排钱草药材质量评价方法的研究

钟 鸣， 张宝璟， 王 超， 余胜民， 宗 杨， 马骁驰， 张厚利 *

（1.广西民族医药研究院，广西南宁530001；2.大连医科大学药学院，辽宁大连116044）



排钱草药材质量评价方法的研究

钟 鸣1， 张宝璟2， 王 超2， 余胜民1， 宗 杨2， 马骁驰2， 张厚利2 *

（1.广西民族医药研究院，广西南宁530001；2.大连医科大学药学院，辽宁大连116044）

摘要：目的 建立排钱草药材的质量评价方法。方法 采用TLC鉴别法，以三氯甲烷-甲醇（4∶1）为展开剂，在紫外光灯（254 nm）下检视排钱草中N，N-二甲基色胺及5-甲氧基-N，N-二甲基色胺。再采用HPLC色谱法，对两者含有量进行测定。结果 在TLC鉴别中，254 nm下有一个明显的荧光斑点，分离度良好；在HPLC色谱中，N，N-二甲基色胺、5-甲氧基-N，N-二甲基色胺进样量在2～30 μg/m L范围内与峰面积均呈现出良好的线性关系（n =5），两者平均回收率分别为99.8％、100.5％，RSD分别为1.06％、1.83％。而且，不同采收期、部位的排钱草中这两种成分含有量有明显差异。结论 该方法可用于排钱草药材的质量控制。

关键词：排钱草；质量评价；N，N-二甲基色胺；5-甲氧基-N，N-二甲基色胺；TLC；HPLC

排钱草为我国壮族民间常用草药，来源于豆科植物排钱树Phyllodium pulchellum（L.）Desv的干燥根，别名钱排草、叠钱草、钱串草，主要分布于福建、江西、两广等地，其性平，味涩，具有活血祛瘀、清热利湿、除湿消肿、软坚散结等功效，常用来治疗急、慢性肝炎、血吸虫病、肝脾肿大、子宫脱垂、跌打损伤等症［1］。其中，排钱草总生物碱对人肝星状细胞增殖具有抑制作用，并同时抑制肝纤维化相关胶蛋白的表达［2］；对化学损伤性肝纤维化具有较强的改善作用，能显著降低血清ALP、ALT的活性，降低肝脏Hyp水平［3］；通过观察大鼠肝脏组织病理改变，发现它可明显减轻肝纤维化的病变程度，抑制肝纤维化的发展［3］；能显著降低免疫性肝纤维化大鼠肝脏组织Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达［4］；能提高免疫性肝纤维化大鼠血清IFN-γ的水平，改善肝组织纤维化程度［5］。从排钱草中分离得到的化学成分主要为生物碱、醇、糖、挥发油以及酚等，其中种子中含有棕榈酸、硬脂酸、油酸、亚油酸、亚麻酸，同时还含有大黄素甲醚-1-葡萄糖基鼠李糖苷、半乳糖配甘露糖等［6］；根部含有a-香树脂醇、白桦脂醇以及β-谷甾醇；全株富含柠檬酚、异柠檬酚、蟾毒色胺、禾草碱等［7］。另外，干宁等［8］从排钱草正丁醇萃取物中分离得到N，N-二甲基色胺、5-甲氧基-N，N-二甲基色胺。

查阅相关文献发现，排钱草这一民族草药至今仍未被《中华人民共和国药典》收载，有关其总生物碱化学成分的文献报道也很少，故有必要对其建立一套完整的质量标准研究体系，以期为排钱草药材的合理开发与质量控制提供依据。

1 仪器与材料

Satorius BS210S电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）；KQ3200DB数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；U1timate 3000高效液相色谱仪，包括UV-DAD检测器（美国Dionex公司）；Diamonsi1色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）。甲醇、磷酸、氯仿、石油醚（60～90℃）、乙酸乙酯、丙酮均为分析纯；乙腈为色谱纯；水为HPLC柱色谱用水、娃哈哈纯净水。薄层色谱板（青岛海洋化工有限公司）。N，N-二甲基色胺、5-甲氧基-N，N-二甲基色胺标准品（自制，经HPLC色谱仪检测，其纯度＞99％）。排钱草由广西南宁民族医药研究所药理室钟鸣教授提供。

2 排钱草药材薄层鉴别

2.1 对照品溶液的制备 分别精密称取N，N-二甲基色胺、5-甲氧基-N，N-二甲基色胺对照品适量，加甲醇制成1 mg/mL的对照品溶液，即得。

2.2 供试品溶液的制备 取9月采自广西的排钱草根部粗粉0.1 g，加入甲醇10 mL，超声（100 Hz）处理30 min，甲醇补至10 mL，过滤，即得。

2.3 薄层条件 吸取供试品溶液8 μL、对照品溶液2 μL，分别点于同一块以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF254薄层板上，在以三氯甲烷-甲醇（4∶1）、氨饱和蒸气为展开剂的溶剂中展开，取出，晾干，置紫外灯（254 nm）下检视，结果见图1（a），荧光斑点清晰可见。然后，再喷以改良碘化铋钾溶液，日光下观察，结果见图1（b），供试品色谱在与对照品色谱相应的位置上，显现出相同颜色的橙色斑点。

a.254 nm下 b.日光下1～3.排钱草药材的叶、枝、根 4.N，N-二甲基色胺 5. 5-甲氧基-N，N-二甲基色胺1 -3.1eaves，stems and rootsof Phllodium pulchellum 4.N，N-dimethy1tryptamine 5. 5-methoxy-N，N-dimethy1tryptamine图1　排钱草薄层色谱图Fig.1 TLC chromatogram s of Phllodium pulchellum

3 排钱草药材有效成分含有量的测定

3.1 N，N-二甲基色胺、5-甲氧基-N，N-二甲基色胺含有量的测定

3.1.1 对照品溶液的制备 同“2.1”项

3.1.2 供试品溶液的制备 同“2.2”项

3.1.3 色谱条件 Diamonsi1ODS色谱柱（4.6 mm× 250 mm，5 μm）；流动相为乙腈-水（含0.03％磷酸），梯度洗脱（0～15 min，5∶95；15～25 min，90∶10；25～40 min，5∶95）；体积流量1.0 mL/min；检测波长220 nm；进样量10 μL；柱温30℃。理论塔板数按5-甲氧基-N，N-二甲基色胺峰计算，应不低于3 000。然后，吸取对照品以及供试品溶液各10 μL，依次进样测定，结果见图2。

3.1.4 线性关系考察 精密称取5-甲氧基-N，N-二甲基色胺对照品（0.5 mg/mL）溶液2、5、10、20、30 μL，再精密称取N，N-二甲基色胺对照品（0.05 mg/mL）溶液2、5、10、20、30 μL，依次进样，在“3.1.3“项色谱条件下测定峰面积，以峰面积（Y）对进样量（X）进行回归，得到5-甲氧基-N，N-二甲基色胺的标准曲线方程Y=5.184 7X+0.512 5，r=0.998 2（n =5），N，N-二甲基色胺的标准曲线方程Y=5.121 8X+0.586 9，r=0.996 8（n =5）。结果表明，5-甲氧基-N，N-二甲基色胺在1～15 μg范围内，N，N-二甲基色胺在0.1～1.5 μg范围内，与峰面积均呈良好的线性关系。

A.排钱草 B.N，N-二甲基色胺 C.5-甲氧基-N，N-二甲基色胺A.Phllodium pulchellum B.N，N-dimethy1tryptamine C.5-methoxy-N，N-dimethy1tryptamine图2　HPLC色谱图Fig.2 HPLC chrom atogram s

3.1.5 精密度考察 取5-甲氧基-N，N-二甲基色胺对照品溶液适量，在“3.1.3“项色谱条件下重复进样5次。结果，测定其峰面积RSD为1.89％ （n =5），表明仪器精密度良好。

3.1.6 重复性试验 取同一样品制备5份供试品溶液，在“3.1.3“项色谱条件下测定N，N-二甲基色胺以及5-甲氧基-N，N-二甲基色胺的含有量。结果，两者峰面积RSD分别为1.51％、1.45％ （n =5），表明该方法重复性良好。

3.1.7 稳定性试验 取同一份供试品溶液适量，在“3.1.3“项色谱条件下，于0、2、4、8、12、24 h进样。结果，测定N，N-二甲基色胺以及5-甲氧基-N，N-二甲基色胺峰面积RSD分别为1.21％、1.18％，表明供试品溶液在24 h内稳定。

3.1.8 加样回收率试验 取排钱草粉末0.1 g，共10份，取5份加入5-甲氧基-N，N-二甲基色胺（1 mg/mL）溶液2 mL，剩下5份加入N，N-二甲基色胺（1 mg/mL）对照品0.1 mL，按照“3.1.2”项下方法制备供试品溶液，在“3.1.3”项色谱条件下进样分析，测定峰面积，计算回收率，结果见表1和表2。

表1　5-甲氧基-N，N-二甲基色胺加样回收率试验Tab.1 Recovery tests for 5-m ethoxy-N，N-dim ethyltryptam ine

表2　N，N-二甲基色胺加样回收率试验Tab.2 Recovery tests for N，N-dimethyltryptam ine

3.1.9 样品测定 取不同采摘时间、部位的排钱草药材（产地广西）适量，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，在“3.1.3“项色谱条件下分析，结果见表3。

表3　排钱草中两种成分含有量测定结果（±s，n=5）Tab.3 Determ ination results of the contents of two constituents in Phllodium pulchellum（±s，n=5）

表3　排钱草中两种成分含有量测定结果（±s，n=5）Tab.3 Determ ination results of the contents of two constituents in Phllodium pulchellum（±s，n=5）

采摘时间　部位　　含有量（g/100 g生药）N，N-二甲基色胺　5-甲氧基-N，N-二甲基色胺3月　叶　　—2.90±0.12枝—1.37±0.15根　0.113±0.10　2.75±0.13 9月　叶　　—　3.40±0.12枝—1.54±0.13根　0.106±0.08　3.26±0.10 11月　根0.110±0.05　2.98±0.11

4 讨论

在薄层色谱法鉴别试验中，分别对三氯甲烷-甲醇、石油醚-丙酮、三氯甲烷-丙酮、乙酸乙酯-甲醇、三氯甲烷-丙酮-甲醇（均在氨饱和蒸气中展开）进行了考察，结果以三氯甲烷-甲醇（4∶1）、氨饱和蒸气为展开剂的溶剂系统的薄层色谱保留行为最好，因此选择该展开剂溶剂系统。同时，本实验采用紫外灯（254 nm）下检视和喷以碘化铋钾溶液显色两种方法来考察实验结果，并互相印证，结果表明该方法具有分离度好、斑点清晰、简便易行等特点，可用于排钱草药材的鉴别。

提取溶剂选择了甲醇、酸提碱沉-乙醇提取法、酸提碱沉-三氯甲烷萃取法进行比较，同时对样品进行了回流提取与超声提取的对比研究。结果显示，选择甲醇超声提取药材时，提取效果好、效率高。

本实验将薄层色谱与高效液相色谱法结合，该质量评价方法较以往单一评价指标更科学、系统。通过对广西不同时节、部位排钱草药材中有效成分含有量的测定结果可知，其叶与枝均不含N，N-二甲基色胺，而根部则含有该成分，但由于其含有量较低，所以在薄层色谱中没有检测到相应斑点，而利用敏感度较高的HPLC色谱则检测到这一特征吸收峰。同时，排钱草的叶、枝、根部均含有5-甲氧基-N，N-二甲基色胺，并且在9月份药材根部中，其含有量最高，另外叶中该成分的含有量明显高于枝。综上所述，在今后的质量控制中，应主要选择广西9月排钱草药材的根部进行重点研究，可达到更好的试验效果，而其他地方不同时节排钱草药材中有效成分的含有量测定还需作进一步研究。

参考文献：

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［3］ 罗崇念，卞庆亚，王 硕.排钱草的药理研究与临床应用［J］.广西医科大学学报，2009，26（1）：158-160.

［4］ 钟 鸣，余胜民，杨增艳，等.排钱草总生物碱对免疫性肝纤维化大鼠Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原及TGF-β1表达的影响［J］.中西医结合肝病杂志，2005，15（1）：38-40.

［5］ 黄琳芸，钟 鸣，杨增艳，等.排钱草总生物碱对肝纤维化大鼠血清干扰素-γ和肝脏组织病理学的影响［J］.中国中医药科技，2006，13（2）：101-102.

［6］ Joshi K C，Bansa1R K，Singh P，etal.Componentsof the stem barks of Phyllarthron-comorense and Jacaranda-mimosaefolia and the roots of Desmodium pulchellum［J］.Indian J Chem，1975，13（8）：869-870.

［7］ Shen C C，Wang S T，Tsai S Y，et al.Cinnamy1pheno1s from Phyllodium pulchellum［J］.J Nat Prod，2005，68（5）：791-793.

［8］ 干 宁，李天华，杨 欣，等.毛排钱草的化学成分分析及其抗肿瘤活性研究［J］.中草药，2009，40（6）：852-856.

Quality evaluation of Phllodium pulchellum

ZHONGMing1， ZHANG Bao-jing2， WANG Chao2， YU Sheng-min1， ZONG Yang2， MA Xiao-chi2，ZHANG Hou-1i2 *
（1.Guangxi Instituteof Nationality Medicine，Nanning 53OOO1，China；2.College of Pharmacy，Dalian Medical University，Dalian 116O44，China）

ABSTRACT：AIM To estab1ish a method for the qua1ity eva1uation of Phllodium pulchellum.METHODS TLC was app1ied to detecting 5-methoxy-N，N-dimethy1tryptamine and N，N-dimethy1tryptamine in Phllodium pulchellum with ch1oroform-methano1（4∶1）as deve1oping so1ventunder the UV 1ight（254 nm）.Then HPLCwas adopted to determine the contents of these two constituents.RESULTS In TLC，it had a distinct f1uorescence spot under 254 nm with good separation.In HPLC，N，N-dimethy1tryptamine and 5-methoxy-N，N-dimethy1tryptamine showed good 1inear re1ationships in the ranges of 2 -30 μg/mL，whose average recoverieswere 99.8％（RSD= 1.06％）and 100.5％（RSD=1.83％）.In addition，the contents of these two constituents in different picking time and parts of Phllodium pulchellum showed obvious difference.CONCLUSION Thismethod can be used for the qua1ity contro1of Phllodium pulchellum.

KEYWORDS：Phllodium pulchellum；qua1ity eva1uation；N，N-dimethy1tryptamine；5-methoxy-N，N-dimethy1-tryptamine TLC；HPLC

*通信作者：张厚利，女，副教授，硕士生导师，从事中药药理学研究。Te1：15842660928，E-mai1：hou1izh@163.com

作者简介：钟 鸣，男，教授，研究员，从事中药药效物质基础研究。E-mai1：gxmyskjb@163.com

基金项目：辽宁省科技厅省自然科学基金（2015020667）

收稿日期：2015-04-29

doi：10.3969/j.issn.1001-1528.2016.01.029

中图分类号：R284.1

文献标志码：A

文章编号：1001-1528（2016）01-0130-04