高效液相色谱仪检测食用林产品中10种氨基甲酸酯农药残留方法的优化

□李少军 付格红 窦延光 陕西省林业工业产品质量监督检验站

高效液相色谱仪检测食用林产品中10种氨基甲酸酯农药残留方法的优化

□李少军 付格红 窦延光 陕西省林业工业产品质量监督检验站

本文依据《蔬菜和水果中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯和氨基甲酸酯类农药多残留的测定》（NY/T 761-2008）中第三部分蔬菜和水果中氨基甲酸酯类农药多残留的测定，结合食用林产品特点和和本实验室仪器条件，采用高效液相色谱仪荧光检测器对此方法进行了优化，旨在满足陕西省林业工业产品质量监督检验站检测需要，建立一种适合批量食用用林产品氨基甲酸酯类农药多残留的分析方法。

材料与方法

材料与试剂

1 供试材料

普通板栗，样品量约2 kg。

2 试剂耗材

乙腈（美国Thermo Fisher，色谱纯）；甲醇（美国Thermo Fisher，色谱纯）；二氯甲烷（瑞典Oceanpak，色谱纯）；氯化钠（天津天力化学试剂有限公司，分析纯）；固相萃取柱氨基柱（500 mg/6 mL，天津博纳艾杰尔）；0.45 μm有机滤膜（津腾）；柱后衍生试剂：邻苯二甲醛、巯基乙醇、0.05 mol・L-1NaOH溶液和OPA（邻苯二甲醛）稀释液，生产厂家均为美国Pickering公司；标准物质溶液：涕灭威亚砜、涕灭威砜、灭多威、三羟基克百威、涕灭威、速灭威、克百威、甲萘威、异丙威和仲丁威（100 μg・mL-1，农业部环境保护科研监测所，基质丙酮），超纯水（密理博Millio-Q超纯水机制备，0.2 μm滤膜）。

仪器与设备

Waters高效液相色谱仪e2695，配荧光检测器FLD2475和柱后衍生系统； FP3205食品加工机（德国博朗）；XHF-DY型匀浆机（宁波新芝）；HH-8电热恒温水浴锅（常州国华）；HSC-24B型氮吹仪（天津恒奥科技）；MS3漩涡振荡器（IKA）。

方法

1 色谱条件

色谱柱Waters Carbamate Analysis 3.9×150 mm，流速1.5 mL/min，进样量20 μL，柱温30℃，荧光检测器λex339 nm,λem445 nm。

流动相溶剂梯度见表1。

2 柱后衍生条件

0.05 mol/L氢氧化钠，流速0.3 mL/ min；OPA试剂，流速0.3 mL/min；反应池温度80℃。

实验方法

1 样品的制备和提取

以四分法取出不少于1 000 g的板栗样品，去壳切碎，充分混匀后放入食品加工机粉碎，此为待测样。准确称取25.00 g样品于250 mL烧杯中，加入50 mL乙腈，高速匀浆2 min，定性滤纸过滤，滤液收集到装有5～7 g氯化钠的具塞量筒中，盖上塞子，用封口膜封，剧烈振荡2 min，室温下静置分层1 h，待净化。

2 净化

从具塞量筒中用移液器准确吸取10 mL乙腈相提取液于200 mL烧杯中，置烧杯于60℃水浴锅上加热，蒸发近干，加入2.0 mL甲醇+二氯甲烷（5+95）溶解残渣，待净化。

将氨基柱用6 mL甲醇+二氯甲烷（5+95）活化，待溶剂液面到达柱层吸附面时，立即加入样品溶解液，用25 mL试管收集洗脱溶液，用2 mL甲醇+二氯甲烷（5+95）洗涤烧杯过柱，重复2～3次。将试管置于氮吹仪上，水与温度50℃，氮吹蒸发近干，用甲醇+水（1+9）定容2.5 mL，涡旋混匀1 min，过0.45 μm有机滤膜，待测。

3 结果计算

试样中氨基甲酸酯农药残留量以ω计，单位以毫克每千克（mg/kg）表示，按如下公式计算：

式（1）中：

V1为提取溶剂总体积，单位为毫升（mL）；

A 为样品溶液中被测农药峰面积；

V3为定容体积，单位为毫升（mL）；

ρ 为标准溶液中质量浓度，单位为毫克每升（mg/L）；

V2为净化体积，单位为毫升（mL）；

As为标品溶液中被测农药峰面积；

m 为样品质量，单位为克（g）。

结果与分析

色谱条件的优化

1 标品溶剂的选择

标品溶剂对目标峰的影响很大，不同标品溶剂与峰面积和峰形直接有关。如果直接配制成混标进样，则由于丙酮相应非常高，再加上叠加效应，使标品峰压缩很低，但当对标品溶剂氮吹后，再配制成混标，则标品峰清晰美观（如图1所示）。当选用甲醇作为溶解试剂时，发现前3个峰拖尾，为平头峰，响应值也低，当选用近似于流动相起始比例的甲醇+水（1+9）配制成混标进样，则发现峰形尖锐，所有峰形相应值也较高（如图2所示）。

2 样品前处理优化

依据《蔬菜和水果中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯和氨基甲酸酯类农药多种残留的测定》（NY/T 761-2008）第三部分前处理，参考杨振兴 等人的方法，剧烈振荡时增加封口膜，防止提取液漏出。延长静置时间，增加氨基柱活化体积，增加洗脱中甲醇和二氯甲烷例和体积，加大甲醇比例，增强了对氨基甲酸酯农药的洗脱能力，提高了回收率。

3 流动相和流速

根据本实验室仪器条件，增大了流速，在流动相中增加了乙腈，缩短出峰时间。

4 定容溶液

依据相似相容原理，采用《蔬菜和水果中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯和氨基甲酸酯类农药多种残留的测定》（NY/T 761-2008）第三部分中用甲醇定容，发现同前3个峰也出现拖尾现象，当选用甲醇+水（1+9）2.5 mL定容进样后，则发现峰形尖锐对称。

5 柱后条件

当选用反应器温度为80℃时，反应完全，避免了100℃时反应器中产生气泡，影响荧光检测器。

线性范围

用甲醇+水（1+9）溶液对标准储备液进行稀释后，将不同农药标品配制成混合标准溶液系列，10种农药混合标品均为相同浓度系列0.1、0.3、0.5、0.7、1.0 mg/L，按照优化的色谱条件进行分析，可满足一般检测需求要求。

讨论

通过改变标准物质稀释溶液、定容溶液、流动相溶剂梯度、柱后衍生条件等，本方法在此仪器上的应用，不但分析快速，分离效果好，且准确度和灵敏度较高，对食用林产品中氨基甲酸酯农药多残留的批量检测具有较强的实用性。