平菇和榆黄蘑及其培养料中吡虫啉的残留分析方法*

常津毓，常 义，侯志广，逯忠斌，王 岩，张 浩**

（1．吉林农业大学资源与环境学院，吉林 长春 130118；2．吉林省墒情监测中心，吉林 长春 130033）

〈病虫害防治〉

平菇和榆黄蘑及其培养料中吡虫啉的残留分析方法*

常津毓1，常 义2，侯志广1，逯忠斌1，王 岩1，张 浩1**

（1．吉林农业大学资源与环境学院，吉林 长春 130118；2．吉林省墒情监测中心，吉林 长春 130033）

建立了一种采用子实体喷药、培养料拌药，在不同时期采集样品、提取和净化的方法，以分析吡虫啉在榆黄蘑、平菇及其培养料中的残留量。结果表明，在榆黄蘑和平菇及其培养料中的吡虫啉，其降解过程均符合一级动力学方程，在平菇、榆黄蘑和其培养料中，吡虫啉半衰期分别为3．8 d、3．1 d和14．0 d。在收获时期，平菇、榆黄蘑及其培养料中的吡虫啉残留量近似于美国规定的吡虫啉在野生蘑菇农药残留限量（maximum residue limit，MRL）0．02 mg·kg-1。表明试验建立的方法准确可靠，为在平菇和榆黄蘑上制定MRL值提供了科学依据。

吡虫啉；食用菌；残留；消解动态

吡虫啉是硝基亚甲基类杀虫剂，化学式为C9H10ClN5O2，由德国拜耳公司于20世纪80年代中期研发，于1991年投放市场，目前已在60种农作物上使用。在20世纪90年代初期，中国开始研发吡虫啉，于1992年生产登记[1]。吡虫啉具有广谱、低毒、高效，不易产生抗性，对动植物安全等特点，并兼具胃毒、触杀和内吸等多重交互作用。主要防治对象是同翅目、半翅目昆虫，如飞虱、粉虱、蚜虫、叶蝉、蓟马等；对双翅目、鞘翅目和鳞翅目的某些害虫，如稻负泥虫、稻象甲、潜叶蛾等也有防治效果[2-3]。吡虫啉作为高效杀虫剂，能有效防治菌类生长过程中出现的虫害[4]。食用菌子实体中含有丰富蛋白质，其含量约为鲜重3%～4%，是一种绿色健康食品，受到广泛关注[5-6]。目前吡虫啉作为一种高效、广谱的农药已经在茶叶、粮食、水果等作物中广泛应用，科研人员对其的残留动态规律进行了大量研究[7-8]，但在食用菌方面未见报道。本文建立一种高效、实用的平菇和榆黄蘑中吡虫啉残留的分析方法，为食用菌安全施药提供参考。

1 材料与方法

1.1 试剂与仪器

10%吡虫啉可湿性粉剂，江苏龙灯化学有限公司。弗罗里硅土、氯化钠、无水硫酸钠、乙腈、丙酮、正己烷均为分析纯；吡虫啉农药标准样品纯度均为99%；Agilent 1100A液相色谱仪。

1.2 试验方法

1．2．1 田间试验设计

（1）培养料试验设计

试验在吉林农业大学菌菜栽培基地进行。处理1：10%吡虫啉可湿性粉剂按1%拌入培养料中（即把吡虫啉30%可湿性粉剂10 g放在1 000 g培养料混合均匀）；处理2：空白对照。

施药后0、1 d、3 d、5 d、7 d、9 d、14 d、21 d、28 d、35d、42 d、60 d分别在试验组和空白对照组采集培养料各1．0 kg，密封冷冻待测。

（2）子实体试验设计

共设5个处理3次重复。处理1：10%吡虫啉可湿性粉剂2 g·m-2兑水1 000 mL，喷施于平菇子实体上；处理2：10%吡虫啉可湿性粉剂2 g·m-2兑水1 000 mL，喷施于榆黄蘑子实体上；处理3：空白对照。

在平菇和榆黄蘑子实体生长到直径约2 cm时施药1次，于施药后0、1 d、3 d、5 d、7 d、10 d分别在试验组和空白组收集样品各500 g，密封冷冻待测。

（3）培养料和子实体最终残留试验

每次收获时都采集子实体样品，样品密封后存放于冰箱中待测；培养料样品则在最终收获时采集，保存待测定。

1．2．2 分析测定条件

Agilent 1100液相色谱仪紫外检测器C18反相色谱柱，波长230 nm，水∶乙腈=30∶70（v∶v），柱温30℃，流速0．8 mL·min-1；进样量为10 μL。

1．2．3 样品处理

（1）子实体提取与净化

准确称取平菇、榆黄蘑样品各5．0 g，将其加入装有30 mL乙腈和10 mL蒸馏水的组织捣碎机中，匀浆5 min。减压抽滤，滤液放入100 mL装有15．0 g氯化钠的具塞量筒，用手摇晃1 min，静置1 h使其分层。

取250 mL圆底烧瓶，将20 mL上层液移入其中，并置于旋转蒸发仪上，待提取液浓缩至近干。将3．0 g无水硫酸钠、3．0 g弗罗里硅土、5．0 g无水硫酸钠装入玻璃层析柱。先用10 mL正己烷预活化层析柱，用丙酮/正己烷（20∶80，v∶v）的混合液溶解浓缩液，过层析柱，然后用20 mL丙酮/正己烷（20∶80，v∶v）的混合液淋洗层析柱，最后用50 mL丙酮/正己烷（20∶80，v∶v）混合液洗脱层析柱，最终收集70 mL洗脱液。取圆底烧瓶，将收集到的全部（70 mL）洗脱液转移到瓶中，并使用旋转蒸发仪将其旋干，用乙腈定容至1．0 mL，待液相色谱测定。

（2）培养料提取与净化

取三角瓶，加入30 mL乙腈和5 mL蒸馏水，称取食用菌培养料5．0 g置于三角瓶中，将三角瓶置于30℃水浴振荡器上振荡1 h（200 r·min-1）。静置10 min后，减压抽滤，滤液100 mL放入装有15．0 g氯化钠具塞量筒，用手摇晃1 min，静置1 h使其分层。浓缩与净化同上。

（3）添加回收率试验

以榆黄蘑和平菇2种食用菌及其培养料为对象，分别在0．1 mg·kg-1、0．5 mg·kg-1、2．5 mg·kg-1三个浓度水平下做添加回收试验，5次重复。

2 结果与分析

2.1 标准曲线绘制

采用外标法定量，各组分的峰面积（y）和质量浓度（x，mg·kg-1）建立线性关系方程。吡虫啉的标准方程为y=35．118x＋4．0736，r=0．9951。

2.2 添加回收率试验结果

2．2．1 回收率试验结果

添加回收率试验结果见表1。试验结果表明，添加回收率均在80%～120%，满足农药残留分析的要求。

2．2．2 最小检出量与最低检测浓度

吡虫啉在所设定仪器的条件下，最小检出量为0．5 ng。在平菇、榆黄蘑及其培养料中的最低检测浓度分别为0．02 mg·kg-1、0．0212 mg·kg-1、0．0204 mg·kg-1。

2.3 消解动态结果

吡虫啉在培养料中的消解动态曲线见图1。

从图1看出，吡虫啉在培养料中消解曲线方程为C=13．789e-0．0652t，相关系数R2=0．9347，半衰期14．0 d。吡虫啉在2种食用菌中消解动态曲线见图2。

从图2可知，吡虫啉在平菇子实体中的消解曲线方程为C=1．527e-0．197t，相关系数R2=0．9643，半衰期3．8 d（培养料不拌药）；在榆黄蘑子实体中的消解曲线方程为C=1．2827e-0．2308t，相关系数R2=0．993，半衰期3．1 d（培养料不拌药）。

表1 吡虫啉添加回收率试验结果Tab．1 Results on spiked recoveries of imidacloprid

图1 吡虫啉在培养料中的消解动态曲线Fig．1 Digestion dynamic of imidacloprid in substrates

图2 吡虫啉在2种食用菌中的消解动态曲线Fig．2 Digestion dynamic of imidacloprid in two edible fungi

2.4 最终残留结果

在收获期平菇和榆黄蘑的子实体中吡虫啉残留量全都小于0．02 mg·kg-1；其培养料中残留量约等于0．02 mg·kg-1。

3 结论与讨论

本文以平菇、榆黄蘑、及其培养料为研究对象，建立了一种简便、高效的检测吡虫啉残留分析的方法。平均添加回收率分别为80．5%～100．3%，符合农药残留分析标准。最小检出量为0．5 ng，最低检出浓度为0．02 mg·kg-1。吡虫啉在榆黄蘑上原始沉积量为1．2546 mg·kg-1，在平菇上的原始沉积量为1．4564 mg·kg-1，培养料中原始沉积量为11．0643 mg·kg-1。吡虫啉在榆黄蘑、平菇及其培养料中半衰期分别为2．6 d、2．7 d和14．0 d。

本文建立的残留分析方法回收率良好，满足农药残留分析的要求。伴随着吡虫啉应用日益广泛，我国规定了其在其它作物上的MRL值，但没有规定在食用菌上最高残留限量值[9]，本试验的目的是为规定我国食用菌吡虫啉的MRL值提供参考。吡虫啉在菌类子实体及培养料中的降解过程均符合一级动力学方程，属于易降解农药。美国规定吡虫啉在野生蘑菇的农药最高残留限量（MRL值）为0．2 mg·kg-1[10]。建议我国规定吡虫啉在食用菌中的MRL值为0．2 mg·kg-1。

[1]王振荣，李布青．农药商品大全[M]．北京：中国商业出版社，1996：306-307．

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[5]胡清秀，宋金俤，谢艳丽．食用菌农药残留控制研究[J]．中国食用菌，2009，28（1）：55-57，64．

[6]王孝辉，宛晓春，侯如燕．茶叶中吡虫啉农药残留的液相色谱检测方法[J]．茶叶科学，2012（3）：203-209．

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Residual Dynamic of Imidacloprid in Pleurotus ostreatus, Pleurotus citrinopileatus and Its Substrates

CHANG Jin-yu1,CHANG Yi2,HOU Zhi-guang1,LU Zhong-bin1,WANG Yan1,ZHANG Hao1
(1．College of Resource and Environment,Jilin Agricultural University,Changchun 130118,China; 2．Jilin Moisture Content Monitoring Center,Changchun 130033,China)

This paper has made a method which spraying imidacloprid on fruiting bodies,and mixing substrates with the pesticide to analyze the residues of imidacloprid in Pleurotus ostreatus and Pleurotus citrinopileatus．The results showed that imidacloprid of the degradation process in P.ostreatus,P.citrinopileatus and their substrates were in line with a kinetic equation, half-period of imidacloprid in two kind of edible fungi and substrates were 3．1 d-3．8 d,and 14．0 d respectively．The imidacloprid residues at harvest period of P.ostreatus,P.citrinopileatus and substrates were likely equal to the MRL which the US ruled in fungi is 0．02 mg·kg-1．The method was accurate and reliable,providing a scientific basis for our country in the MRL established on edible fungi．

imidacloprid;edible fungi;residues dissipation;dynamics

S646.9

A

1003-8310（2016）01-0062-03

10．13629/j．cnki．53-1054．2016．01．017

吉林省世行贷款农产品质量安全项目（2011-Z28）。

常津毓（1988-），男，在读硕士研究生，主要从事农药残留技术研究。E-mail:351649711＠qq．com

**通信作者：张浩（1964-），女，博士，教授，主要从事农药环境毒理及生物测定研究。E-mail:haozhang100＠163．com

2015-11-15