细胞色素P450基因多态性与宫颈上皮内瘤变遗传易感性的关系

梁宝权，侯顺玉，金蕴洁

(南京医科大学附属苏州医院，江苏苏州215000)



细胞色素P450基因多态性与宫颈上皮内瘤变遗传易感性的关系

梁宝权，侯顺玉，金蕴洁

(南京医科大学附属苏州医院，江苏苏州215000)

目的探讨细胞色素P450基因多态性与宫颈上皮内瘤变(CIN)遗传易感性的关系。方法用等位基因特异性PCR方法检测100例CIN患者(观察组)和100例健康体检者(对照组)的CYP1A1 Exon7位点多态性。结果对照组和观察组的CYP1A1 Exon7基因多态性为野生基因型、杂合型、突变型基因型频率分别为48%、37%、15%和29%、48%、23%。观察组杂合型和突变型基因频率高于对照组，但差异无统计学意义(P均>0.05)。观察组杂合型+突变型的基因频率高于对照组(P<0.05)。结论细胞色素P450的Exon7基因多态性是CIN的危险因素，有可能成为CIN遗传易感标记物。

宫颈上皮内瘤变；细胞色素P450；基因多态性；遗传易感性

宫颈癌居女性癌症病死率第2位[1]。全世界每年约有50万人罹患宫颈癌，30万患者死亡，其中80%发生在发展中国家[2]。宫颈上皮内瘤变(CIN)是宫颈癌前病变，探讨CIN的易感性有助于早期发现高危患者，及早干预。细胞色素P450(CYP450)以膜蛋白的形式存在于生物体的内质网上，是混合功能氧化酶系统的末端氧化酶，影响内源性和外源性物质代谢，与肿瘤的发生密切相关。CYP1A1 Exon7基因作为编码CYP450蛋白的基因，其基因的多态性决定了CYP450蛋白的活性与功能。CYP1A1 Exon7基因多态性包括野生型(IIe/IIe)、杂合型(IIe/Val)、突变型(Val/Val),已有报道其与胃癌、乳腺癌等的易感性相关[4]，但其与宫颈病变关系的研究少见。2013年9月～2014年9月，我们观察了CIN患者CYP1A1 Exon7位点多态性与CIN遗传易感性的关系。

1　资料与方法

1.1临床资料收集南京医科大学附属苏州医院初诊CIN患者100例(观察组)，年龄25～48岁，中位年龄38岁。均经病理学检查确诊，其中CINⅠ级12例、Ⅱ级68例、Ⅲ级20例。选择同期健康体检者100例作为对照组，两组年龄具有可比性。

1.2检测方法采集受试者外周静脉血5 mL，EDTA抗凝，4 ℃保存。使用血液基因组DNA提取试剂盒提取DNA，采取等位基因特异性PCR方法(ASA-PCR)检测Exon7位点多态性。反应引物序列：公共引物：5′-AGACTGCACCTTCGACTGTCT-3′；IIe引物：5′-AAGACCCTCCAGCGGGCAAT-3′；Val引物：5′-AAGACCCTCCAGCGGGCAAC-3′。PCR扩增体系终体积均为50 μL，反应条件：94 ℃预变性2 min，94 ℃变性30 s，55 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，共30个循环，72 ℃延伸10 min，4 ℃保存。将PCR产物用2%琼脂糖凝胶电泳，经EB染色后在紫外灯凝胶成像仪上。IIe/IIe、IIe/Val、Val/Val基因型扩增条带长度均为210 bp。

1.3统计学方法采用SPSS13.0统计软件。率的比较采用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2　结果

两组CYP1A1 Exon7基因IIe/IIe、IIe/Val、Val/Val基因型频率分别为48%、37%、15%和29%、48%、23%。观察组IIe/Val和Val/Val基因频率分别高于对照组，但差异无统计学意义(P均>0.05)。合并IIe/Val和Val/Val后，观察组IIe/Val+Val/Val基因频率高于对照组(P<0.05)。

3　讨论

恶性肿瘤的发生是多种因素共同作用的结果，不同个体在相同的致癌环境作用下并非都患肿瘤，这种差异性被称为肿瘤易感性。不同人群对外源性致癌物代谢能力的差异性可造成肿瘤易感性的不同。CYP450是广泛存在于动植物和微生物体内的代谢酶系，因其可在还原状态下与CO结合并在450 mm有特殊吸收光谱而命名。该酶具有广泛的底物特异性和多样性，可催化体内各种药物、化学毒物以及具有重要生理功能的内源性物质的生物转化。CYP450主要是以膜蛋白的形式存在于生物体的内质网上，是混合功能氧化酶系统的末端氧化酶，影响内源性和外源性物质代谢[5]。目前约有300余种同工酶cDNA被克隆和测序，并广泛表达。CPY450基因多态性的表象差异与基因缺失、单核苷酸多态性、基因重复等导致酶活性的个体差异有关，使得个体在肿瘤易感性的药物毒性反应上有不同的结局。目前已证实，CYP1A1、CYP1A2、CYP1B1、CYP2A6、CYP2C9、CYP2C19等基因存在多态性，并且特定代谢酶的表型在不同地区、不同种族、不同人群中的分布不同[6]。目前对基因多态性的研究多集中在CYP1A1 3′末端Msp1基因多态和Exon7(第7外显子)中A到G的点突变上，这两种基因已被证实与多种肿瘤的易感性密切相关，CYP450基因多态性可能促进肿瘤的发生[7，8]。研究发现，CYP1A1是参与雌激素代谢的关键酶之一，将雌激素代谢生成的代谢产物儿茶酚胺进一步氧化成不稳定的苯醌，从而引起细胞DNA的损伤[9]。1997年Esteller等[10]在研究CYP1A1与子宫内膜癌的关系中发现，Exon7基因位点的密码子461和462同时发现突变时，罹患子宫内膜癌的概率明显升高。Esinler等[11]报道，IIe/Val基因型患者，子宫内膜异常增生的概率是IIe/IIe基因型的5倍，而子宫内膜异常增生患者的Val突变频率更高(IIe/Val和Val/Val)，认为携带Val等位基因更易引起病变。Seremak-Mrozikiewicz等[12]对71例波兰子宫内膜癌患者进行分析，发现CYP1A1等位基因在癌症患者中过度表达，认为基因突变引起CYP1A1代谢活性的改变可能是引起肿瘤的重要因素。

本研究观察了CYP1A1 Exon7位点多态性与CIN的关系，结果显示观察组Exon7基因频率以IIe/Val和Val/Val为主，明显多于对照组；两组IIe/Val+Val/Val所占比例高于IIe/IIe所占比例。提示Exon7多态性与CIN遗传易感性可能有关，与国内报道[13]一致。因CIN是子宫颈癌癌前病变，但并不是CIN均会发展为子宫颈癌，其发病与患者之间的个体差异、疾病易感性相关。有报道认为，Exon7 A到G的点突变上不但能提高CYP1A1酶活性，而且能提高酶诱导性。本研究还发现，观察组Exon7的杂合型和突变型频率较对照组增多，但无统计学差异。我们将以此为线索，增大样本量继续深入研究。

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江苏省苏州市科教兴卫青年科技项目资助(SWKQ1024)；江苏省苏州市临床重点病种诊疗技术专项项目(LCZX201410)。

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.22.031

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1002-266X(2016)22-0081-02

2015-10-06)