HPLC法同时测定复方天麻钩藤口腔崩解片中3种成分

李钦青， 柴金苗， 郭 蕾

（山西中医学院，山西晋中030619）



HPLC法同时测定复方天麻钩藤口腔崩解片中3种成分

李钦青， 柴金苗， 郭 蕾*

（山西中医学院，山西晋中030619）

摘要:目的 采用HPLC法同时测定复方天麻钩藤口腔崩解片（天麻、钩藤、白芍、当归）中天麻素、芍药苷和阿魏酸的含有量。方法 该药物50％甲醇提取物的分析采用C18反相色谱柱；流动相为乙腈-0.1％磷酸水溶液，梯度洗脱；检测波长为230 nm（天麻素、芍药苷）和320 nm（阿魏酸）。结果 天麻素、芍药苷、阿魏酸分别在0.153～1.377 μg、0.298 6～2.687 4 μg、0.022 68～0.204 12 μg范围内呈良好的线性关系，平均回收率分别为98.4％、97.9％、97.4％。结论 该方法可用于复方天麻钩藤口腔崩解片的质量控制。

关键词:复方天麻钩藤口腔崩解片；天麻素；芍药苷；阿魏酸；HPLC

dol:10.3969/j.issn.1001-1528.2016.02.017

KEY W 0RDS: Fufang Tianma Gouteng Ora11y Disintegrating Tab1ets；gastrodin；Paeonif1orin；feru1ic acid；high Performance 1iquid chromatogram（HPLC）

复方天麻钩藤口腔崩解片是根据临床有效方剂研制而来，主要由天麻、钩藤、白芍、当归等药味组成，具有通络止颤、养血敛阴、平肝潜阳、息风止痉等功效。目前，应用HPLC法测定中药复方中的天麻素、芍药苷和阿魏酸的文献较多［1-4］，但对三者的同时测定尚未见报道。本实验采用HPLC法，同时测定复方天麻钩藤口腔崩解片中天麻素、芍药苷、阿魏酸的含有量，可为更好地评价该药物提供一定参考。

1 药物、试剂与仪器

复方天麻钩藤口腔崩解片（自制，批号20120301、20120302、20120303）。天麻素（批号110807-200205）、芍药苷（批号110736-200833）、阿魏酸（批号110773-200611）对照品（中国食品药品检定研究院）。乙腈为色谱纯；水为纯化水；其他试剂均为分析纯。

Agi1ent1200高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）；PL6001-S、AL204、AB135-S电子天平（瑞士Mett1er To1edo公司）；KQ-500E超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 Kromasi1C18色谱柱（4.6 mm× 200 mm，5 μm）；0.05％磷酸溶液（A）-乙腈（B）为流动相，梯度洗脱（0→10 min，3％ B；10→12 min，3％→14％B；12→40 min，14％B）；检测波长为0→28 min时230 nm（天麻素、芍药苷），28→40 min时320 nm（阿魏酸）；体积流量1.0 mL/min；进样量20 μL；柱温30℃。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取天麻素、芍药苷和阿魏酸对照品适量，加50％甲醇制成对照品贮备液（天麻素质量浓度为765 μg/mL、芍药苷质量浓度为1 493 μg/mL、阿魏酸质量浓度为113.4 μg/mL）。精密量取1.0 mL，置于25 mL棕色量瓶中，加50％甲醇至刻度，摇匀，即得（天麻素质量浓度为30.6 μg/mL、芍药苷质量浓度为59.72 μg/mL、阿魏酸质量浓度为4.536 μg/mL）。2.3 供试品溶液的制备 取复方天麻钩藤口腔崩解片（20120301）10片，研细，精密称取1 g，置于具塞锥形瓶中，精密加入50％甲醇50 mL，称定重量，超声（250 W、40 kHz）30 min，放冷，再称定重量，50％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4 阴性供试品溶液的制备 按复方天麻钩藤口腔崩解片的生产工艺，分别制备缺天麻、白芍、当归的阴性制剂，缺天麻的阴性制剂，缺白芍的阴性制剂，缺当归的阴性制剂，并按“2.3”项下方法制备阴性供试品溶液，HPLC色谱图见图1。

1.天麻素 2.芍药苷 3.阿魏酸1.gastrodin 2.Paeonif1orin 3.feru1ic acid图1　HPLC色谱图Flg.1 HPLC chromatogram s

2.5 线性关系考察 分别精密量取“2.2”项下对照品贮备液1.0、3.0、5.0、7.0、9.0 mL，置于50 mL量瓶中，加50％甲醇至刻度，摇匀，分别进样10 μL，测得峰面积，计算回归方程。结果表明，天麻素、芍药苷和阿魏酸分别在0.153～1.377 μg、0.298 6～2.687 4 μg、0.022 68～0.204 12 μg范围内线性关系良好，线性方程分别为y=2 272.3 x-6.561（r=0.999 9）、y=2 782.2 x+ 5.929 5（r=0.999 95）、y=4 991.2x-0.638（r=0.999 9）。

2.6 精密度试验 精密吸取“2.2”项下对照品溶液10 μL，在“2.1”项色谱条件下连续进样6次。结果，三者RSD分别0.43％、0.62％、0.56％，表明仪器精密度良好。

2.7 稳定性试验 取“2.3”项下供试品溶液，分别于0、1、2、4、6、8 h在“2.1”项色谱条件下测定6次。结果，三者RSD分别0.59％、0.68％、0.73％，表明溶液在8 h内稳定。

2.8 重复性试验 取同一批号样品，按“2.3”项下方法制备6份供试品溶液，在“2.1”项色谱条件下测定。结果，三者RSD分别1.2％、1.1％、1.5％，表明该方法重复性良好。

2.9 加样回收试验 取复方天麻钩藤口腔崩解片（20120301）30片（天麻素、芍药苷、阿魏酸的含有量分别为0.78、4.71、0.074 mg/mL），研细，精密称取6份，每份0.5 g，置于具塞锥形瓶中，每份分别加入78.5 μg/mL天麻素对照品5 mL、465.8 μg/mL芍药苷对照品5 mL、7.3 μg/mL阿魏酸对照品5 mL，按“2.3”项下方法制备6份供试品溶液，在“2.1”项色谱条件下进行测定，计算平均加样回收率，结果见表1。

表1　回收率试验结果Tab.1 Results of recovery tests

2.10 含有量测定 取3批样品，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，在“2.1”项色谱条件下测定，每批样品平行3次，记录峰面积，代入标准曲线，计算天麻素、芍药苷和阿魏酸的含有量，结果见表2。

表2　3种成分含有量测定结果（n=3）Tab.2 Determ lnatlon results of the contents of three constltuents（n=3）

3 讨论

3.1 供试品溶液制备方法的考察 参考文献［5-6］，分别采用50％、70％、100％甲醇，进行超声以及加热回流提取。结果发现，采用50％甲醇，超声提取30 min时效果最好。

3.2 流动相的选择 参考文献［7-9］，采用梯度洗脱分离多个成分，以节省分析时间。另外，考察不同比例的乙腈-磷酸、甲醇-磷酸溶液系统，最终确定以乙腈-0.05％磷酸溶液为流动相。在该梯度洗脱系统下，样品中天麻素、芍药苷和阿魏酸的分离度好，出峰时间较快。

3.3 检测波长的确定 参考文献［10-11］，采用紫外检测器，在230 nm处检测天麻素、芍药苷，在320 nm处检测阿魏酸，发现这3种成分的分离度、峰形均较好。另外，天麻素的检测波长亦可以选择在220 nm处［12-13］，此时三者均有最大的响应值，但杂质峰也较大。因此，检测波长最终确定为230 nm（天麻素、芍药苷）、320 nm（阿魏酸）。

参考文献:

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Slmultaneous determ lnatlon of three constltuents ln Fufang Tlanma Gouteng 0 rally Dlslntegratlng Tablets by HPLC

LIQin-qing， CHAIJin-miao， GUO Lei*
（Shanxi College of Traditional Chinese Medicine，Jinzhong 030619，China）

ABSTRACT:AIM To deve1oP an HPLCmethod for simu1taneous1y determining the contents of gastrodin，Paeonif1orin and feru1ic acid in Fufang Tianma Gouteng Ora11y Disintegrating Tab1ets（Gastrodiae Elatae Rhizoma，Uncariae Ramulus cum Uncis，Paeoniae Lactilorae Radix and Angelicae Sinensis Radix）.METH 0DS The ana1ysis of 50％ methano1ic extract of this drugwas Performed on C18ODS co1umn，mobi1e Phasewas acetonitri1e-0.1％ PhosPhoric acid with gradient e1ution，and detection wave1engthswere set at230 nm for gastrodin and Paeonif1orin，and 320 nm for feru1ic acid.RESULTS Gastrodin，Paeonif1orin and feru1ic acid disP1ayed good 1inear re1ationshiPswithin the ranges of0.153 -1.377 μg，0.298 6 -2.687 4 μg and 0.022 68 -0.204 12 μg，and their average recoverieswere 98.4％，97.9％ and 97.4％，resPective1y.C0NCLUSI0N Thismethod can be aPP1ied to the qua1ity contro1of Fufang Tianma Gouteng Ora11y Disintegrating Tab1ets.

*通信作者:郭 蕾（1968—），女，博士，教授，博士生导师，从事中医基础理论研究。Te1:（0351）3179842，E-mai1: g1qz1123@ 163.com

作者简介:李钦青（1978—），男，硕士，讲师，从事中药药效物质及新药研究。Te1:（0351）3179903，E-mai1: 1qq1qq@126.com

基金项目:国家自然科学基金资助项目（81173165）；太原市科学技术局资助项目（11014918）

收稿日期:2015-09-25

中图分类号:R927.2

文献标志码:A

文章编号:1001-1528（2016）02-0315-04