高效液相色谱法测定注射用兰索拉唑中兰索拉唑的含量

许　萌，鹿梦溪，周春华*，徐德华，张雪宁，宋　娟(.河北医科大学第二医院药学部，河北 石家庄 050000；.华北理工大学基础医学院，河北 唐山 06000；.河北医科大学药学院药物分析教研室，河北 石家庄 05007)



·论著·

高效液相色谱法测定注射用兰索拉唑中兰索拉唑的含量

许萌1，鹿梦溪2，周春华1*，徐德华3，张雪宁1，宋娟1(1.河北医科大学第二医院药学部，河北 石家庄 050000；2.华北理工大学基础医学院，河北 唐山 063000；3.河北医科大学药学院药物分析教研室，河北 石家庄 050017)

[摘要]目的采用高效液相色谱法建立测定兰索拉唑及其制剂注射用兰索拉唑含量的方法。方法色谱柱为Diamonsil C18(4.6 mm×250 mm，5 μm) ；流动相为甲醇∶水(70∶30)；检测波长为285 nm；流速 1.0 mL/min；柱温25 ℃；进样量 20 μL。结果注射用兰索拉唑制剂中的辅料对兰索拉唑的测定无干扰，兰索拉唑在50~500 mg/L浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系，精密度[相对标准差(relative standard deviation,RSD)=0.14%] 良好；低、中、高3种浓度平均回收率分别为100.0%、98.3%、101.7%，RSD分别为0.5%、0.3%、0.4%。结论该方法简便、准确、专属性好，可用于兰索拉唑及其制剂含量的测定。

[关键词]兰索拉唑；色谱法,高效液相；含量测定

doi:10.3969/j.issn.1007-3205.2016.01.016

兰索拉唑是继奥美拉唑之后的一种新质子泵抑制剂，能够强有力地抑制胃酸分泌，且不受其他胃酸分泌的各种始动因素影响[1]，可广泛用于治疗与酸分泌有关的各种消化功能紊乱性疾病，是近年来临床应用广泛、疗效显著的药物[2-3]。与奥美拉唑相比，兰索拉唑有一个三氟乙氧取代基，其生物利用度较奥美拉唑提高了30%以上，而对幽门螺杆菌的抑菌活性比奥美拉唑提高了4倍[4-5]。兰索拉唑有多种剂型及测定方法[6-9]，本研究采用高效液相色谱法测定兰索拉唑及其制剂含量，以寻求简便快速测定兰索拉唑含量的方法，旨在为兰索拉唑及其制剂的质量控制提供依据。

1资料与方法

1.1仪器高效液相色谱仪，Waters 515高效液相色谱仪；Waters 480紫外检测器，操作平台Empower Application；Diamonsil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5.0 μm)；电子分析天平(CPA225D，德国 Sartorius)；浙江飞越FY-2C旋片式真空泵；超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司，型号KQ-300B)；pH计(上海雷磁仪器厂，型号Phs-3B)。

1.2药品与试剂兰索拉唑对照品 (中国药品生物制品检定所，批号：100709-200902，纯度99.8%)；注射用兰索拉唑(江苏奥赛康，批号：F1411060、F1411061、F1411062；规格：30 mg)；甲醇为色谱纯，其他试剂为分析纯；水为高纯水。

1.3色谱条件Diamonsil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相：甲醇 ∶水 (70 ∶30)；检测波长285 nm；流速 1.0 mL /min；柱温25 ℃；进样量 20 μL。

2结果

2.1溶液的配制①供试品溶液的配制：按照说明书中的配制方法，将兰索拉唑样品进行溶解，并加入到100 mL生理盐水注射液中，即得到供试品溶液。②兰索拉唑对照品溶液的配制：精密称取兰索拉唑对照品25.06 mg，放至25 mL量瓶中，加入甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，配成1.00 g/L的兰索拉唑储备液。③空白辅料溶液的配制：按处方比例分别称取除兰索拉唑以外的其他成分(甘露醇，氢氧化钠)置100 mL 棕色量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5 mL，置25 mL棕色量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得空白辅料溶液。

2.2专属性试验分别取空白辅料溶液、兰索拉唑对照品溶液及注射用兰索拉唑流动相溶液各 20 μL，分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图，结果见图1。各色谱峰均分离良好，空白辅料对兰索拉唑的测定无干扰。

图1空白溶液(A)、对照品(B)及样品(C)的色谱图

Figure 1HPLC of blank sample solution (A),standard solution (B) and sample solution (C)

2.3线性试验依次精密量取“2.1”项下兰索拉唑对照品溶液5、4、3、2、1、0.5 mL，置10 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，配制成浓度分别为500、400、300、200、100、50 mg/L的一系列线性溶液，按照“1.3”项下色谱条件测定，以峰面积A为纵坐标，浓度C为横坐标，进行线性回归，得回归方程A=4.51×104C+4.85×104(r2=0.999 3)。结果表明兰索拉唑在50~500 mg/L浓度范围内线性关系良好。

2.4回收率试验精密称取处方比例的80%、100%、120%兰索拉唑对照品和辅料，置10 mL量瓶中，加入甲醇稀释至刻度，摇匀，每个比例平行配制3份溶液，按照“1.3”项下色谱条件测定，以加入量和测得量计算平均回收率。结果低、中、高3种浓度的平均回收率分别为100.0%、98.3%、101.7%，精密度相对标准差(relative standard deviation,RSD)分别为0.5%、0.3%、0.4%。RSD符合要求，回收率实验结果良好，见表1。

表1　回收率试验结果

2.5精密度试验配置浓度约为300 mg/L的兰索拉唑对照品溶液，按照“1.3”项下色谱条件测定，连续进样6次，记录峰面积，计算峰面积的RSD为 0.2%(n=6)，说明该方法精密度良好。

2.6稳定性试验将配置好的供试品溶液放置0、1、2、3、4、5、6 h后，按照“1.3”项下色谱条件测定，记录峰面积，计算RSD为1.5%，说明该供试品在室温放置6 h过程中浓度基本不变，稳定性良好。

2.7注射用兰索拉唑样品的含量测定取3个批号的注射用兰索拉唑，按照“2.1”项下，分别用生理盐水溶解稀释成每1 mL含兰索拉唑300 μg的样品溶液，精密取上述溶液各20 μL，分别注入色谱仪，记录色谱图。另取兰索拉唑对照品适量，同法测定，按外标法以峰面积计算含量。3个批号的样品含量分别为标示量的100.1%、99.3%、99.5%。结果见表2。

表2　含量测定结果

3讨论

3.1注射用兰索拉唑消化性溃疡病是一种常见病、多发病，发病率约占人口总数的10%。目前消化道溃疡治疗药主要有质子泵抑制剂(兰索拉唑等)、H2受体拮抗剂(雷尼替丁等)、胃黏膜保护剂(铋剂)、抗酸剂(氢氧化铝)等[10-12]。目前国内使用最广泛的质子泵抑制剂有兰索拉唑。

兰索拉唑为苯并咪唑类衍生物，是碱性化合物，其水溶液不稳定，在酸性条件下易分解，因此通常在注射用兰索拉唑的处方中加入一定量的氢氧化钠，以营造碱性环境来增加其溶解度[13]。临床应用中常与氯化钠溶液或葡萄糖溶液配伍使用，多数为中性或偏酸性，使用不当时会出现溶液变色和沉淀现象。注射用兰索拉唑在复配过程中，其pH会发生改变，从而使溶解度发生改变，有较大的微粒产生，可能会使兰索拉唑的含量减少，不能够达到有效的血药浓度，同时大微粒的产生，还会在输液过程中可能堵塞小的毛细血管，给患者带来严重的危害，甚至危及生命。国内已有报道患者在输注兰索拉唑等药物时，发生栓塞性疾病，造成患者死亡，虽然没有找到确凿的依据，表明患者的死亡是由输注拉索拉唑发生栓塞造成的，但是注射用兰索拉唑在复配过程中产生微粒的事实还是不容忽视的。因此，临床上使用注射用兰索拉唑时必须配有1.2 μm的过滤器，以便去除输液过程中可能产生的不溶性微粒，避免不溶性微粒对人体造成的严重危害。为保证注射用兰索拉唑的产品质量及临床用药的安全有效性，本研究采用高效液相色谱法对注射用兰索拉唑含量进行测定。

3.2色谱条件的选择将兰索拉唑对照品溶液在200~400 nm的波长范围内经紫外线扫描，结果最大吸收峰在285 nm处，而在此波长下辅料没有吸收，不干扰测定。故选择285 nm作为测定波长。

参照国家药品标准中兰索拉唑片和兰索拉唑肠溶胶囊的分析检验方法，二者均采用甲醇-磷酸盐的流动相，与此相比，本研究对注射用兰索拉唑含量的测定方法进行了简化。此方法下兰索拉唑与其空白辅料峰能分离完全，峰形较好且保留时间适宜。试验结果表明该方法简便、快速、准确，适用于注射用兰索拉唑药品生产及实际应用中的含量测定。

3.3注射用兰索拉唑的含量 注射用兰索拉唑为注射剂，是兰索拉唑的无菌冻干粉制剂。按平均装量计算，制剂中含兰索拉唑应为标示量的90.0%~110.0%。本研究中测得的3个批号的注射用兰索拉唑中兰索拉唑的含量分别为标示量的100.1%、99.3%、99.5%，均在标准所规定的范围内，符合制剂标准规定。

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(本文编辑：许卓文)

Determination of related substances in lansoprazole for injection

by high performance liquid chromatography

XU Meng1,LU Meng-xi2,ZHOU Chun-hua1*，

XU De-hua3,ZHANG Xue-ning1,SONG Juan1

(1.Department of Pharmacy,the Second Hospital of Hebei Medical University,Shijiazhuang

050000,China;2.College of Basic Medical,North China University of Science and Technology,

Hebei,Tangshan 063000,China;3.Department of Pharmacy,Hebei Medical

University,Shijiazhuang 050017,China)

[Abstract]ObjectiveTo use high performance liquid chromatography for the determination of the content of lansoprazole and lansoprazole injection.MethodsThe determination was carried out on with a Dikma Diamonsil TM2C18(4.6 mm×250 mm, 5 μm) column.The mobile phase was methanol-water(70∶30). The determination wavelength was 285 nm.ResultsThe excipients did not interfere with the determination of lansoprazole.The developed method could be used for the determination of lansoprazole and its injection.The calibration curve of lansoprazole was in good linearity over the range of 50-500 mg/L.The precision of the method(relative standard deviation[RSD]=0.14%) was good.The average recovery of the low,medium,and high concentrations were 100.0%,98.3%,101.7% with RSD 0.5%,0.3%,0.4% respectively.ConclusionThe method is simple,accurate and specific.It can be used for the determination of lansoprazole.

[Key words]lansoprazole;chromatography，high performance liquid;content determination

[中图分类号]R961

[文献标志码]A

[文章编号]1007-3205(2016)01-0057-04

*通讯作者：E-mail: Zhouchunhua80@126.com

[作者简介]许萌(1989-)，女，河北保定人，河北医科大学第二医

[基金项目]河北省医学科学研究重点课题(20150677；20150261)；

[收稿日期]2015-09-14；[修回日期]2015-10-20

河北省药学会临床药学专项科研项目计划(YX201501)

院药剂师，理学硕士，从事药物质量与控制研究。