高效液相色谱法测定复方党参片中丹酚酸B含量

刘茹丽

（重庆医科大学附属第二医院，重庆 400010）

高效液相色谱法测定复方党参片中丹酚酸B含量

刘茹丽

（重庆医科大学附属第二医院，重庆 400010）

目的 建立测定复方党参片中丹酚酸B含量的高效液相色谱（HPLC）法。方法 色谱柱为迪马C18柱（250 mm×4．6 mm，5 m），以甲醇－0．1%磷酸（33∶67）为流动相，检测波长为286 nm。结果 丹酚酸B进样量在0．209 6～4．192 0 g范围内与峰面积呈良好线性关系，平均回收率为98．10%，RSD为0．89%（n＝6）。结论 该法简便、准确，可用于制剂的质量控制。

丹酚酸B；复方党参片；高效液相色谱法

复方党参片由党参、丹参、金果榄等中药制成，具有活血化瘀、益气宁心的功效，用于心肌缺血引起的心绞痛及胸闷等。该品种原收载于《卫生部药品标准·中药成方制剂(第十三册)》，原质量标准中只有2个理化鉴别项目；后收载于《国家药品监督管理局颁布（试行）标准》[WS－11271（ZD－1271）－2002]。蒋珍藕等[1]采用薄层色谱（TLC）法对其中的党参、丹参、金果榄进行了定性鉴别，并采用高效液相色谱(HPLC)法测定丹参中丹参酮Ⅱ的含量。程显隆等[2]建立了复方党参片中党参和当归的TLC鉴别，以及丹参素含量测定的HPLC法。考虑到该制剂采用水煎煮提取工艺，结合2010年版《中国药典(一部)》[3]丹参项下含量检测指标，即丹参药用的是以丹酚酸B为主的水溶性成分，参考有关文献，研究并建立了复方党参片中丹酚酸B含量测定的HPLC法，为完善、提升该制剂质量控制水平提供理论依据。现报道如下。

1 仪器与试药

Shimadzu 2010型高效液相色谱仪，LC solution色谱工作站；Mettler AE240型电子天平（梅特勒公司）；KQ－400DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。丹酚酸B对照品（中国食品药品检定研究院提供，批号为111562－201102，供含量测定用）；甲醇为色谱纯，水为纯化水，其余试剂均为分析纯；复方党参片（市售品，批号分别为150301，150302，150303）。

2 方法与结果

2．1 色谱条件

色谱柱：迪马 C18柱（250 mm×4．6 mm，5 μm）；流动相：甲醇－0．1%磷酸（33∶67）；流速：1．0 mL／min；检测波长：286 nm。理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于3 000。

2．2 溶液制备

取丹酚酸B对照品适量，精密称定，加80%甲醇制成每1 mL含丹酚酸B 0．1 mg的溶液，即得丹酚酸B对照品溶液。取重量差异项下的本品20片，除去糖衣层，研细，取0．4 g，精密称定，置25 mL容量瓶中，加80%甲醇20 mL超声（200 W，40 kHz）处理30 min，取出，待冷却至室温后，用80%甲醇定容至刻度，摇匀，取续滤液，即得供试品溶液。按处方比例及制备工艺制备缺丹参的阴性样品，按供试品溶液的制备方法制得阴性对照品溶液。按拟订色谱条件进样测定，结果表明，处方中其他成分对丹酚酸B的测定无干扰，见图1。

2．3 方法学考察

线性关系考察：称取丹酚酸B对照品10．48 mg，精密称定，置10 mL容量瓶中，加80%甲醇使溶解，并用80%甲醇定容至刻度，摇匀。分别精密吸取对照品溶液0．2，0．5，1．0，2．0，4．0 mL置10 mL容量瓶中，加80%甲醇定容至刻度，分别进样10 μL测定，以丹酚酸B峰面积(Y)对进样量(X)进行线性回归，得丹酚酸B回归方程 Y＝241 165 X－9 942，r＝0．999 9(n＝5)。结果表明，丹酚酸B进样量在0．209 6～4．192 0 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

精密度试验：精密吸取同一对照品溶液10 μL，重复进样6次，依法测定。结果丹酚酸B峰面积的 RSD为1．27%(n＝6)，表明仪器精密度良好。

图1 丹酚酸B高效液相色谱图

稳定性试验：取2．2项下供试品溶液，按拟订色谱条件分别于0，1，2，4，8，12 h时进样。结果丹酚酸B峰面积的 RSD为1．10%(n＝6)，表明供试品溶液至少在12 h内稳定性良好。

重复性试验：取同一批（批号为20150301）样品6份，按2．2项下方法制备供试品溶液，按拟订色谱条件进样测定，计算丹酚酸B的含量。结果样品中丹酚酸B平均含量为每片2．85 mg，RSD为1．26%（n＝6），表明该方法重复性良好。

加样回收试验：取已知含量的样品（批号为20150301，淫羊藿苷含量为每片2．85 mg）6份，分别加入丹酚酸B对照品，照2．2项下方法制备供试品溶液，按拟订色谱条件进样测定丹酚酸B峰面积，计算回收率。结果见表1。

表1 丹酚酸B加样回收试验结果（n＝6）

2．4 样品含量测定

取3批样品，按2．2项下方法制备供试品溶液，并按拟订色谱条件及测定方法测定样品含量。结果批号为150301，150302，150303的样品中丹酚酸B每片含量分别为2．85，2．97，2．70 mg。

3 讨论

3．1 流动相选择

在试验过程中，曾选择甲醇－水、乙腈－水作为流动相，但色谱峰出现拖尾现象，分离效果不理想。参照文献[4－8]，在流动相中加入适量磷酸，可改善目标色谱峰形，提高分离效果。最后选定甲醇－0．1%磷酸溶液作为流动相进行洗脱，效果较好。

3．2 提取方法及时间选择

由于丹酚酸B具热不稳定性[9]，故对提取方法进行考察。取同一批样品，比较了索氏提取、回流提取和超声处理等提取方式，结果显示，采用超声处理方法，试验操作简便，提取效率较高，对丹酚酸B提取较完全，故选取超声提取作为样品的提取方法。还分别考察了超声处理15，30，45，60 min对样品中丹酚酸B含量测定值的影响，结果表明，超声处理30 min结果较理想。故采用80%甲醇超声处理30 min进行提取。

3．3 方法的优势

采用HPLC法测定制剂中丹酚酸B的含量，方法快速、准确、峰形对称，可用于复方党参片的质量控制。

[1]蒋珍藕，陈荣光，孙宁梧．复方党参片的质量标准研究[J]．中药新药与临床药理，2004，15（3）：184－186．

[2]程显隆，马双成，肖新月．复方党参片的质量标准研究[J]．药物分析杂志，2007，27（1）：56－59．

[3]国家药典委员会．中华人民共和国药典（一部）[M]．北京：中国医药科技出版社，2010：70．

[4]赵 华，李新莉．HPLC法测定妇女痛经丸中丹酚酸B的含量[J]．内蒙古中医药，2012，31（22）：40．

[5]黄诗远，陈 凤，姚红霞．RP－HPLC法测定湿毒清胶囊中丹酚酸 B和黄芩苷的含量[J]．中国药师，2008，11（6）：663－664．

[6]刘亚英，梁 敏，杜艳玲．HPLC法同时测定注射用冠心宁中原儿茶醛、阿魏酸、丹酚酸B的含量[J]．中国药师，2011，14（10）：1 469－1 470．

[7]张 乐，张 强，刘 娟．参七消痞颗粒中野黄芩苷和丹酚酸B含量测定方法研究[J]．北京中医药大学学报，2013，36（8）：550－553．

[8]黄胜春，葛朝霞．高效液相色谱法测定康糖胶囊中丹酚酸B含量[J]．中国药业，2010，19（11）：19－20．

[9]陆小华．不同炮制方法对丹参药材中丹酚酸B的影响[J]．中国实验方剂学杂志，2012，18（2）：103－105．

Content Determination of Salvianolic Acid B in Fufang Dangshen Tablets by HPLC

Liu Ruli
（Second Affiliated Hospital of Chongqing Medical University，Chongqing，China 400010）

Objective To determine the contents of salvianolic acid B in Fufang Dangshen tablets．M ethods HPLC method was adopted and Diamonsil C18column（250 mm×4．6 mm，5 μm）was used．The mobile phase was methanol－0．1% phosphoric acid solution（33∶67）．The detection wavelength was at 286 nm．Results The calibration curve of salvianolic acid B was linear in the range of 0．209 6－4．192 0 μg，the averge of recovery was 98．10%，RSD＝0．89%(n＝6)．Conclusion The methods is simple and accurate，it can be used for quality control of Fufang Dangshen Tablets．

salvianolic acid B；Fufang Dangshen tablets；HPLC

R284．1；R286．0

A

1006－4931(2016)08－0067－02

2015－07－28)