香鳞毛蕨中间苯三酚类化合物的研究

杜文钊，宋国强，刘海燕，冯淡开，沈志滨

(1.广东药学院 中药学院，广东 广州 510006； 2.广东恒健制药有限公司，广东 江门 529040)



香鳞毛蕨中间苯三酚类化合物的研究

杜文钊1，宋国强1，刘海燕1，冯淡开2，沈志滨1

(1.广东药学院 中药学院，广东 广州 510006； 2.广东恒健制药有限公司，广东 江门 529040)

摘要:目的 对香鳞毛蕨中的间苯三酚类成分进行研究。方法 采用硅胶、Sephadex LH-20凝胶、半制备液相等色谱手段对香鳞毛蕨的间苯三酚类化合物进行纯化分离，并根据理化性质和波谱数据鉴定化合物的结构。结果 分离得到了6个化合物，分别鉴定为白绵马素BB(1)、白绵马素PP(2)、黄绵马酸AB(3)、Compound V(4)、绵马素PB(5)、绵马素BB(6)。结论 化合物1～4为首次在该植物中分离得到。

关键词:香鳞毛蕨； 间苯三酚类衍生物； 化学成分； 结构鉴定

香鳞毛蕨Dryopterisfragrans(L.) Schott是鳞毛蕨科鳞毛蕨属植物，主要分布在中国东北地区和北部地区等地海拔1 km以上的山坡和岩石缝中。根据民间记载，香鳞毛蕨对皮肤病具有良好的疗效。已有不少学者对其抑菌活性部位以及活性成分进行研究，指出香鳞毛蕨主要含有间苯三酚类、黄酮类以及萜类等生物活性物质，而其提取物对皮肤癣菌、银屑病等药理模型具有显著作用[1-2]。此外，有报道指出，间苯三酚类衍生物的含量越高，香鳞毛蕨提取物的抑菌活性越好[3-4]。本文对香鳞毛蕨间苯三酚类化合物进行分离研究，从中分离并鉴定出6个化合物，分别为白绵马素BB(1)、白绵马素PP(2)、黄绵马酸AB(3)、Compound V(4)、绵马素PB(5)、绵马素BB(6)，其中化合物1～4为首次从该植物中分离得到。

1仪器与材料

美国Waters ACQUITY UPLC H-Class 超高效液相色谱仪(含QSM四元溶剂管理器、SM-FTN样品管理器、PDA二极管阵列检测器及 Empower 3工作站)； LC-6AD型半制备液相色谱仪(SPD-20A检测器，日本岛津公司)；LCQTM DECA离子阱质谱仪(美国Thermo-Finnigan)；Varian UNITY INOVA 500型超导脉冲傅里叶变换核磁共振仪(美国Varian公司)；Zf20D暗箱式紫外分析仪(上海顾村电光仪器厂)；YOKO-XR显色加热器(武汉药科新技术开发公司)；X-5显微熔点测定仪(巩义市科瑞仪器有限公司)。

柱层析硅胶(青岛海洋化工有限公司)；Sephadex LH-20型凝胶(Pharmacia公司)；羧甲基纤维素钠(广东汕头市西陇化工厂)；固兰BB盐(上海化学试剂厂)；乙醇、正己烷、丙酮、甲酸、乙酸乙酯等均为分析纯。

香鳞毛蕨采自黑龙江省五大连池，经哈尔滨商业大学药学院张德连副教授鉴定为鳞毛蕨属植物香鳞毛蕨Dryopterisfragrans(L.) Schott.。

2提取与分离

将香鳞毛蕨全草干燥粗粉10 kg，用10倍体积分数50%乙醇回流提取3次，时间分别为2、1.5、1.5 h，减压浓缩至无醇味，用质量分数10%稀HCl酸沉，离心得浸膏1.2 kg。将样品以乙酸乙酯/甲醇混合溶剂溶解，用硅胶拌样，进行硅胶色谱柱的初步分离。依次采用不同比例的石油醚-丙酮溶剂洗脱(体积比100∶1→70∶1→50∶1→30∶1→10∶1→1∶1)，并用薄层色谱跟踪分析，合并相同流分，得A(30 g)、B(320 g)、C(110 g)、D(270 g)、E(160 g)、F(100 g)6个组分。A组分以石油醚-丙酮洗脱(体积比200∶1～50∶1)，合并相同流分，得A1、A2、A3、A44个组分。A1组分静置后挥走部分溶剂，有沉淀析出，用甲醇清洗沉淀，得淡黄色粉末，以制备液相(体积分数100%甲醇)进行分离得到化合物5(80 mg)和化合物6(92 mg)。A3组分先采用凝胶柱色谱进行分离，流份用薄层分析后合并。再以制备液相(体积分数95%甲醇)分离，得到化合物1(40 mg)。A4组分反复硅胶柱层析得到化合物2(60 mg)。D组分以石油醚-丙酮洗脱(体积比60∶1～30∶1)，合并相同流分，得D1、D22个组分。D1组分经Sephadex LH-20凝胶分离后，再以制备液相(体积分数90%甲醇)分离，得到化合物3(16 mg)。E组分以石油醚-丙酮(体积比60∶1～10∶1)进行硅胶柱层析，合并相同流分后得到E1、E2、E33个组分，E1组分经制备色谱分离(体积分数80%甲醇)得到化合物4(46 mg)。

3结构鉴定

化合物1：白色粉末(丙酮)，mp:134～136 ℃。UVλmax(甲醇):265 nm，硅胶薄层分析(GF254)，喷以质量分数0.3%固蓝BB盐溶液105 ℃显色为红色斑点。LC-HRESI-MS：m/z459.202 6 [M-H]-(理论值：459.204 4)，分子式为C25H32O8。1H-NMR(CCl3D，500 MHz)δ：3.31(2H,s,H-1″)，3.17(2H,t,J=7.5 Hz,H-8)，1.73(2H,m,H-9)，1.01(3H,t,J=7.5 Hz,H-10)，1.47(3H,brs,H-11)，1.54(3H,brs,H-12)，3.17(2H,t,J=7.5 Hz,H-8′)，1.73(2H,m,H-9′)，1.01(3H,t,J=7.5 Hz,H-10′)，1.47(3H,brs,H-11′)，1.54(3H,brs,H-12′)，12.3(1H,s,4-OH)，12.3(1H,s,4-OH′)。13C-NMR (CCl3D，126 MHz)δ： 18.2(C-1″)，110.9(C-1)，187.7(C-2)，108.2(C-3)，199.4(C-4)，44.6(C-5)，173.5(C-6)，206.4(C-7)，43.1(C-8)，18.3(C-9)，14.1(C-10)，24.3(C-11)，25.5(C-12)，110.9(C-1′)，187.7(C-2′)，108.2(C-3′)，199.4(C-4′)，44.6(C-5′)，173.5(C-6′)，206.4(C-7′)，43.1(C-8′)，18.3(C-9′)，14.1(C-10′)，24.3(C-11′)，25.5(C-12′)。以上波谱数据与文献[5]基本一致，故鉴定化合物1为白绵马素BB(Albaspidin BB)。

化合物2：白色粉末(丙酮)，mp:128～130 ℃。UVλmax(甲醇)：262 nm，硅胶薄层分析(GF254)，喷以质量分数0.3%固蓝BB盐溶液105 ℃显色为红色。LC-HRESI-MS：m/z431.170 7[M-H]-(理论值：431.171 3)，分子式为C23H28O8。1H-NMR(CCl3D，500 MHz)δ：3.31(2H,s,H-1″)，3.22(2H,t，J=7.5 Hz,H-8)，1.73(2H,J=7.5 Hz,H-9)，1.47(3H,brs,H-10)，1.54(3H,brs,H-11)，3.22(2H,t,J=7.5 Hz,H-8′)，1.73(2H,t,J=7.5 Hz,H-9′)，1.47(3H,brs,H-10′)，1.54(3H,s,J=7.5 Hz,H-11′)，12.3(1H,s,4-OH)，12.3(1H,s,4-OH′)。13C-NMR(CCl3D，126 MHz)δ：17.9(C-1″)，110.7(C-1)，198.6(C-2)，107.9(C-3)，187.7(C-4)，44.2(C-5)，173.2(C-6)，207.1(C-7)，34.7(C-8，8.4(C-9)，24.1(C-10)，25.3(C-11)，111.1(C-1′)，187.7(C-2′)，107.9(C-3′)，198.6(C-4′)，44.2(C-5′)，173.2(C-6′)，207.1(C-7′)，34.7(C-8′)，8.4(C-9′)，24.1(C-10′)，25.3(C-11′)。以上波谱数据与文献[5]基本一致，故鉴定化合物2为白绵马素PP(Albaspidin PP)。

化合物3：淡黄色粉末(丙酮)，mp:187～188 ℃。UVλmax(甲醇)：292 nm，硅胶薄层分析(GF254)，喷以质量分数0.3%固蓝BB盐溶液105 ℃显色为红色。LC-HRESI-MS：m/z417.153 7[M-H]-(理论值：417.153 9)，分子式为C22H26O8。1H-NMR(CCl3D，500 MHz)δ：2.09(3H,s,H-11)，3.07(2H,t,J=7.5 Hz,H-8)，1.71(2H,m,H-9)，0.98(3H,t,J=7.5 Hz,H-10)，3.52(2H,brs,H-1″)，2.72(3H,s,H-8′)，1.46(3H,brs,H-9′)，1.50(3H,brs,H-10′)，16.1(1H,s,4-OH)，10.1(1H,s,6-OH)，11.5(1H,s,4-OH′)。13C-NMR(CCl3D，126 MHz)δ：17.3(C-1″)，112.2(C-1)， 160.4(C-2)，106.0(C-3)，161.5(C-4)，102.2(C-5)，155.6(C-6)，207.0(C-7)，45.9(C-8)，18.4(C-9)，14.2(C-10)，106.5(C-1′)，l87.5(C-2′)，108.0(C-3′)，198.1(C-4′)，44.4(C-5′)，171.8(C-6′)，203.7(C-7′)，29.5(C-8′)，24.4(C-9′)，24.9(C-10′)。以上波谱数据与文献[6]基本一致，故鉴定化合物3为黄绵马酸AB(Flavaspidic acid AB)。

化合物4：白色粉末(丙酮)，mp:134～136 ℃。UVλmax(甲醇)：333 nm，硅胶薄层分析(GF254)，喷以质量分数0.3%固蓝BB盐溶液105 ℃显色为黄色。LC-HRESI-MS：m/z237.110 0 [M+H]+(理论值237.110 7)，分子式为C13H16O4。1H-NMR(CCl3D，500 MHz)δ：1.75(3H,s,H-7)，2.84(2H,t,H-9)，1.55(2H,m,H-10)，0.89(3H,t,J=7.5 Hz,H-11)，1.26(3H,brs,H-12)，1.26(3H,brs,H-13)。13C-NMR(CCl3D，126 MHz)δ：106.4(C-1)，190.0(C-2)，49.7(C-3)，176.8(C-4)，103.7(C-5)，199.0(C-6)，7.3(C-7)，205.1(C-8)，42.4(C-9)，19.8(C-10)，14.5(C-11)，24.1(C-12)，25.1(C-13)。以上波谱数据与文献[7]基本一致，故鉴定化合物4为Compound V。

化合物5：淡黄色粉末(石油醚),mp:134～136 ℃ (甲醇)。FAB-MS：m/z447 [M+H]+，分子式为C24H30O8。1H-NMR(CCl3D，500 MHz)δ：3.73(3H，s，H-7)，3.08(2H，t，J=7 Hz，H-9)，1.72(2H，J=7 Hz，H-10)，0.99(3H，t，J=7 Hz，H-11)，1.53(3H，brs，H-12)3.57(2H，H-7′)，3.2(2H,q,J=7 Hz，H-9′)，1.17(3H，t，J=7 Hz，H-10′)，1.45(3H，brs，H-11′)，2.14(3H，s，H-12′)，15.6(1H，s，2-OH)，10.0(1H，s，6-OH)，18.5(1H，s，4-OH′)，10.7(1H，s，6-OH′)。13C-NMR(CCl3D，126 MHz)δ：112.4(C-1)，162.8(C-2)，107.5(C-3)，159.6(C-4)，109.1(C-5)，160.2(C-6)，61.5(C-7)，207.4(C-8)，42.9(C-9)，18.2(C-10)，13.9(C-11)，9.2(C-12)，110.9(C-1′)，198.6(C-2′)，108.0(C-3′)，187.4(C-4′)，44.2(C-5′)，171.7(C-6′)，17.1(C-7′)，206.8(C-8′)，42.8(C-9′)，18.4(C-10′)，13.3(C-11′)，24.3(C-12′)。以上波谱数据与文献[8]基本一致，故鉴定化合物5为绵马素PB(Aspidin PB)。

化合物6：黄白色粉末(石油醚)，mp:124～125 ℃(甲醇)。FAB-MS：m/z461[M+H]+，分子式为C25H32O8。1H-NMR(CCl3D，500 MHz)δ：3.73(3H，s，H-7)，3.73(3H，s，H-9)，1.71(2H，m，H-10)，0.99(3H，t，J=7 Hz，H-11)，1.44(3H，s，H-12)，3.57(2H，s，H-7′)，3.08(2H，m，H-9′)，1.71(2H，m，H-10′ )，1.01(3H，t，J=17 Hz，H-11′)，2.14(3H，s，H-12′)，1.53(3H，s，H-13′)，15.6(1H，s，2-OH)，10.0(1H，s，6-OH)，10.7(1H，s，4′-OH)，l8.6(1H，s，6′-OH)。13C-NMR(CCl3D，126 MHz)δ：112.4(C-1)，162.8(C-2)，107.4(C-3)，159.5(C-4)，109.4(C-5)，160.2(C-6)，61.5(C-7)，206.8(C-8)，44.2(C-9)，18.0(C-10)，13.9(C-11)，9.2(C-12)，110.9(C-1′)，198.0(C-2′)，108.2(C-3′)，187.5(C-4′)，44.2(C-5′)，171.8(C-6′)，17.1(C-7′)，206.5(C-8′)，42.9(C-9′)，18.1(C-10′)，13.9(C-11′)，24.2(C-12′)，25.2(C-13′)。通过UPLC检测，该化合物与实验室之前已确证的绵马素BB出峰时间一致。以上波谱数据与文献[9]基本一致，故鉴定化合物6为绵马素BB(Aspidin BB)。

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(责任编辑：陈翔)

Study on phloroglucinol derivatives ofDryopterisfragrans(L.) Schott

DU Wenzhao1,SONG Guoqiang1,LIU Haiyan1,FENG Dankai2,SHEN Zhibin1

(1.SchoolofTraditionalChineseMedicine,GuangdongPharmaceuticalUniversity,Guangzhou510006,China; 2.GuangdongHengjianPharmaceuticalLimitedCompany,Jiangmen529040,China)

Abstract:Objective To study on phloroglucinol derivatives of Dryopteris fragrans (L.) Schott. Methods The phloroglucinol derivatives of Dryopteris fragrans (L.) Schott were isolated and purified by silica gel column chromatography,Sephadex LH-20 column chromatography and semi-preparative chromatography. All the compounds were identified by physiochemical properties and spectral data. Results 6 compounds were isolated and identified as Albaspidin BB(1)、Albaspidin PP(2)、Flavaspidic acid AB(3)、Compound V(4)、Aspidin PB(5)、Aspidin BB(6). Conclusion Compounds 1-4 were isolated from Dryopteris fragrans (L.) Schott for the first time.

Key words:Dryopteris fragrans (L.) Schott; phloroglucinol derivatives; chemical; structural identification

DOI:10.16809/j.cnki.1006-8783.2015102802

中图分类号：R284.2

文献标志码：A

文章编号:1006-8783(2016)01-0022-03

作者简介：杜文钊(1990—)，男，2013级硕士研究生，Email:747931467@qq.com； 通信作者：沈志滨(1964—)，女，博士，教授，从事中药及复方化学成分研究，Email:szb8113@126.com。

基金项目：广东省应用型科技研发专项(2015B020234009)

收稿日期：2015-10-28

网络出版时间：2016-01-15 16:53网络出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/44.1413.R.20160115.1653.005.html