谈谈兽医学中的常规血清学诊断技术以及与分子生物学技术相结合的诊断技术

张哲明

（黑龙江省佳木斯市富锦市头林镇政府，黑龙江佳木斯 156104）

谈谈兽医学中的常规血清学诊断技术以及与分子生物学技术相结合的诊断技术

张哲明

（黑龙江省佳木斯市富锦市头林镇政府，黑龙江佳木斯 156104）

随着分子生物学的发展，利用兽医学中的常规血清学诊断技术以及与分子生物学技术相结合技术，这些结合技术具有简单、快速、精确率高，综合判断可根据自身的情况选择适合的特点。本文简单概述了血清学与分子生物学技术，分析了二者的相关性，阐述了兽医学中的常规血清学诊断技术以及与分子生物学技术相结合的诊断技术。

常规血清；分子生物学；兽医学

侵袭性感染是导致畜禽发病和死亡的重要原因，过去常规的诊断方法难以满足诊断需要，因此，一些发展敏感性、特异性高的早期快速诊断方法已成为侵袭性畜牧感染诊断研究领域的热点和难点。由于各种真菌和病毒的敏感性和特异性，单纯的采用一种方法均有一定程度的局限性，联合常规血清学和分子生物学技术可以取得互补效果，能使检测的敏感性达到90%。近年来，血清学及分子生物学技术的结合用于兽医学中的诊断研究取得一定的进展，为畜牧疾病的诊断带来希望。

1 常规血清学诊断技术与分子生物学技术

1.1 常规血清学诊断技术

该技术是利用特异性抗原抗体反应，检测病原微生物并简化了病原微生物的鉴定步骤，在免疫学领域利用该技术，对于检测重要经济类中可遗传的海绵状脑病发挥重要作用。如：荧光抗体技术是在显微镜下检查呈现荧光的特异性抗原复合物及其存在部位。因此，荧光抗体免疫技术在畜牧养殖病原的检测上得到了一定的应用；酶免疫技术，酶免疫技术对抗原、抗体以及原抗体复合物可以定位，因此，该技术在水产动物病原检测中也得到了一定应用。

1.2 分子生物学技术

分子生物学技术对环境中病原进行检测发展非常迅速，尤其是DNA分离技术的提高、PCR技术的日益完善，核酸杂交技术核酸杂交是利用特异性标记的DNA或RNA 作为指示探针，使其进行杂交，以准确确定宿主是否携带有某种病原体；或者直接对病原的感染途径进行分析。

2 兽医学中常规血清学诊断技术与分子生物学技术的相关性

常规血清检测通常用来诊断某些常规方法难以诊断的地方性机会性真菌感染，如芽生菌病、球孢子菌病、组织胞浆菌病的流行病学调查，具有较高的敏感性和特异性。这种方法抗体检测的特异性较差，不能区分是体内定植还是感染；其次难以产生足够量的抗体，易发生假阴性。而分子生物学方法的发展为早期快速诊断侵袭性真菌感染提供可能性。二者联合联合应用能高效地提取出18种常见动物真菌的D N A。故应用得最广泛。如：PCR相关技术用于早期快速诊断侵袭性念珠菌病、曲霉病和隐球菌病已显示出较高的应用价值，但这些方法在检测过程中易出现假阳性和假阴性，需要加强标本收集和处理中的防污染措施，同时对PCR技术操作过程和方法进行改进，可有效提高PCR用于临床侵袭性真菌感染早期诊断的价值。

3 兽医学中的常规血清学诊断技术以及与分子生物学技术相结合的诊断技术

3.1 在狂犬病毒野毒株与基因缺失疫苗株的PCR检测

常规血清检测通常用来检测狂犬病毒中的芽生菌病、球孢子菌病，具有较高的敏感性和特异性，联合常规PCR方法借助仪器和DN A聚合酶体外大量扩增部分或全部目的片段，该法可从PRV Martha—K61疫苗株仅扩增出一条237bp的片段，通过优化反应条件建立了可区分猪伪，具有高特异性。

3.2 对DNA的检测

PCR技术可以在短时间内大量复制出原来很少的DNA。其具有灵敏、特异、简便、快速等优点，可以细胞中扩增出足量的DNA供分析诊断等。其中的定量PCR 技术逐渐提高了检测的敏感性和特异性，常规血清检测技术是一种良好的检测HBV-DNA的方法，可用凝胶电泳进行分离后与一系列已知分子量进行比较，广泛应用于临床基因诊断。

3.3 在临床和科研的应用

在畜群中，各个体基因的核苷酸序列存在于动物的基因组中，某一致病基因就可以用这一多态性片段来判断畜群或幼畜是否携带有致病基因。基因多态性会影响对药物的反应和用药效果，因而有人提出 “个体化”用药。其中的单链构象多态性分析是一种简单、有效、快捷、廉价的检测非常少量的基因组DNA或cDNA突变的技术。根据显示的条带即可判断所测DNA链是否有变异。DNA序列测定取代了何种核苷酸，检测时采用分子杂交手段，用激光共聚焦显微扫描仪检测荧光信号即可获得检测结果；荧光原位杂交染色体分析，其是一种在染色体上进行基因定位的技术，不仅可用于基因在染色体上定位的研究，而且还可以对白血病的实验室诊断。

分子生物学检测技术有着常规诊断方法不能比拟的优越性，具有能够区别细菌和病毒的疫苗株和野毒株，甚至可以监测病原体的变异和漂移，但是在短时间内这些诊断新技术难以真正达到推广应用，但对于重大疫情的及时预报和准确定性都是不可或缺的。

总之，血清学和分子生物学技术等非传统方法用于畜牧学的真菌感染诊断已经取得较大的进展，但其操作程序的标准化方面需要取得一致，联合应用血清学和分子生物学技术等非传统方法有助提高畜禽诊断的水平，为猪伪狂犬病毒病的诊断、分子流行病学调查和防控提供了技术保障。

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