一例鸡新城疫病毒感染的诊断

庞国峰 山东省博兴县畜牧兽医局 266500

一例鸡新城疫病毒感染的诊断

庞国峰 山东省博兴县畜牧兽医局 266500

2015年10月，某规模养殖场发生了一起肉鸡的传染性、快速死亡病例，发病鸡表现出呼吸困难、下痢、病死率和死亡率较高、浆膜和黏膜出血等临床特征，从临床诊断疑似为新城疫病毒感染，无菌取病料送实验室进行PCR检测和病毒分离鉴定等进行确诊，结合临床诊断和实验室诊断结果，最终确诊该养殖场发生了新城疫病毒的感染。

新城疫病毒；感染；临床诊断；实验室诊断

鸡新城疫毒病是由鸡新城疫病毒引起的一种高度接触性、急性、烈性传染病［1］。该病感染的宿主范围比较广，鸡、鸭、鹅、火鸡、鹌鹑和鸽子等均易感［2］。病鸡和带毒鸡是NDV的主要传染源，可经呼吸道和消化道传播，一年四季都可发生，但以春秋季发病较多。该病传播速度快、发病率和死亡率高，是目前危害我国养禽业最为严重的烈性传染病之一和我国长期以来一直坚持免疫的主要传染病之一［4］。2015年10月，某规模肉鸡养殖场发生了一起以呼吸困难、下痢、病死率和死亡率较高以及浆膜和黏膜出血为主要特征的传染病，经临床诊断、实验室PCR检测和病毒分离鉴定，最终确诊为由新城疫病毒感染所致。现将整个诊断过程介绍如下。

1　材料和方法

（1）主要试剂。一步法RT-PCR扩增试剂盒、DL2000 DNA Marker均购自宝生物（大连）工程有限公司，抗新城疫病毒阳性血清购自中国兽医药品监察所。

（2）实验室PCR检测。将无菌采取病死鸡的肝脏、脾脏和淋巴结等组织病料加灭菌生理盐水研磨，反复冻融3次，12000r/分钟离心5分钟，取上清液参照参考文献［5］中的方法提取基因组RNA，并按照其RTPCR扩增条件分别进行新城疫强毒和弱毒的RTPCR检测。

（3）SPF鸡胚病毒分离。将上述处理的病毒上清液加入青霉素和链霉素，4℃作用6小时以上，之后将处理的样品接种10日龄SPF鸡胚，0.1mL/胚，置37℃孵化器内培养120小时，24小时内死亡的鸡胚弃去，24～120小时死亡的鸡胚4℃保存。

（4）鸡胚病变观察。120小时后收获所有鸡胚尿囊液，观察接种鸡胚的胚体病变情况。

（5）血凝试验。取收获的鸡胚尿囊液做血凝试验（HA）。

（6）病毒中和试验。取收获的鸡胚尿囊液与等量抗鸡新城疫病毒特异性血清混合，室温中和1小时后，接种SPF鸡胚10只，观察120小时，观察鸡胚的胚体病变情况，收获鸡胚尿囊液做血凝试验。

2　结果与分析

（1）临床症状及剖检变化。发病鸡精神萎靡，眼半闭半睁，食欲下降，咳嗽，呼吸困难，有粘性鼻液，张口呼吸，病程短，2～5天死亡。剖检可见全身黏膜出血，淋巴结肿大、出血，腺胃黏膜出血、坏死，盲肠扁桃体肿大、出血。

（3）RT-PCR检测结果。组织病料经新城疫强毒扩增引物可扩增出349bp的特异性条带，与明文龙等［5］的报道完全一致。而组织病料经新城疫弱毒扩增引物未扩增出任何特异性条带。表明组织病料中含有新城疫强毒，而没有新城疫弱毒。

（4）胚体病变观察结果。接种后72～120小时，接种的鸡胚陆续出现死亡，剖检观察死亡鸡胚可见胚体全身出血，头部、足趾和翅膀出血严重。

（5）血凝试验（HA）结果。收获的尿囊液对1％鸡红细胞的血凝效价为1∶1024。

（6）病毒中和试验结果。鸡胚尿囊液与抗鸡新城疫病毒阳性血清中和后接种的鸡胚至接种后120小时，10枚鸡胚全部健活，剖检鸡胚未见病变。收获其尿囊液做血凝试验，对1％鸡红细胞无凝集性，表明分离毒株可被抗鸡新城疫病毒阳性血清特异性中和。

（7）综合诊断结果。结合临床症状、剖检病理变化等临床诊断结果以及RT-PCR检测、病毒分离、胚体病变观察、分离毒株血凝试验、分离毒株中和试验等实验室诊断结果，确诊为此次疫病由新城疫病毒感染所致。

3　讨论

新城疫病毒不仅对养禽业危害严重，也是严重危害养鸡业健康发展的重要疾病之一，能够造成很大的经济损失。新城疫病毒的宿主范围广泛，由于野生飞禽的存在，病毒很难净化，预防该病主要通过疫苗免疫接种和加强饲养场的饲养管理和环境卫生，经常消毒。新城疫病毒一旦在养殖场存在就很难根除，在鸡群中长期存在，当鸡群免疫力下降时会引发疾病。疫苗免疫鸡群也可以发生新城疫，常由于疫苗接种时受母源抗体的影响，接种疫苗后不能获得免疫力，当鸡群中存在新城疫强毒时导致鸡群发病。

［1］杨丽丽，邹冬辉.新城疫病毒检测方法的研究进展［J］.吉林农业，2015，（19）：90-91.