松针提取物对大鼠血管内皮依赖性舒张的影响

●韦磊 李金玲 赵敏

松针提取物对大鼠血管内皮依赖性舒张的影响

●韦磊 李金玲 赵敏

据世界卫生组织报告，目前全世界每年死于心血管疾病的人数已占发达国家的近50%，发展中国家的25%。心血管疾病已成为第二大死亡因素。心血管疾病的发生又与血管内皮功能障碍有关。当血管内皮受损时，血管舒张活性物质PGI2与NO的产生减少，缩血管因子增多，打破血管平衡稳态，最终导致一系列心血管疾病的发生。而我们研究的松针提取物的主要成分为松针黄酮。

松针提取物；血管；影响

1 研究背景

松针黄酮，pineneedie flavonoid，是从松针中提取出来的。可用于扩张动脉血管，增加红血球携氧能力，促进血液循环，改善毛细血管的机能，提高免疫力，增加荷尔蒙的分泌，使身体的组织年轻化。且pinececdie flamnoid对心血管系统有很好的疗效，如心脏功能方面，扩张血管、抑制ACEI酶和改善微循环，并有很强的抗炎作用。这些作用的机理表明松针黄酮具有消除氧和氮自由基作用。而我们研究的对松针提取物与血管内皮依赖性舒张作用的研究文献甚少，所以通过我们的研究可以为临床治疗提供另一种方法。

2 研究目的和意义

心血管疾病一直是造成人类死亡的一大疾病因素，松针黄酮可通过诱导血管平滑肌松弛而产生舒张血管的作用，且本研究为扩大松针黄酮的临床作用提供实验依据。

通过本实验能探明松针提取物对血管内皮舒张的影响。随着中药制剂的研发，将会为心血管疾病患者提供更多安全、有效、经济的治疗药物。

3 研究方法

（1）建立血管环模型。

（2）设计对照实验。

（3）通过BL-820s生物机能实验系统采集数据，并进行结果分析。

4 研究方法与步骤

4.1 实验前准备

（1）动物：健康SD大鼠（260-300g）20只，由张店实验动物饲养中心提供，雌雄兼用。随机分为内皮完整祖，去内皮组，每组10只。

（2）仪器及设备：手术操作器械（大小剪刀、组织剪、止血钳、镊子、缝合线、玻璃分针）、鼠板、注射器（1ml、2ml）、培养皿、恒温灌流装置、血管环连接装置、脱脂棉

（3）药品：松针黄酮，粉末状，苯肾上腺素Phe（10-6mol/ L）、Krebs液（成分NaCl 118 mol/L， KCl 4.75 mol/L, KH2PO4 1.18 mol/L，MgSO4 1.18 mol/ L,， CaCl2 2.5 mol/L, NaHCO3 25 mol/L， glucose 11 mol/L，PH 7.4）、乙酰胆碱Ach（10-6mol/L）生理盐水、乌拉坦。

（4）连接恒温装置，调节水温为37℃，内置Krebs液5ml于恒温水浴槽中，持续通入95%O2加5%CO2的混合气体。

4.2 血管环模型建立

（1）用乌拉坦对大鼠进行腹腔麻醉，迅速取出胸主动脉，在Krebs液中分离结缔组织。

（2）内皮完整组：将剥离后的血管剪成2-3mm的血管环，动作要轻柔，防止内皮损伤，血管环用两根不锈钢微型三角挂钩贯穿血管管腔，悬挂在浴管中，下方固定，上方以一根细钢丝连于张力换能器。

（3）接张力换能器与 BL-820s生物机能实验系统后，初始张力调为2g，平衡1.5h，每15min更换Krebs液1次。

（4）用乙酰胆碱（Ach）10-6mol/L,舒张苯肾上腺素（Phe）所致的收缩反应以检查内皮完整性。若加入Ach后，血管内皮舒张程度大于60%，则认为内皮基本完整，不产生舒张或者舒张幅度小于10%视为去内皮成功。符合条件的血管环用于实验。检查完毕后，将血管环冲洗至刺激前的状态，再稳定30min，每隔15min换液一次，然后进一步检测药物对血管环张力的影响。

（5）去内皮组：在制备去内皮血管环时，先用棉花签插入动脉内，轻轻地向同一方向旋转数圈，再将血管剪成2-3mm的血管环。血管环用两根不锈钢微型三角挂钩贯穿血管管腔，悬挂在浴管中，下方固定，上方以一根细钢丝连于张力换能器。重复之前步骤做实验。

5 结果分析与讨论

（1）松针黄酮对Phe引起的内皮完整胸主动脉环收缩张力的影响。以10-6mol/ L的Phe作用于血管环，引起血管收缩，作用约15min，收缩达稳定后，将松针黄酮溶液分别加入到4个浴管中，使松针黄酮的最终浓度依次为10-4mol/L、10-5mol/L、10-6mol/L，最后一个加入生理盐水，观察血管环张力的变化。结果发现三种实验浓度的松针黄酮对Phe引起的内皮完整胸主动脉环收缩均有舒张作用，且高浓度的松针黄酮抑制作用比低浓度的舒张作用强，而只加生理盐水的血管环张力未变化。说明松针黄酮对血管内皮有依赖性舒张的作用。经方差分析处理，差异有统计学意义（P＜0.05）。

（2）松针黄酮对Phe引起的去内皮胸主动脉环收缩张力的影响以10-6mol/ L的Phe作用于血管环，引起血管收缩，作用约15min，收缩达稳定后，将松针黄酮溶液分别加入到4个浴管中，使松针黄酮的最终浓度依次为10-4mol/L、10-5mol/L、10-6mol/L，最后一个加入生理盐水，观察血管环张力的变化。结果发现在加入松针黄酮后，血管环张力无明显变化，说明松针黄酮对去内皮的血管环无明显影响。经方差分析处理，差异无统计学意义（P＞0.05）。

6 结论与展望

松针黄酮对苯肾上腺素引起的大鼠内皮的收缩有一定的抑制作用，即松针黄酮对大鼠胸主动脉环有内皮依赖性舒张作用。且可以看出高浓度的松针黄酮抑制作用比低浓度的舒张作用强。

松针黄酮应用越来越引起人们的重视，人们对松针黄酮的研究越来越细化，也会逐步由器官到细胞以及分子水平去研究松针黄酮，若本验可以达到预期目标，则松针黄酮可经过鉴定应用于临床，对心血管疾病的治疗更上一层台阶，会为人类的健康事业作出更大的贡献。

（作者单位：齐鲁医药学院）

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