组织切片技术在兽医诊断中的应用和常见问题的分析

王兰会　（山东省临沂市河东区畜牧兽医局　276034）

组织切片技术在兽医诊断中的应用和常见问题的分析

王兰会（山东省临沂市河东区畜牧兽医局276034）

利用组织切片技术进行病理诊断是兽医学中最具权威性的诊断方法之一。所谓组织切片，即取动物某一实体器官上的组织块用石蜡包埋，然后进行切片及染色的制片过程。在整个制片过程中，包括有取材与固定，脱水与透明，浸蜡与包埋，切片与粘片，染色与封固五大步骤。制作时，对每一步都必须认真对待，否则将达不到预期效果，甚至导致制片工作的彻底失败。病理诊断的准确性，一方面取决于兽医师的技术水平，另一方面取决于组织病理片处理和染色效果。然而，在现实中，组织切片技术往往得不到应有的重视，在目前临床兽医工作中普遍地存在着一些问题，由于标本固定时间不足，组织脱水不彻底，某些环境因素造成试剂浓度改变等，都直接影响到制片质量，给临床病理和流行病学诊断带来一定的困难。笔者在多年的兽医工作实践中体会到∶组织切片技术必须把好以下几点：

1　重视取材固定操作

取材要尽可能新鲜，为了防止器官组织的坏死，速度要很快。取材一般采用锋利的刀片或剪刀，为了避免组织器官的破裂变形，不可以采用镊子压迫组织。所选取组织块的厚薄、大小都要适度，如果组织块过厚或过大，则固定液不易渗透，固定效果则比较差而组织块过薄或过小，则在固定脱水时，容易发生扭曲变形等状况。取材还应该有代表性，能够反映出组织的基本结构此外，还要采集健康部位及病变部位交叉部分的组织，这样才能够通过两者的对照，从而清晰的看到各种病理变化情况。通常情况下，配置好的固定液最好要及时使用，配好后应贮存于阴凉处，避光保存，以免发生化学变化而失去其固定作用。固定要及时，这样才能保证细胞与正常生存状态时相似固定液要充分，一般情况下约为材料块的倍左右，对于水分含量较多的材料，要更换一次新液，避免腐败的发生材料固定好，应该保存密封容器内，并且在容器外贴上标签，及时注明材料来源、固定液以及日期等主要信息。材料固定之后，除了乙醇之外，其他固定液必须冲洗干净，否则残留在组织材料内的固定液可能会产生结晶或沉淀，而不利于染色的完成。

2　包埋要认真，切片要完整

病理组织切片多采用浸蜡包埋的方法，透蜡温度应保持恒定。包埋操作要迅速，尽量在最短的时间内完成石蜡的透人过程，避免引起组织变脆、收缩或变硬等。通常情况下，包埋操作可以在恒温箱内完成，为了避免由于温度的变化导致组织材料与石蜡的分离，组织材料切面应该朝下放置，并采用同温的镊子轻轻拨动材料，使其平整，待石蜡凝固完全时方可取出备用。切片时，一定要保证所采取的切片刀锋利，否则可能会造成切片断裂和不完整切片时，注意刀片的放置的倾角要适当，倾角过小容易引起皱起，过大可能会使切片上卷一般选择口川厚度的切片，如果切片过厚可能会导致双层细胞现象，不利于观察和病理诊断。在贴片操作时，要先采用小镊子夹取已经割开的石蜡带，置于恒温水浴锅水面之上展片之后，将载玻片做好标记，置于恒温烘箱内生右，防止染片过程中发生脱片。

3　脱蜡石蜡切片

脱蜡前切片要经烘烤，这种使组织和玻片粘贴牢固。组织切片脱蜡应彻底，脱蜡好坏主要取决于二甲苯的温度和时间，所有的时间都是指新的二甲苯在室温25℃以下时，如果二甲苯是用过一段时间，切片又比较厚，室温低应增加脱蜡时间，脱蜡不净是影响染色不良的重要原因之一。

4　染色石蜡切片

经水洗后放入苏木素染色液中，一般情况下新配的苏木素染液中只需染1～3min左右，应根据染片的多少，逐步把染色时间延长。苏木素染色后，不易在分化液中停留时间过长，切片分化应在镜下观察，分化过度，应水洗后重新在苏木素染液中染色，在水洗分化和使切片在自来水或稀的氨水中充分变蓝（蓝化）。新配的伊红染色块，切片染色不易过长，应根据染切片的多少逐步延长染色时间，切片使伊红染后，分化时间要短。

5　脱水切片染色

通过各级酒精脱水，首先从低浓度到高浓度。低浓度酒精对伊红有分化作用，切片经过低浓度时要短，向高浓度逐渐延长脱水时间，脱水不彻底，使切片发雾，在显微镜下组织结构模糊不清。

6　透明与封片

石蜡组织切片染色经过脱水后必须经二甲苯处理，使切片透明，才能用树胶封片。应引起注意的是，二甲苯纯度不纯使切片透明不够，会影响切片质量（工作中曾发现新进货的二甲苯试剂中散发出浓厚的汽油味，严重影响切片质量）。

总之，组织切片技术在基础兽医学研究和临床兽医应用中都是不可缺少的。通过大量的理论研究及工作实践，笔者认为在病理组织切片染色操作过程中，每一个步骤都应该认真对待科学处理，否则将会对制片的质量造成一定的影响。如取材大小要合适，标本应及时固定，脱水应彻底，包埋要放置平整，切片要完整。一个比较完美的切片从表面观察应该平整、无破裂、没有皱褶，厚薄适中、分化也比较好苏木素一伊红染色的对比度好标签清晰明了。要想提高切片的质量水平，除了规范化的操作之外，还要求操作人员高度的责任心，在实际工作中总结经验，认真分析影响切片质量的每一个小因素，才能制作出质量高、比较完美的病理组织切片，从而为临床兽医诊断和基础兽医研究提供依据

S854.4+3文献标识码：B

1007-1733（2016）08-0080-02

2016-04-06）