加味香连丸的质量控制研究*

张晓雪，武 婕，余河水，张丽娟，李 薇，宋新波，2

（1．天津中医药大学，天津 300193；2．天津中一制药有限公司，天津 300193）

加味香连丸的质量控制研究*

张晓雪1，武 婕1，余河水1，张丽娟1，李 薇1，宋新波1，2

（1．天津中医药大学，天津 300193；2．天津中一制药有限公司，天津 300193）

[目的]对加味香连丸质量控制进行研究。[方法]采用薄层色谱法对加味香连丸中白芍、当归、黄芩进行定性鉴别，建立高效液相色谱法同时测定加味香连丸中芍药苷、柚皮苷、黄芩苷、厚朴酚的含量。[结果]白芍、当归、黄芩的薄层色谱鉴别斑点清晰，阴性对照无干扰；高效液相色谱方法测定加味香连丸中芍药苷、柚皮苷、黄芩苷、厚朴酚分别在0．011 68～0．116 8、0．022～0．22、0．255～0．025 5、0．004 1～0．041 g/L范围内线性关系良好，平均回收率分别为98．75%、99．79%、99．22%、99．36%（n=6）；RSD分别为1．63%、1．3%、1．57%、1．6%。[结论]本法简便易行、准确、重现性良好，为加味香连丸的质量控制提供了理论依据。

加味香连丸；薄层色谱；高效液相色谱法；芍药苷；柚皮苷；黄芩苷；厚朴酚

痢疾是痢疾杆菌引起的肠道传染病。临床主要表现为发热、腹痛、腹泻、里急后重、排黏液脓血样大便。痢疾夏季发病率高，中医学认为多由湿热之邪所致[1-8]。其中加味香连丸就是常用于治疗大肠湿热所致痢疾的中成药之一。具有清热祛湿，化滞止痛的功效，现代应用多用于治疗泄泻、慢性结肠炎[9-10]。收载于2015版《中国药典》[11]。本品由木香、黄芩、白芍、姜厚朴、槟榔、制吴茱萸、炙甘草、姜黄连、黄柏、当归、麸炒枳壳、醋延胡索等12味药物组成。其中白芍、当归、枳壳、黄芩、厚朴均为主要药味，但现行标准仅有木香、厚朴、枳壳和延胡索的薄层色谱定性鉴别项及盐酸小檗碱的含量测定项[12-13]，所以本实验对加味香连丸中的白芍、黄芩、当归进行定性鉴别，并采用高效液相色谱法（HPLC）同时测定加味香连丸中芍药苷、柚皮苷、黄芩苷、厚朴酚的含量。为进一步提高加味香连丸用药安全和质量控制研究提供科学依据。

1 仪器和试药

1.1 仪器 LC-2010AHT型液相色谱仪（日本岛津公司），岛津LC-2010色谱工作站；AB135-S电子分析天平（上海跃进医疗器械有限公司）；HH．S21-6数显式电热恒温水浴锅（上海跃进医疗器械有限公司）；1AB恒温干燥箱（天津市天宇实验仪器有限公司）；SHB－Ⅲ循环水式真空泵（天津科诺仪器设备有限公司）。薄层层析硅胶GF254板、G板（青岛鼎康硅胶有限公司）。

1.2 试药 加味香连丸（批号3082226、3082225、2083019），购自北京同仁堂制药有限公司；阴性样品均为实验室自制。芍药苷（批号AB017P）、阿魏酸（批号AB156F）、藁本内酯（批号AB177W），均购自天津一方科技有限公司；黄芩苷（批号110715-201312）、黄芩素（批号111595-20130905)、汉黄芩素（批号111514-20130403)、柚皮苷（批号110722-2013012)、厚朴酚（批号110729-201309）、当归对照药材（批号120927-201516），均购自中国药品生物制品检定所。芍药对照药材（批号2013-006）、黄芩对照药材（批号2013-010），均购自天津中医药大学。

1.3 试剂 甲醇（色谱级、美国Fisher Scientific公司）；甲苯、三氯甲烷、二氯甲烷、环己烷、乙醚、乙酸乙酯、乙醇、磷酸、盐酸、甲酸（分析级、天津百世化工有限公司）；超纯水。

2 方法与结果

2.1 定性鉴别

2.1.1 白芍的薄层鉴别 取3种批号的加味香连丸研匀，取粉末1 g，加无水乙醇20 mL，振荡10 min，滤过，滤液挥干，残渣加无水乙醇2 mL溶解，作为供试品溶液。取按加味香连丸处方及制备工艺制备缺白芍的阴性样品1 g，同法制成阴性对照品溶液。取白芍对照药材0．5 g，同法制成对照药材溶液。另取芍药苷对照品，加乙醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述6种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（40∶5∶15∶0．2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，于105℃烘至斑点显色清晰。供试品色谱中，在对照品及对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点，在与白芍阴性对照色谱中，无此斑点。色谱图见图1。

图1 白芍薄层色谱

2.1.2 当归的薄层鉴别 取3种批号的加味香连丸研匀，取粉末0．5 g，加甲醇20 mL，超声30 min，滤过，滤液挥干，残渣加少量水溶解，用稀盐酸调pH2～3左右，用30、20、20 mL乙醚分别萃取3次，合并萃取液，挥干，残渣用2 mL甲醇溶解，作为供试品溶液。取按加味香连丸处方及制备工艺制备缺当归的阴性样品1 g，同法制成阴性对照品溶液。取当归对照药材0．5 g，加乙醚超声20 min，滤过，滤液挥干，残渣加1 mL无水乙醇溶解，作为当归对照药材溶液。另取阿魏酸和藁本内酯对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述7种溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G板上，以环乙烷-二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（40∶25∶10∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（254、365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品及对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点，在与当归阴性对照色谱中，无此斑点。色谱图见图2。

图2 当归薄层色谱

2.1.3 黄芩的薄层鉴别 取3种批号的加味香连丸研匀，取粉末1 g，加乙酸乙酯-甲醇（3∶1）的混合溶液30 mL，加热回流30 min，放冷，滤过，蒸干，残渣加甲醇5 mL使溶解，取上清液为供试品溶液。取按加味香连丸处方及制备工艺制备缺黄芩的阴性样品1 g，另取黄芩对照药材1 g，同法制成阴性对照品溶液及黄芩对照药材溶液。另取黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素对照品加甲醇制成每1 mL含1、0．5、0．5 mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述8种溶液各10 μL，分别点于同一硅胶GF254板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（10∶3∶2∶1）为展开剂，饱和30 min，展开，取出，晾干，置紫外灯（254 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品及对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点，在与黄芩阴性对照色谱中，无此斑点。色谱图见图3。

图3 黄芩薄层色谱图

2.2 定量分析

2.2.1 色谱条件 色谱柱：SHIMADZU VP-ODS（250 mm×4．6 mm，5 μm）；以甲醇（A）：0．1%磷酸水（B）为流动相，梯度洗脱（0～15 min，20%～30%A；15～50 min，30%～75%A；50～65 min，75%～100%A）；检测波长为230 nm；流速：1．0 mL/min；柱温：30℃；进样量10 μL，理论塔板数按黄芩苷峰计算应不低于6 000。

2.2.2 混合对照品溶液的制备 取芍药苷、柚皮苷、黄芩苷、厚朴酚对照品适量，精密称定，加入甲醇制成每1 mL含0．116 8 mg芍药苷、0．22 mg柚皮苷、0．255 mg黄芩苷、0．041 mg厚朴酚的混合对照品溶液。

2.2.3 供试品溶液的制备 取加味香连丸，研成细末，精密称定0．5 g，置25 mL容量瓶中，加入适量甲醇，浸渍2 h，在45℃下，超声提取（功率250 W，频率40 kHz)30 min，放至室温，再用甲醇定容至刻度线，过滤，滤液用微孔滤膜（0．45 μm）滤过，取续滤液作为供试品溶液。按照加味香连丸处方量和制备工艺制备缺白芍、枳壳、黄芩、厚朴的阴性样品，按照供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。

2.2.4 专属性实验 精密吸取混合对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液进样，结果阴性样品无干扰，证明此色谱条件可行。见图4。

图4 加味香连丸供试品、阴性样品吸混合对照品的色谱图

2.2.5 方法学考察

2.2.5.1 标准曲线的制备 精密吸取1、2、4、6、8、10 mL“2．2．2”项下的混合对照品贮备液，分别置于不同的10 mL容量瓶中，加入甲醇定容，在“2．2．1”项下色谱条件进样分析，以对照品质量浓度为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），计算线性回归方程，得到芍药苷、柚皮苷、黄芩苷、厚朴酚的回归方程分别，线性范围为0．01168～0．116 8 g/L，线性范围为0．022～0．22 g/L；0．999 8），线性范围为0．025 5～0．255 g/L；厚朴酚30000000X+677．54（r2=0．9997），线性范围为0．004 1～0．041 g/L。

2.2.5.2 精密度实验 精密吸取混合对照品溶液，即“2．2．2”制备的对照品溶液，按“2．2．1”项下方法测定峰面积，连续进样6次。测得芍药苷、柚皮苷、黄芩苷、厚朴酚峰面积值得RSD为0．34%、0,86%、0．54%、0．27%，精密度符合要求。

2.2.5.3 稳定性实验 取同一供试品溶液分别在0、2、4、6、8、12、24 h进样1次，依法进行含量测定，测定芍药苷、柚皮苷、黄芩苷、厚朴酚峰面积RSD分别为0．43%、0．72%、1．24%、0．48%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.2.5.4 重复性实验 取同一批号（3082226）样品6份，按“2．2．3”项下制备方法制备供试品溶液，按“2．2．1”项下方法测定分析，结果6份样品中芍药苷的平均含量1．98 mg/g，RSD=0．85%，柚皮苷的平均含量4．42 mg/g，RSD=1．24%，黄芩苷的平均含量3．02 mg/g，RSD=0．69%，厚朴酚的平均含量0．28 mg/g，RSD=0．74%，结果表明重复性符合要求。

2.2.5.5 加样回收率实验 取同一批号（3082226）的样品6份，各0．5 g，精密称定，置25 mL容量瓶中，分别精密加入芍药苷0．001 05 g、柚皮苷0．002 45 g、黄芩苷0．001 40 g、厚朴酚0．000 13 g，按“2．2．3”项下的方法制备供试品溶液，依法测定样品中的芍药苷、柚皮苷、黄芩苷、厚朴苷的含量，计算回收率。结果芍药苷、柚皮苷、黄芩苷、厚朴苷平均回收率为98．75%、99．79%、99．22%、99．36%；RSD分别为1．63%、1．30%、1．57%、1．60%。结果见表1。

2.2.5.6 样品测定 取3批样品（批号3082226、3082225、2083019），按“2．2．3”项下方法制备供试品溶液，分别测定芍药苷、柚皮苷、黄芩苷、厚朴酚的峰面积，结果芍药苷的含量分别为2．0400、2．0394、2．035 3 mg/g，柚皮苷的含量分别为4．909 1、5．010 9、4．904 8 mg/g，黄芩苷的含量分别为3．018 2、3．034 2、3.012 6 mg/g，厚朴酚含量分别为0.279 6、0.283 0、0.276 7 mg/g。

表1 回收率测定结果

3 结论与讨论

3.1 薄层色谱的选择 因为加味香连丸处方中白芍、当归、黄芩均为主要药味，但查阅《中国药典》及参考文献均未对处方中白芍、当归、黄芩进行薄层色谱鉴别。所以本实验选择三者进行定性鉴别，对加味香连丸中定性鉴别进行补充。在展开剂的选择上，分别参考了《中国药典》中单味药材的薄层鉴别方法，但发现芍药苷、阿魏酸、黄芩苷等的比移（Rf）值太小，所以适当的调整了展开剂的极性比例，发现分离成分的Rf值和分离度较好。

3.2 色谱条件的选择 参考文献[14-16]芍药苷、柚皮苷、黄芩苷及厚朴酚最佳吸收波长分别为230、274、284、294 nm，通过比较4个波长下4种成分的含量变化，最终选择230 nm为最佳检测波长，此时4种成分含量均较高，且与杂峰分离较好。

在流动相的选择上，考察了甲醇-0.1%冰醋酸水溶液、甲醇-0.1%磷酸水溶液、乙腈-0.2%磷酸水溶液[17-20]，结果表明甲醇-0.1%磷酸水溶液的峰形较好，又考察了此条件下流动相的洗脱程序，发现梯度程序比等度程序能更好将四种成分与杂质峰分离，峰形较好，且阴性样品无干扰。

[1]杨梅英.小儿细菌性痢疾的中西医并治[J].中华临床医学杂志，2005,6(11):65-66.

[2]迟 丹.芍药汤加减治疗细菌性痢疾临床分析[J].中国中医药现代远程教育，2009,7(5):23.

[3]黎佩珍.阿莫西林与头孢派酮治疗细菌性痢疾疗效的临床对照研究[J].齐齐哈尔医学院学报，2015,36(32):4887-4888.

[4]张巧云，拓占斌.左氧氟沙星联合复方黄连素片治疗急性细菌性痢疾的临床疗效[J].临床合理用药，2015,8(10): 48-49.

[5]田敬步.利福平注射液治疗顽固性细菌性痢疾62例疗效观察[J].药物与临床2006,3(14):238-239.

[6]范 燕.磷霉素治疗细菌性痢疾的疗效及不良反应的文献分析[J].中国药物警戒，2013,10(11):673-675.

[7]陈光武.急性细菌性痢疾菌药敏分布与临床治疗调查探讨[J].中国实用医药，2015,10(36):187.

[8]段淑红，范晓冬，刘梅生.依替米星治疗急性细菌性痢疾临床观察与分析[J].中华医院感染学杂志，2011,21(13): 2801-2803.

[9]金奎坤.加味香黄连治疗慢性结肠炎30例体会[J].安徽中医临床杂志，2009,11(5):316.

[10]黄云春.加味香连丸治疗泄泻25例[J].湖北中医杂志，2003,25(9):43.

[11]国家药典委员会.中国药典（一部）[S].北京：中国医药出版社，2015:905.

[12]何 洋，孙 悦，黄娟萍.HPLC法同时测定加味香连丸中木香烃内酯和去氢木香内酯的含量[J].药物分析杂志，2011,31(2):223-224.

[13]陶胜源，刘玉波，车 慧.高效液相色谱法测定加味香连丸中盐酸小檗碱的含量[J].解放军药学学报，2009,25(3): 257-259.

[14]徐 力.HPLC测定加味香连丸中芍药苷的含量[J].中国中医指南，2011,9(3):13-14.

[15]范丽丽，李 楠，顾 星.UPLC法测定痤疮凝胶中黄芩苷和蒙花苷的含量 [J].天津中医药大学学报，2015,34 (1):42-44.

[16]梁远园，冯 彪，倪 晨.HPLC法测定枳实药材中橙皮苷和柚皮苷的含量[J].中药新药与临床药理，2006,17(5): 359-361.

[17]师永清，康淑荷，王爱军.HPLC同时测定黄连双清丸中栀子苷、芍药苷、黄芩苷、盐酸小檗碱和大黄素的含量[J].药物分析杂志，2013,33(9):1613-1616.

[18]李 想，卢静华．HPLC法同时测定加味香黄连中芍药苷、柚皮苷、陈皮苷和黄芩苷[J]．中成药，2015,37(9): 1955-1958．

[19]何 洋，黄娟萍，孙 悦，等．HPLC同时测定加味香连丸中和厚朴酚与厚朴酚和[J]．华西药学杂志，2011．26(6): 585-587．

[20]苏 超，刘君仪，张 盛．RP-HPLC法测定妇科分清丸中栀子苷和芍药苷的含量[J]．光明中医，2015．30(5):956-957．

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The research of quality contral of Jiawei Xianglian pill

ZHANG Xiao-xue1,WU Jie1,YU He-shui1,ZHANG Li-juan1,LI Wei1,SONG Xin-bo1,2
（1.Tianjin university of Traditional Chinese Medicine,Tianjin 300193,China;2.Tianjin Zhongyi pharmaceutical Co.Ltd,Tianjin 300193,China）

[Objective]To research the quality control of Jiawei Xianglian pill．[Methods]Paeoniae Radix Alba,Angelicae Sinesis Radix and Scutellaria Radix of Jiawei Xianglian pill was identified by TLC．HPLC was applied to determine the content of paeoniflorin,naringin,baicalin and magnolol．[Results]TLC identification methods had good specificities without interference from negative control．The calibration curves of paeoniflorin, naringin,baicalin and magnolol were linear in the ranges of 0．011 68～0．116 8,0．022～0．22,0．255～0．025 5 and 0．004 1～0．041 mg/mL．The average recoveries wear 98．75%(RSD=1．63%),99．79%(RSD=1．3%),99．22%(RSD= 1．57%),99．36%（RSD=1．6%）．[Conclusion]This method was simple,pricise and repeatablewhich can be used for quality control of Jiawei Xianglian pill．

Jiawei Xianglian pill;TLC;HPLC;Paeoniflorin;Naringin;Baicalin;Magnolo

R284

A

1673－9043（2016）06－0413-05

2016-07-11）

10．11656/j．issn．1673-9043．2016．06．13

天津市科技计划项目（14TXZYJH00440）。

张晓雪（1988-），女，硕士研究生，主要研究方向为中药质量标准研究。

宋新波，E-mail：songxinbo@tjutcm．edu．cn。