清凉巴布剂贴敷对小鼠腹腔毛细血管通透性增高及大鼠足肿胀的改善作用

夏勤，崔莉，杜秋

(1南京市中医院，南京 210001；2江苏省中医药研究院)



清凉巴布剂贴敷对小鼠腹腔毛细血管通透性增高及大鼠足肿胀的改善作用

夏勤1，崔莉2，杜秋1

(1南京市中医院，南京 210001；2江苏省中医药研究院)

摘要：目的观察清凉巴布剂对醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增高及角叉菜致大鼠足肿胀的影响，并探讨其可能机制。方法 60只小鼠随机分为6组各10只，a、b、c组分别贴敷2.727、1.364、0.682 mg/cm2清凉巴布剂，d、f组涂抹等量空白基质，e组涂抹扶他林乳剂0.3 mg/cm2。给药后a、b、c、d、e组制备腹腔毛细血管通透性增高模型，f组不制备，测定腹腔清洗液OD值。60只SD大鼠随机分为6组各10只，A、B、C组分别贴敷2.727、1.364、0.682 mg/cm2清凉巴布剂，D、F组涂抹等量空白基质，E组涂抹扶他林乳剂0.3 mg/cm2。给药后A、B、C、D、E组制备足肿胀模型，F组不制备，计算足肿胀度及胸腺质量指数、脾脏质量指数。结果与d组比较，a、b、c、e组腹腔清洗液OD值降低；与F组比较，D组胸腺质量指数、脾脏质量指数增加，IL-6水平升高，IL-10水平降低；与D组比较，A、B、E组足肿胀度、胸腺质量指数、脾脏质量指数减小，IL-6水平降低，IL-10水平升高；与D组比较，C组足肿胀度、脾脏质量指数减小，IL-10水平升高；P均<0.05。结论 清凉巴布剂能抑制醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增高及角叉菜胶致大鼠足肿胀，可能与足组织IL-6水平降低、IL-10水平升高有关。

关键词：清凉巴布剂；毛细血管通透性；足肿胀；白细胞介素6；白细胞介素10

痔病是一种常见的多发病，虽手术可以帮助治疗，但创口剧痛、愈合缓慢、易被感染等弊端限制了手术的应用[1]。清凉膏由血竭、乳香、没药、青黛、冰片等组成，具有清热消肿、活血定痛作用，对炎性及血栓外痔、术后肛门水肿、肿痛型痔病有显著疗效，但其存在油性大、载药量小、使用不方便等缺点。我院将清凉膏与巴布剂结合，研制出清凉膏巴布剂，其具有保湿性及透气性好、载药量大、易于吸收及清洗等优点[2]。本研究观察了清凉巴布剂对醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增高及角叉菜胶致大鼠足肿胀的影响，并探讨其可能机制。

1材料与方法

1.1实验动物清洁级昆明种小鼠60只，雌雄各半，体质量(20±2)g；SD大鼠60只，雌雄各半，体质量(200±20)g；均由上海斯莱克实验动物中心提供。

1.2药品、试剂及仪器双氯芬酸二乙胺乳胶剂(扶他林，北京诺华制药有限公司)；清凉巴布剂(南京中医药大学药剂教研室提供)；角叉菜胶(上海贝基生物科技有限公司)；二甲苯(国药集团化学试剂公司)；IL-6、IL-8试剂盒(南京建成生物工程研究所提供)。可调高速匀浆器(FSH-2，金坛市恒丰仪器厂)；全自动酶标仪(MK3，上海富众生物科技发展有限公司)。

1.3小鼠腹腔毛细血管通透性增高模型制备及清凉巴布剂贴敷参照文献[3,4]方法。取清洁级小鼠60只，随机分为a、b、c、d、e、f组各10只。实验前小鼠禁食12 h，腹部脱毛后用药。a、b、c组分别贴敷2.727、1.364、0.682 mg/cm2清凉巴布剂(含生药量)，d组与f组小鼠涂抹等量空白基质，e组涂抹扶他林乳剂0.3 mg/cm2，各组均连续给药7 d。最后1次给药1 h后，经尾静注1%伊文思蓝生理盐水溶液0.02 mL/g，然后经腹腔注射0.7%醋酸生理盐水溶液0.2 mL/只(f组除外)，0.5 h后脱颈椎处死小鼠，打开腹腔并用生理盐水清洗。

1.4小鼠腹腔清洗液OD值测定取小鼠腹腔清洗液10 mL，离心后取上清液，于波长590 nm处测定OD值。

1.5大鼠足肿胀模型制备及清凉巴布剂贴敷参照文献[5]方法。取SD大鼠60只，随机分为A、B、C、D、E、F组各10只。实验前大鼠禁食12 h。A、B、C组分别贴敷2.727、1.364、0.682 mg/cm2清凉巴布剂(含生药量)，D、F组大鼠涂抹等量空白基质，E组涂抹扶他林乳剂0.3 mg/cm2。给药1 h后，每鼠右足踝关节以下皮内注射新鲜配制的1%角叉菜胶0.1 mL致炎(F组除外)。

1.6大鼠足肿胀度、胸腺质量指数、脾脏质量指数测算及足组织IL-6、IL-10检测致炎后2 h测量大鼠右后足容积值，并计算足肿胀度，足肿胀度=致炎后足容积-致炎前足容积。后处死大鼠，取足标本，制作足组织匀浆，采用ELISA法检测组织匀浆IL-6、IL-10。另取大鼠胸腺和脾脏称取质量，分别计算胸腺质量指数、脾脏质量指数，胸腺质量指数=胸腺质量/大鼠体质量，脾脏质量指数=脾脏质量/大鼠体质量。

2结果

2.1小鼠腹腔清洗液OD值比较a、b、c、d、e、f组腹腔清洗液OD值分别为0.423±0.028、0.469±0.036、0.501±0.043、0.635±0.031、0.414±0.037、0.392±0.025，a、b、c、e组分别与d组比较，P均<0.05。

2.2大鼠足肿胀度、胸腺质量指数、脾脏质量指数及足组织IL-6、IL-10比较足肿胀度、胸腺质量指数、脾脏质量指数及足组织IL-6、IL-10表达比较见表1。

表1　各组足肿胀度、胸腺质量指数、脾脏质量指数及足组织IL-6、IL-10表达比较±s)

注：与F组比较，*P<0.05，△P<0.01；与D组比较，#P<0.05，▲P<0.01。 3讨论

清凉巴布剂处方来源于国家级名老中医丁泽民教授，由血竭、乳香、没药、青黛、冰片等中药组成。血竭的化学成分包括血竭素、血竭红素、黄色血竭树脂烃、去甲基血竭红素、去甲基血竭素等，具有敛疮生肌、行淤止痛的功效[6,7]。乳香的主要成分为挥发油、树脂及树胶，具有活血定痛、消肿生肌的功效[8]。现代药理研究表明，乳香具有镇痛、抗炎、抗肿瘤、抗胃溃疡、抗氧化等作用[9～11]。没药为没药属植物树皮渗出的胶状树脂，功效类似于乳香，目前已鉴定其有300多个化学成分，主要包括萜类、黄酮、甾体等[12]。文献[13]报道，青黛具有清热解毒、凉血定惊的功效。冰片不仅具有抗病原微生物、抗炎镇痛等药理作用，而且可促进药物经生理性屏障到达作用部位[14~16]。本研究显示，a、b、c组腹腔清洗液OD值较d组减小，A、B、C组足肿胀度较D组减轻，提示清凉巴布剂可抑制醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增高及角叉菜胶致大鼠足肿胀。吴文君等[17]认为，复方儿茶止泻霜可下调胸腺、脾脏指数，证明其具有良好的抗炎活性。本研究显示，A、B组胸腺指数及A、B、C组脾脏指数均较D组降低，提示清凉巴布剂具有抗炎作用。

IL-6是一种多功能炎性细胞因子，炎性细胞因子在炎症反应过程中发挥重要的作用[18,19]。IL-10是一种免疫调节因子，可以抑制单核细胞功能及T淋巴细胞、巨噬细胞的活化和效应作用。IL-10最重要的功能是限制和终止炎症反应[20,21]，其调节炎症反应的机制是与淋巴细胞、抗原递呈细胞作用，从而调节Th1、Th2细胞因子之间的平衡[22]。IL-10能够有效抑制IL-1、IL-6、IL-12、TNF-α等主要的促炎症细胞因子的产生，在调节胃肠道的细胞动态平衡上扮演着重要角色，从而发挥抗炎作用[23,24]。本研究显示，A、B组IL-6水平较D组降低，A、B、C组IL-10水平较D组升高。说明清凉巴布剂可通过调节大鼠足组织中抗炎症细胞因子水平发挥抗炎作用。

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(收稿日期:2015-09-03)

中图分类号：R9

文献标志码：A

文章编号：1002-266X(2016)03-0034-03

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2016.03.012

基金项目：江苏省中医药管理局基金资助项目(LZ11112)。