光学显微镜下非糜烂性反流病食管远端上皮细胞间隙的变化

陈文科+邹兵+郑爱萍+郭海

【摘要】 目的 通过光学显微镜（简称光镜）对非糜烂性反流病（NERD）患者食管鳞状上皮细胞间隙增宽（DIS）进行研究， 探讨食管鳞状上皮细胞间隙的变化情况及意义。方法 NERD患者（25例， NERD组）和正常对照者（20 例， 正常对照组）作为研究对象行胃镜检查， 并在食管远端齿状线上方2 cm处取一块黏膜组织， 常规HE染色， 在光镜下观察上皮细胞间隙情况并采集图像进行测量。结果 NERD组食管鳞状上皮细胞的平均细胞间隙、最小细胞间隙、最大细胞间隙均大于正常对照组， 差异有统计学意义（P<0.01）。结论 光镜测量可作为研究NERD食管鳞状上皮细胞间隙增宽的一种简单、实用方法， 对探讨细胞间隙增宽在NERD发病机制和临床诊断中的意义具有重要作用。

【关键词】 非糜烂性反流病；细胞间隙；光学显微镜

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.07.010

胃食管反流病（gastroesopheal reflux disease， GERD）是消化科门诊最常见的疾病之一， 根据胃镜下表现分为反流性食管炎、非糜烂性反流病（non-erosive reflux disease， NERD）及Barrett食管。NERD是GERD的主要类型， 约占GERD的70%。NERD由于内镜下食管黏膜无破损表现， 临床诊断相对困难。有研究表明， NERD患者虽然在内镜下无黏膜破损等异常病变， 但显微镜下可观察到细胞间隙增宽（dilated intercellular space， DIS） 等微小病变[1]。作者前期采用透视电镜对NERD患者远端食管上皮细胞间隙的变化进行了研究， 证实NERD患者食管鳞状上皮细胞间隙较正常对照者明显增宽[2]。本实验通过光镜对NERD患者食管远端鳞状上皮细胞间隙进行了研究， 从不同角度了解DIS的变化情况及意义， 现报告如下。

1 资料与方法

1. 1 一般资料 选取2013年6月～2014年6月到本院消化内科就诊并诊断为NERD的患者25例（NERD组）， 年龄20～70岁。NERD诊断标准：具有3个月以上反酸、烧心等反流症状， 胃镜检查食管黏膜无破损， 食管24 h pH值监测阳性和（或）质子泵抑制剂（PPI）试验阳性。正常对照组为无反流症状、胃镜检查食管未见异常病变的健康体检者20例。排除标准：上消化道手术史、消化性溃疡、糖尿病、硬皮病、恶性肿瘤、妊娠及哺乳期妇女， 严重心、肺、肝、肾功能障碍者， 入选前2周内服用过抑酸药物者。正常对照组男8例， 女12例， 平均年龄（30.2±10.1）岁；NERD组男12例， 女13例， 平均年龄（35.0±14.0）岁。两组性别、年龄比较差异无统计学意义（P>0.05）， 具有可比性。

1. 2 研究方法 食管远端鳞状上皮细胞间隙测量：研究对象胃镜检查时在食管远端齿状线上方2 cm处活检一块黏膜组织， 黏膜组织取出后迅速置于10% 福尔马林溶液固定， 然后经脱水、透明、浸蜡、包埋制成蜡块， 切片后行HE染色。在光镜下（×1000）观察食管上皮细胞间隙情况并采集图像， 应用图像分析系统对基底上层细胞间隙进行测量。每例样本测量10个细胞， 每个细胞连续测量10个细胞间隙， 计算每例样本的细胞间隙均值。

1. 3 统计学方法 采用SPSS19.0统计学软件进行统计分析。计量资料以均数±标准差（ x-±s）表示， 采用t检验；计数资料采用χ2检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

NERD组食管鳞状上皮细胞的平均细胞间隙、最小细胞间隙、最大细胞间隙均大于正常对照组， 差异具有统计学意义（P<0.01）。附图1， 图2。见表1。

3 讨论

GERD是指胃内容物反流引起的不适症状和（或）并发症的一种疾病， 临床上主要表现为反流、烧心等症状。在欧美的发病率达到10%～20%[3， 4]。我国1996年上海和北京的GERD患病率调查结果为5.77%[5]， 广东社区人群调查每周有烧心症状的患病率为6.2%[6]。NERD是GERD的主要类型， 由于内镜下食管黏膜无破损表现， 临床诊断相对困难。研究表明， NERD患者虽然在胃镜下无明显异常表现， 但显微镜下观察存在食管黏膜上皮细胞间隙的增宽， 但多为定性和半定量研究。近年来， 有学者对食管鳞状上皮细胞间隙的超微结构在透射电镜下进行了定量研究， 发现GERD患者细胞间隙较对照者明显增宽， 经PPI治疗后细胞间隙随着反流症状的改善亦减小或恢复正常， 因此提出DIS可作为NERD诊断的客观结构指标[1， 7-9]。作者既往用透射电镜也发现NERD患者食管下段细胞间隙较正常对照者明显增宽。针对临床上广泛应用的光镜能否对细胞间隙进行定量检测， 国内学者崔荣丽等[10]将HE染色切片在光镜下放大1000倍进行观察， 发现光镜下测量细胞间隙是可行的， 测量结果与电镜测量数据比较具有较好的一致性。本研究结果显示， NERD患者光镜下食管鳞状上皮细胞平均细胞间隙、最小细胞间隙、最大细胞间隙均较正常对照组明显增宽， 与既往电镜研究结果一致。细胞间隙增宽后通透性增加， 胃酸、胃蛋白酶、胆汁等损害因子进入上皮细胞并对其造成进一步损伤， 同时刺激神经末梢， 产生烧心等反流症状。电镜检测细胞间隙精确， 但设备昂贵， 操作复杂， 费用较高， 普通医疗机构不易开展， 难以在广大医疗单位普及。光镜在临床上广为应用， 通过光镜对细胞间隙进行定量测量可在大多数医疗机构开展， 可作为研究NERD患者食管鳞状上皮细胞间隙增宽的一种简单、实用方法， 对探讨细胞间隙增宽在NERD发病机制和临床诊断中的意义具有重要作用。

参考文献

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[10] 崔荣丽， 周丽雅， 林三仁， 等.光学显微镜食管下段细胞间隙的测量对胃食管反流病诊断的意义.中华内科杂志， 2009， 48（3）：208-212.

[收稿日期：2015-11-12]