22 μm微孔滤膜过滤，备用。分别精密量取20 μL，注入液相色谱仪，以样品浓度（C）与峰面积（A）进行线性回归，得回归方程A=11.976C+67.993，r=0.999 9，表明苦参碱在20～400 μg/mL范围内线性关系良好。

2.4.3 精密度试验 精密吸取200 μg/m L苦参碱标准品溶液20 μL，在“2.4.1”项色谱条件下测定，重复进样5次。结果，苦参碱峰面积RSD为0.86％（n =5），表明仪器精密度良好。

2.4.4 加样回收率试验 精密量取苦参碱标准品溶液适量，按比例加入空白柔性脂质体1.0 mL，用流动相配成高、中、低3种质量浓度的苦参碱脂质体溶液，每种5份，Triton-100破坏柔性脂质体，稀释定容至刻度，摇匀，离心5 min，吸取上清液，在“2.4.1”项色谱条件下测定。结果，回收率分别为97.8％、97.5％、98.1％。

2.5 苦参碱纳米柔性脂质体的包封率测定

2.5.1 柔性脂质体在SePhadex G-50凝胶柱中的洗脱曲线的制备 称取SePhadex G-50 5 g，蒸馏水溶胀，倒去上层清液与颗粒后装柱，排除气泡，平衡后备用。精密吸取空白脂质体0.4 m L，经SePhadex G-50柱，蒸馏水洗脱，使凝胶柱达到平衡，再精密吸取苦参碱柔性脂质体0.4 mL，上柱，蒸馏水洗脱，体积流量1 mL/min，逐管收集，每管2 mL，收集30管，并做标记。然后，分别加入消解液（含12％ Triton X-100的甲醇溶液）至4 mL，摇匀，精密吸取1 mL，过滤，在“2.4.1”项色谱条件下测定。以管号（N）为横坐标、峰面积（A）为纵坐标作洗脱曲线，见图4。

注:前者为柔性脂质体，后者为游离药物图4　Se p h a d e x G-5 0凝胶柱中的洗脱曲线

2.5.2 苦参碱纳米柔性脂质体的包封率测定［11-12］精密吸取苦参碱纳米柔性脂质体0.40 m L，上SePhadex G-50柱，蒸馏水洗脱，体积流量1 mL/min，50 mL量瓶收集有乳光的部分，加入等体积脂质体消解液至刻度，摇匀，充分消解后精密吸取1 mL，过滤，在“2.4.1”项色谱条件下测定苦参碱含有量，连续测定3批，结果见表1。

表1　苦参碱纳米柔性脂质体包封率

包封率计算公式为包封率=（W包裹/W总量）×100％，其中W总量为实际投料量，W包裹为脂质体包封药量。

2.5.3 苦参碱普通脂质体的包封率测定 精密吸取苦参碱普通柔性脂质体样品0.40 mL，按“2.5.2”项下方法测定其包封率，连续3批，结果见表2。

表2　苦参碱普通脂质体包封率

药物包封率是脂质体给药体系安全、有效与实现靶向治疗的重要基础，故其是脂质体给药系统中的重要设计参数。结果表明，本实验制备的苦参碱纳米柔性脂质体包封率（80.48±1.82）％为其普通脂质体（50.79±2.24）％的1.58倍，可见后者对药物的包封率明显高于前者（P＜0.05），其原因可能是由于1，2-丙二醇为一种溶解能力较强、范围较广的双亲性溶剂，可渗入到脂质体磷脂膜双分子层中，降低层内环境的疏水性，同时在内水相，它和水可以形成混合溶剂，从而增加对药物的溶解能力。因此，苦参碱既可在水相分布，也可在油相分布，使得纳米柔性脂质体具有更好的包封效果，为进一步的应用研究奠定了基础。

3 讨论

纳米柔性脂质体是近年来一种新型外用给药体系，可以促进包封与未包封的药物通过皮肤或黏膜吸收［13］。本实验以1，2-丙二醇为柔软剂，制备得到苦参碱纳米柔性脂质体，其外观为椭圆形或圆球形，粒径为219.2 nm，分布均匀，对苦参碱的包封率为（80.48±1.82）％，表明1，2-丙二醇的加入提高了脂质体对药物的包封率，但具体机理还有待作进一步研究。

表面Zeta电位为-48.5 mV，一般当其绝对值大于30 mV时，由于纳米粒子表面富有净电荷，故彼此间存在较强的静电排斥力，会进一步提高纳米制剂的物理稳定性［14-15］。本实验为苦参碱的透皮与透黏膜给药提供了一种新型、高效的给药载体，拓宽了其临床应用的技术手段，将促进苦参碱在外用给药领域的发展，因而具有广阔的应用前景。

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*通信作者:李伟泽（1979—），男，博士，副教授，研究方向为中药新剂型与新技术。Te1: 18629409280，E-mai1: weize1i@126.com

作者简介:赵 宁（1985—），女，硕士，讲师，研究方向为中药新剂型与新技术。Te1: 18629409280，E-mai1: zhaoning-haPPy@ 163.com

基金项目:国家自然科学基金项目（81303231）；陕西省科技厅项目（2014JQ4145）

收稿日期:2014-12-01

中图分类号:R944

文献标志码:B

文章编号:1001-1528（2016）02-0444-03