同种异体皮肤移植家兔沣射重组人IL—10后血清IL—17家族水平的变化观察

魏聪 刘远程 赵容

[摘要]目的：观察同种异体皮肤移植家兔注射重组人IL-10后血清IL-17家族水平的变化，探究重组人IL-10抑制免疫反应的机制。方法：30只健康新西兰白兔依据随机平均原则分为A组[重组人IL-10低剂量组，5μg/（kg·d）]、B组[重组人IL-10高剂量组，10μg/（kg·d）]、C组[环孢菌素低剂量组，Smg/（kg·d）]、D组[环孢菌素低剂量组，lOmg/（kg·d）]、E组[重组人IL-10低剂量，5μg/（kg·d）+环孢菌素低剂量组，Smg/（kg·d）]、F组[生理盐水空白对照组，0.9%氯化钠溶液Iml/d]六组，每组5只，均经肌肉注射于皮肤移植术前ld给药，共给药lOd，各组分别于术前ld，术后ld、4d、1周、2周、3周、4周取兔耳中动脉血，分离制得血清后，依酶联免疫法测定IL-17家族各成员（IL-17A-F）的浓度。结果：家兔同种异体皮肤移植术后IL-17A、IL-27（IL-17B/C/D）、IL-17E（IL-25）、IL-17F的浓度均高于术前，且在术后2周达到高峰，随后逐渐降低；thlL-10能抑制IL-17A、IL-27、IL-17F的分泌，且抑制效应随着rhIL-10剂量的增多而加强；rhIL-10可促进IL-25的分泌，但无明显量效关系。结论：同种异体皮肤移植家兔注射rhIL-10后血清IL-17家族水平明显提高，rhIL-10对免疫反应的抑制作用可能与IL-17家族介导的炎性反应及炎性因子分泌有关。

[关键词] IL-17家族；重组人IL-10；家兔；同种异体；皮肤移植；免疫排斥反应

[中图分类号]Q813.1

[文献标志码]A [文章编号]1008-6455（2016）O1-0037-04

免疫排斥反应是器官和组织移植术失败的重要原因之一。环孢菌素（Cyclosporine A，CsA）等免疫抑制剂在抑制免疫排斥反应的同时，多数产生较大的副作用。据报道，IL10能减弱免疫排斥反应、提升机体的免疫耐受力，且已在肝移植术中证实，它不仅能延长移植物的存活时间，而且其副作用轻微。而IL-17家族已被证实参与器官移植排斥反应等的发病机制。本研究观察30只同种异体皮肤移植家兔注射重组人IL-IO（Recombinant human IL-IO，thIL-IO）后血清IL-17家族水平的变化，探究重组人IL-IO抑制免疫反应的机制，以供移植术相关研究参考。

1 材料和方法

1.1 研究对象

选取30只健康的新西兰白兔（四川医科大学动物实验中心提供），雌性17只，雄性13只，年龄90-120d，重量1.9-2.6kg，依据随机平均原则分为A组（thIL-IO低剂量组）、B组（thIL-IO高剂量组）、C组（CsA低剂量组）、D组（CsA高剂量组）、E组（rhIL-1O低剂量+CsA低剂量组）、F组（生理盐水空白对照组）六组，每组5只，各组用药及剂量依次为thIL-IO （由北京方程佰金科技有限公司提供，国药准字：210910036）5μg/（kg.d）、thIL-1010μg/（kg·d）、CsA（生产厂家：北京艾然生物技术有限公司，国药准字：S56109559）5mg/（kg·d）、CsAlOmg/ （kg.d）、thIL-I0 5μg/（kg·d）+CsA 5mg/（kg·d）、0.9%氯化钠溶液1ml/d，均经肌肉注射于皮肤移植术前ld给药，共给药lOd。

1.2 实验试剂与仪器

兔血清IL-17家族酶联免疫试剂盒（上海抚生实业有限公司），全自动酶联仪洗板机（型号：DNX9620A，南昌普朗医用设备有限公司），全自动酶联仪（型号：SS228BEPIII，北京中西远大科技有限公司），离心机（型号：周182487，北京东西仪科技有限公司）。

1.3 动物模型

同种异体皮肤移植术按照文献进行。

1.4 兔血清IL-17家族各成员浓度的测定

分别于术前ld，术后ld、4d、1周、2周、3周、4周采集兔耳中动脉血4.Oml，离心机（3000r/min，15min）分离血清以备用，按照酶联免疫法测定其血清中IL-17 A-F的浓度。

1.5 统计学分析

采用SPSS20.O对收集的数据进行统计学分析，计数资料用百分率（oh）表示，两组间比较采用卡方检验；计量资料用（均数±标准差）表示，两组间比较采用t检验，多组间比较用方差分析，P

2 结果

2.1 家兔皮肤移植前后血清IL-17A的浓度

如表1，A-E 5组术前IL-17A的浓度均低于术后浓度（P<0.05），在术后2周达到高峰，随后逐渐降低；除F组与C组术后4d的差异无显著性外，F组术后1-2ld IL-17A的浓度高于其余四组，经比较，差异显著（P<0.05）；A组术后1-2ld IL-17A的浓度高于B组， 经比较，差异显著（P<0.05）；与E组相比，A组IL-17A的浓度在术后ld、4d、2周差异显著（P<0.05），C组IL-17A的浓度在术后1-14d差异显著（P<0.05）：在术后ld，C组IL-17A的浓度低于A组，且差异显著（P<0.05），而此时B组与D组相比，差异无显著性（P>0.05），其余时间点而言，A组与C组、B组与D组之间IL-17A浓度的差异均无显著性（P>0.05）。见表1。

2.2 家兔皮肤移植前后血清IL-17B/C/D（IL27）的浓度

如表2，在各组术前IL27的浓度与术后的对比中，除B组术后ld与术前的差异无显著性（P>0.05）外，其余各组术后IL27的浓度均高于术前浓度（P<0.05），在术后2周达到高峰，随后逐渐降低；F组术后1-14d IL27的浓度高于A-E 5组（P0.05）。见表2。

2.3 家兔皮肤移植前后血清IL-17E （IL25）的浓度

如表3，A-E 5组术前IL-17E的浓度均低于术后浓度，相比于术前，A、B、D三组在术后4-14d升高（P<0.05），C组在术后4-28d升高（P<0.05），E组在术后4-2ld升高（P<0.05），F组在术后第ld升高（P<0.05）；在术后的1周和2周，A-E 5组IL-17E的浓度高于F组，经比较，差异显著（P

2.4 家兔皮肤移植前后血清IL-17F的浓度

如表4，6组术前IL-17F的浓度均低于术后浓度，在术后2周达到高峰，随后逐渐降低；相比于术前，B组在术后4-28d IL-17 F的浓度才明显增加（P<0.05），而其余5组在术后1-28d即明显增加（P<0.05）；B组IL-17F的浓度在术后ld-2ld低于F组（P<0.05），其余5组在术后1-14d低于F组（P<0.05）；在术后1-14d，B组IL-17F的浓度低于A组（P<0.05）；与E组相比，A组IL-17F的浓度在术后ld、4d、2周明显提高（P<0.05），而C组在术后ld-14d明显提高（P<0.05）；在术后ld，C组IL-17F的浓度低于A组（P<0.05），D组IL-17F的浓度低于B组（P<0.05），A组与C组、B组与D组在其它时间点对比的差异均无显著性（P>0.05）。见表4。

3 讨论

IL-17A是IL-17家族的成员之一，由155个氨基酸构成，氨基端有约20个氨基酸残基，其基因定位于6p12，与IL-17F定位接近，二者不仅有一半左右的同源性和类似的生物学功能，且均由辅助性T细胞活化后产生。IL-17A和IL-17F在活化单核巨噬细胞和中性粒细胞的同时，使其集中分布于移植物的表面，从而参与免疫排斥反应。IL27大多由活化的单核巨噬细胞、树突状细胞、活化的单核细胞等分泌，通过与IL2、IL-12共同作用于自然杀伤细胞，诱导其分泌INF-γ，而INF-γ通过增强1型辅助性T细同种异体皮肤移植术后血清胞功能，进而参与免疫排斥反应。本研究中，家兔同种异体皮肤移植术后IL-17A、IL27、IL-17F的浓度均高于术前，且在术后2周达到高峰，随后逐渐降低，推测术后早期的免疫排斥反应有IL-17A、IL27、IL-17F等的参与，这与戴小波等的研究结果吻合。进一步分析家兔皮肤移植术后血清IL-17家族浓度发现，A、B两组低于F组，且B组低于A组，这提示thIL-IO能抑制IL-17A、IL27、IL-17F的分泌，且抑制效应随着thIL-IO剂量的增多而加强。目前，多数研究指出，IL-IO对IL-17A、IL-17F分泌的抑制作用是通过抑制IL6和促进IL-IO、IL4的分泌来实现的；另外，IL-IO不仅可抑制单核细胞等抗原提呈细胞分泌前炎性细胞因子，而且对IL27的生成有明显的抑制作用。另外，本研究中，A组、C组IL-17A、IL27、IL-17F的浓度均高于E组（P<0.05），这提示CsA 与thIL-IO在IL-17A、IL27、IL-17F的抑制作用方面具有协同作用。

IL-17E与以上有所不同，一方面，它与IL-17的同源性较小，约为17.5%，是此家族中同源性最小的一员；另一方面，其生物学功能也与其它成员有较大的差别，其抗炎作用主要通过抑制1型辅助性T细胞、17型辅助性T细胞的生长及二者细胞因子的产生过程来实现。本研究中，A、B两组IL-17E浓度的峰值显著高于F组，且其差异显著（P<0.05），提示thIL-IO不仅能促进2型辅助性T细胞生长，而且对IL-17E的分泌过程也有促进作用，但IL-17E在本研究中参加免疫排斥反应的机制无法明确。

综上所述，同种异体皮肤移植家兔注射thIL-IO后血清IL-17家族水平明显提高，thIL-IO对免疫反应的抑制作用可能与IL-17家族介导的炎性反应及炎性因子分泌有关。