CHAF1A在肝细胞癌组织中的表达及其临床意义

付慧英，黄　灿,鄢业鸿，彭小东，张志谦

(1.中国人民解放军第94医院肿瘤科,南昌 330001； 2.南昌大学第一附属医院a.肿瘤科； b.普外科,南昌 330006; 3.南昌市第三医院肝胆外科,南昌330009)



CHAF1A在肝细胞癌组织中的表达及其临床意义

付慧英1，黄灿2a,鄢业鸿2b，彭小东2a，张志谦3

(1.中国人民解放军第94医院肿瘤科,南昌 330001； 2.南昌大学第一附属医院a.肿瘤科； b.普外科,南昌 330006; 3.南昌市第三医院肝胆外科,南昌330009)

摘要：目的研究染色质装配因子1(Chromatin assembly factor 1，CAF-1)的最大亚基p150(CHAF1A)在原发性肝细胞癌中的表达情况，并分析其表达与原发性肝细胞癌患者的性别、年龄、病理分化、门静脉癌栓、肿瘤大小、临床分期、血清HBsAg状况、肝硬化及血清AFP水平等临床病理特征的关系。方法筛选自2010年6月至2014年10月在南昌大学第一附属医院普外科行手术切除，并且全部经过病理诊断证实为原发性肝细胞癌的患者80例，取对应患者病灶边缘2 cm处的正常肝组织80例及因外伤或肝内胆管结石行手术切除的正常肝组织患者20例分别作为癌旁和正常对照。应用免疫组织化学检测CHAF1A在肝癌组织、癌旁肝组织、正常肝组织中的表达，采用χ2检验分析CHAF1A在这三组中的表达差异，并分析CHAF1A的表达与肝癌临床病理特征的关系。结果CHAF1A在正常肝组织和癌旁肝组织的高表达率显著高于肝癌组织(P<0.05)。CHAF1A在不同病理分化肝癌组织中的高表达率差异有统计学意义(P=0.027)；在有无伴门静脉癌栓肝脏组织中，高表达率差异有统计学意义(P<0.05)。CHAF1A在肝癌组织中的表达与性别、年龄、临床分期、肿瘤大小、血清HBsAg、肝硬化及血清AFP水平无相关性(P>0.05)。结论CHAF1A的表达可能影响肝癌组织分化和侵袭性。但与肝癌患者的性别、年龄、临床分期、肿瘤的大小、HBsAg状况、肝硬化及血清AFP水平无相关性。

关键词：CHAF1A； 原发性肝细胞癌； 免疫组化； 门脉癌栓； 低分化

染色质装配因子1(Chromatin assembly factor 1，CAF-1，一个由p150、p60、p48三个亚基组成的异源三聚体复合物，其主要功能是作为一个组蛋白分子伴侣能沉积H3和H4到新合成的DNA复制叉上，以促进核小体装配的第一步[1]。随后有报道CAF-1不但参与DNA合成、修复后染色质装配，而且在调控异染色质的合成和修复中都扮演着重要的角色[2]。有报道[3]证实，CAF-1特别是p150亚基(后统称“CHAF1A”)是负责桥接细胞周期进展和激活DNA损伤检查点的关键基因，CAF-1/CHAF1A故障会导致持续的细胞增殖，抵抗细胞死亡，增加基因组的不稳定性，最终表现一个更具侵袭性的癌症表型。CHAF1A被证实其的表达特性和乳腺癌、前列腺癌、舌癌、大肠癌、神经胶质瘤、胶质母细胞瘤和神经母细胞瘤等[4-12]疾病的发病机制有关。但目前CHAF1A在肝癌中表达情况的相关研究在国内外很少有报道。

1资料与方法

选自2010年6月至2014年10月在南昌大学第一附属医院普外科行手术切除，并且全部经过病理诊断证实为原发性肝细胞癌的患者80例，取对应患者病灶边缘约2 cm处的正常肝组织80例及因外伤或肝内胆管结石行手术切除的正常肝组织患者20例分别作为癌旁和正常对照。病例入组标准：1)所有患者术前均未接受其他治疗(包括放疗、化疗及介入治疗等)；2)所选患者都是第1次行肝癌根治性切除术，并且全部经过病理诊断证实为原发性肝细胞癌；3)术前均行包括三大常规、生化常规、血清AFP、血清HBsAg状况、胸腹部CT(肝增强扫描)、心电图等术前常规检查；4)20例正常肝组织患者手术前都行上述常规检查，结果都未见异常。

1.1临床病理资料

80例肝癌患者中：男72例，女8例；年龄19～72岁，中位年龄为50.72，其中<50岁的30例，≥50岁的50例；按肿瘤的大小分，其中<5 cm的36例，≥5 cm的44例；其中按高、中、低病理分化程度划分，依次为7、66、7例；按有无伴门静脉癌栓的划分，伴有者15例，不伴有者65例；按临床分期[13]划分，Ⅰ期18例，Ⅱ期21例，Ⅲ期41例，分为Ⅰ～Ⅱ期 39例和Ⅲ～Ⅳ期 41例2组；按是否伴有肝硬化划分，伴有者36例，不伴有者44例； AFP<400 ng·mL-1患者50例，AFP≥400 ng·mL-130例；按血清HBsAg表达状况划分，阳性者57例，阴性者23例。

本实验中按Edmondson4级分法[14]把肝细胞癌分3个等级：Ⅰ级为高分化，Ⅱ、Ⅲ级为中分化，Ⅳ级为低分化。

1.2免疫组化

CHAF1A兔抗人单克隆一抗[EPR5576(2)](ab126625)购自英国abcam生物科技公司。多聚赖氨酸、即用型通用二抗sp-9000(sp-9000)、DAB(zli-9032)显色试剂，都是购自河北博海生物工程开发有限公司。实验步骤按试剂盒说明书进行,一抗稀释度为1：200。以柠檬酸盐进行抗原修复,4e孵育过夜,DAB显色,以胞浆染为棕黄色为阳性细胞。本实验中对3组标本的阴性对照都以PBS代替CHAF1A兔抗人单克隆一抗。

1.3结果判断

由2位有经验的病理医师采取双盲法对免疫组织化学检测结果进行评估，结果评分均采用双评分半定量法。具体判断方法和标准如下：

1)染色强度评分标准：根据阳性表达于细胞膜或(和)胞浆上呈现棕黄色颗粒定，不显色定0分，呈现淡黄色定1分，呈现棕黄色定2分，呈现棕褐色定3分。

2)阳性细胞率评分标准：每张切片上随机取5个高倍视野，计算阳性细胞的比例进行评分，<5%为0分，5～25%为1分，25～50%为2分，>50%为3分。

3)免疫组化评价标准：将两分相乘，0分为“-”，1～2分为“+”，3～5分为“”，6分以上为“”。

4)表达水平判断标准：表达水平为“-～+”定为低表达，表达水平“～”归类为高表达，高表达比率为表达强阳性率。

1.4统计学方法

所有分析应用SPSS 17.0软件进行统计学处理，CHAF1A在肝癌组织与相应癌旁肝组织及正常肝组织中高表达率之间的差异分别进行χ2检验；并分别对CHAF1A在肝癌组织中表达与肝癌各临床病理特征之间的相关性采用χ2检验进行统计学分析；以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1CHAF1A分别在肝癌组织、癌旁肝组织、正常肝组织中表达的比较

检测CHAF1A在肝癌组织、癌旁肝组织、正常肝组织的表达，结果显示阳性染色定位于细胞浆中呈弥散或散在分布，细胞核染色为阴性。其中在80例肝癌组织中，有4例胞浆中未见着色，76例标本中CHAF1A呈现不同的阳性表达；而CHAF1A在所有的另外2组组织中都呈现不同的阳性表达。CHAF1A在上述3类组织中的阳性表达率分别为95%(76/80)、100%(80/80)、100%(20/20)，高表达率分别为47.5%(38/80)、87.5%(70/80)、95%(19/20)。(见封四图1)结果显示CHAF1A在上述3类组织中的阳性表达率呈上升趋势；肝癌组织和癌旁肝组织及肝癌组织和正常肝组织之间的高表达率比较，差异有统计学意义(P<0.05)。

2.2CHAF1A在肝癌组织表达与各临床病理特征之间的关系

2.2.1CHAF1A在肝癌组织表达与患者性别、年龄的关系

在本实验80例肝癌患者中男性72例，女性8例，CHAF1A在2组中的高表达率分别是48.6%(35/72)、37.5%(3/8)，2组比较差异无统计学意义(P=0.55)。所选80例患者中年龄在19～72岁之间，平均年龄为(50.72±11.48)岁，其中<50岁的30例，≥50岁的50例，CHAF1A在2组中的高表达率分别为36.7%(11/30)、54.0%(27/50)，2组比较差异无统计学意义(P=0.133)。见表1。

2.2.2CHAF1A在肝癌组织中表达与临床分期及肿瘤大小的关系

80例肝癌患者分为Ⅰ～Ⅱ期39例和Ⅲ～Ⅳ期41例2组，高表达率分别是48.7%(19/39)、46.3%(19/41)，2组比较差异无统计学意义(P=0.832)。80例肝癌患者肿瘤大小<5 cm的36例，≥5 cm的44例，高表达率分别是52.8%(19/36)、43.2%(19/44)，2组比较差异无统计学意义(P=0.393)。见表1。

2.2.3CHAF1A在肝癌组织中表达与病理分化及门静脉癌栓与否的关系

80例肝癌患者按高、中、低病理分化程度分为3组，CHAF1A在3组中的高表达率分别是85.7%(6/7)、47.0%(31/66)、14.3%(1/7)，3组之间差异有统计学意义(P=0.027)。按有无伴门静脉癌栓的分组，伴有者15例，不伴有者65例，CHAF1A在2组的高表达率分别是20.0%(3/15)、53.8%(35/65)，两者之间差异有统计学意义(P=0.018)。见表1。

2.2.4CHAF1A在肝癌组织中表达与肝硬化、血清AFP水平及血清HBsAg的关系

80例肝癌患者按是否伴有肝硬化分组，其中伴有者36例，不伴有者44例(表1)，CHAF1A在2组的高表达率分别是41.7%(15/36)、52.3%(23/44)，2组间差异无统计学意义(P=0.345)。80例肝癌患者中AFP≥400 ng·mL-1患者50例，AFP>400 ng·mL-130例，CHAF1A在2组的高表达率分别是52.0%(26/50)、40.0%(12/30)，差异无统计学意义(P=0.298)。按血清HBsAg表达状况分组，阳性者57例，阴性者23例，CHAF1A在2组高表达率分别是47.4%(27/57)、47.8%(11/23)，差异无统计学意义(P=0.970)。见表1。

3讨论

年龄、肿瘤大小、肝硬化等临床病理特征是原发性肝癌的预后评价因素 。在本研究中笔者检测CHAF1A在80例肝癌组织及其相应癌旁肝组织、20例正常肝组织中的表达情况，结果显示阳性染色定位于细胞浆中呈弥散或散在分布，细胞核染色为阴性。正常肝组织高表达率>癌旁组织>肝癌组织，提示在肝癌的发生过程中同时伴随着CHAF1A表达量的下降。有研究证实，CHAF1A在人类结肠癌组织中的表达阳性染色主要定位于细胞核，并指出CHAF1A在人类结肠癌组织普遍为过表达[4]，这与本实验中肝癌组织的表达不同。

笔者检测到CHAF1A在肝癌高、中、低分化的细胞中表达逐渐减少甚至不表达。伴有门静脉癌栓患者的组织CHAF1A的高表达率低于无癌栓者，从另外一个方面提示CHAF1A在一定程度上具有影响肝癌分化和侵袭能力的作用。Staibano等[10]应用免疫组化检测CAF-1的两大亚基p60，p150在舌鳞癌中的表达，结果显示CAF-1/p150下调提示不良预后，可以作为判断预后指标之一，这和肝癌中的结果较吻合。CHAF1A可能是抑癌基因或者通过间接作用抑制肝癌和其他一些肿瘤的产生和发展。

本研究结果显示CHAF1A表达下调与肝癌患者的性别、年龄、血清HBsAg的状况、肝硬化、血清AFP值、肿瘤大小及临床分期临床特征之间无明显相关性。目前已经很明确肝癌的发生与HBV感染及肝硬化密切相关，而HBV致癌机理与HBV基因组引起宿主细胞基因受伤有关。结果显示CHAF1A表达与HBsAg阳性与否及有无伴肝硬化无相关性，此结果可能需要更深入的研究来证实。而血清AFP在临床上是用来诊断和评价肝癌预后的重要标志物。AFP在正常人体内表达很低，而肝癌细胞自身可产生AFP[13]，癌变时有可能升高。但是其浓度与肿瘤的大小有关，而且并非所有肝癌细胞都分泌这种蛋白，尤其在早期和小细胞肝癌时，AFP的升高并不明显，容易造成漏诊[14]。CHAF1A有潜力成为不依赖于AFP的肝癌标记物。这些结果显示CHAF1A表达可能在肝癌的发生发展中扮演着重要角色。

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(责任编辑：刘大仁)

The Expression and Clinical Value of CHAF1A in Hepatocellular Carcinoma

FU Hui-ying1,HUANG Can2a,Yan Ye-hong2b,PENG Xiao-dong2a,ZHANG Zhi-qian3

(1.DepartmentofOncology，the94thHospitaloftheChinesePeople’sLiberationArmy,Nanchang330001,China； 2a.DepartmentofOncology；2b.DepartmentofGeneralSurgery,theFirstAffiliatedHospitalofNanchangUniversity,Nanchang330006,China； 3.DepartmentofLiverSurgery,theThirdNanchangHospital,Nanchang330009,China)

ABSTRACT：ObjectiveResearch the expression of largest subunit p150 of Chromatin assembly factor 1 (CAF-1) (CHAF1A) in hepatocellular carcinoma (HCC),and analyze the ralativity between its expression and clinical pathological characteristics of HCC patients.such as age,gender,pathological differentiation,portal venous tumor emboli,tumor size,clinical stage,HBsAg situation,cirrhosis of the liver and serum AFP.MethodsScreening 80 patients,all of them from June 2010 to October 2014 have accepted surgical resection in the first affiliated hospital of Nanchang university general surgery,and are confirmed by pathological diagnosis to be HCC.Tumor tissues and normal liver tissues 2 cm far near the cancer and normal liver tissues of 20 patients due to trauma or intrahepatic biliary calculi surgical resection of tissues are collected.Expression of CHAF1A in liver cancer are detected by immunohistochemistry.The differences of CHAF1A expression in the three groups and the relationship between expression of CHAF1A with clinical pathological characteristics of patients.ResultsThe high expression rate of CHAF1A in paraneoplastic and normal liver tissue was significantly higher than that in liver cancer tissue(P<0.05).CHAF1A expression in poorly differentiation liver cancer tissue or liver cancer tissue associated with portal venous tumor emboli is lower than high differentiation liver cancer tissue(P=0.027) or no portal venous tumor emboli (P<0.05).The expression of CHAF1A in liver cancer tissue is not related with gender,age,clinical stage,tumor size,HBsAg,cirrhosis of the liver and serum AFP Of patients(P>0.05).ConclusionCHAF1A expression maybe affect differentiation and invasiveness of liver cancer .The expression of CHAF1A in liver cancer tissue is not related with gender,age,clinical stage,tumor size,HBsAg,cirrhosis of the liver and serum AFP Of patients.

KEY WORDS：CHAF1A; hepatocellular carcinoma; Immunohistochemistry;portal vein tumor thrombosis; poorly differentiated

收稿日期：2015-10-20

作者简介：付慧英 (1979—)，女，硕士，住院医师，主要从事消化系统恶性肿瘤的综合诊治研究。

通信作者：彭小东，主任医师，E-mial:pxddhbb@163.com

中图分类号：R735.7

文献标志码：A

文章编号：1009-8194(2016)01-0005-05

DOI:10.13764/j.cnki.lcsy.2016.01.002