p53凋亡刺激蛋白抑制因子表达水平与鼻咽癌临床病理学特征的关系▲

吴 芳 王仁生 张 勇 方业颖 胡 凯

(广西医科大学第一附属医院放疗科，南宁市 530021，E-mail：96160f@163.com)

论著·临床研究

p53凋亡刺激蛋白抑制因子表达水平与鼻咽癌临床病理学特征的关系▲

吴 芳 王仁生 张 勇 方业颖 胡 凯

(广西医科大学第一附属医院放疗科，南宁市 530021，E-mail：96160f@163.com)

目的 探讨p53凋亡刺激蛋白抑制因子(iASPP)表达水平与鼻咽癌临床病理学特征的关系。方法 采用免疫组化法检测iASPP在62例鼻咽癌患者鼻咽癌组织中的表达情况，比较不同临床病理特征者的iASPP表达情况。结果 62例患者中iASPP阳性表达者44例(71.0%)，阴性表达者18例(29.0%)。不同性别、年龄、病理分型、T分期和临床分期患者的iASPP阳性表达率比较，差异均无统计学意义(P均>0.05)，而不同N分期患者的iASPP阳性表达率比较，差异有统计学意义(P<0.05)。N分期与iASPP阳性表达率呈正相关(r=0.368，P=0.003)。结论 鼻咽癌患者的N分期与iASPP阳性表达有关，iASPP的表达水平有可能成为鼻咽癌预后的预测指标。

鼻咽癌；p53凋亡刺激蛋白抑制因子；临床病理特征

鼻咽癌是我国南方地区常见的恶性肿瘤之一，放射治疗是鼻咽癌的主要治疗手段，单纯放疗的5年生存率为50%～60%。随着调强放疗越来越广泛地应用于临床，目前鼻咽癌治疗失败的主要原因是远处转移[1]。因此寻找影响鼻咽癌侵袭转移的分子标志物，对鼻咽癌的预后判断及抗鼻咽癌侵袭转移有着非常重要的意义。p53凋亡刺激蛋白抑制因子(inhibitory member of the apoptosis stimulating protein of p53 family，iASPP)是近年发现的一个重要的蛋白质，能竞争性地与p53结合，抑制p53基因诱导的细胞凋亡，是p53凋亡刺激蛋白(apoptosis stimulating protein of p53，ASPP)家族中唯一的抑制蛋白，被认为是一种新的癌基因。目前国内外对iASPP的研究主要针对肺癌、乳腺癌及白血病等，在鼻咽癌中尚缺乏研究。本研究应用免疫组化的方法，检测iASPP在鼻咽癌组织中的表达情况，探讨iASPP在鼻咽癌组织中的表达及临床意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料 收集2012年1～6月在广西医科大学第一附属医院经病理证实的鼻咽癌患者的鼻咽癌组织石蜡病理标本62例。患者入组标准：(1)经病理检查确诊为鼻咽癌且尚未进行任何放疗、化疗等抗癌治疗者；(2)按照鼻咽癌[2009美国癌症联合委员会(American Joint Committee on Cancer，AJCC)第7版]分期[2]为Ⅰ～Ⅳb期的患者；(3)功能状态(performance status，PS)评分[3]≤2分；(4)放疗前均行全身检查，无远处转移和其他肿瘤病史；(5)放疗前血常规、肝肾功能等各项指标均无异常。排除标准：(1)发生任何远处转移的患者；(2)既往或目前患任何其他恶性肿瘤的患者；(3)任何其他疾病或状况为放化疗禁忌证(如感染活跃期，心肌梗死后6个月内，症状性心脏病，包括不稳定心绞痛、充血性心衰或未控制的心律失常，免疫抑制治疗)；(4)妊娠、哺乳期妇女；(5)严重骨髓功能障碍者；(6)具有出血倾向者。共纳入患者62例，男47例，女15例，年龄19～71岁，中位年龄46岁。世界卫生组织分型[3]Ⅰ型2例、Ⅱ型3例、Ⅲ型57例。按美国癌症联合委员会 2009分期系统分期，Ⅰ期0例，Ⅱ期3例，Ⅲ期30例，Ⅳa-b期29例。T1、T2、T3、T4期分别为3、9、29、21例。N0、N1、N2、N3期分别为2、15、32、13例。

1.2 主要试剂 兔抗人iASPP多克隆抗体购于北京博奥森生物技术有限公司(批号bs-0284R)，Supervision即用型二步法检测试剂盒购于上海长岛生物技术有限公司(批号ZKSP-10446)。

1.3 检测方法 采用免疫组化Supervision二步法检测鼻咽癌组织中iASPP的表达，严格按试剂盒说明书操作：蜡块按4 μm厚度切片，常规脱蜡水化。在pH 6.0的0.01 mol/L柠檬酸盐缓冲液中煮沸热修复抗原，3% H2O2室温孵育15 min，非免疫血清封闭40 min，加一抗4℃孵育过夜，加Supervision鼠/兔-辣根过氧化物酶广谱检测系统，室温下孵育20 min，二氨基联苯胺显色，苏木精复染，梯度酒精(70%、80%、90%无水酒精)脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。

1.4 阳性结果判定 iASPP蛋白阳性定位于细胞浆和细胞核，以细胞浆和(或)细胞核出现棕黄色显色为iASPP蛋白表达阳性。每张病理切片通过光学显微镜放大400倍，随机选取5个视野进行iASPP阳性细胞结果判定。着色强度的判定：不着色为0分，淡黄色为1分，褐色为2分，深棕色为3分。阳性细胞百分比的判断：<5%为0分，5%～25%为1分； 26%～50%为2分，51%～75%为3分，>75%为4分。两部分的得分之和为最后的得分(0～1分为阴性，2分为弱阳性，3～5分为阳性，6～7分为强阳性)。

1.5 统计学分析 采用SPSS 17.0进行统计学分析。计数资料比较采用χ2检验，相关性分析采用Spearman分析。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 鼻咽癌组织中iASPP的表达情况 62例鼻咽癌组织标本中，iASPP阳性表达44例(71.0%)，见图1，阴性表达18例(29.0%)。

图1 鼻咽癌组织中iASPP的表达(Supervision法，×400)

2.2 iASPP表达与鼻咽癌临床病理因素间的关系 不同性别、年龄、病理分型、T分期和临床分期患者的iASPP阳性表达率比较，差异均无统计学意义(P均>0.05)，但不同N分期患者的阳性表达率比较，差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。进一步相关性分析结果显示，iASPP阳性表达率和N分期呈正相关性(r=0.368，P=0.003)。

表1 iASPP表达水平与临床病理因素间的关系(n，%)

3 讨 论

iASPP是2003年发现的ASPP家族新成员，由PPPIRl3L基因编码，全长由828个氨基酸组成，存在于细胞质和细胞核。iASPP与其他两个家族成员(ASPP1和ASPP2)在结构上的共同特点是C-末端都含有SH3结构域、锚蛋白重复序列、富含脯氨酸的结构域。C-末端是ASPP家族的主要作用位点，能与p53 DNA结合区域结合从而发挥作用。但与其他两个家族成员不同的是，iASPP能竞争性地与p53结合，抑制p53基因诱导的细胞凋亡，是ASPP家族中唯一的抑制蛋白，被认为是一种新的癌基因。大量研究表明iASPP在多种恶性肿瘤中均呈现高表达，而在正常组织中低表达或不表达。其中，Zhang等[4]发现iASPP基因在急性早幼粒细胞白血病和急性粒-单核细胞白血病亚型M4EO中的表达明显高于其他急性粒细胞白血病病类型，并且在急性白血病患者细胞中iASPP表达水平明显高于完全缓解期患者和健康人，这提示iASPP基因可能在急性粒细胞白血病进展中发挥重要作用。Liu等[5]在对109例头颈鳞癌标本进行检测后发现，iASPP蛋白和mRNA在头颈鳞癌组织中的表达显著高于癌旁黏膜组织。Chen等[6]发现iASPP在非小细胞肺癌组织中的表达明显高于癌旁组织。在口腔鳞状细胞癌[7]、食管癌[8]、宫颈癌[9]、乳腺癌[10]、肝癌[11]、子宫内膜癌[12]、卵巢癌[13]等组织中，iASPP均呈高表达。这些研究结果提示iASPP的高表达可能在肿瘤的发生中发挥着非常重要的作用。本研究结果也显示，在62例鼻咽癌患者中，iASPP在大部分患者(71.0%)鼻咽癌组织中呈阳性表达。

随着对iASPP基因研究的不断深入，人们发现iASPP与肿瘤的一些生物学行为密切相关。Chen等[6]通过shRNA技术下调A459和95D肺癌细胞中iASPP的表达，结果发现细胞的增殖能力随之下降。Chen等[14]研究发现口腔舌鳞癌细胞中iASPP表达增加与肿瘤分化差及淋巴结转移有关，而降低iASPP的表达可导致癌细胞G0/G1期阻滞，细胞凋亡减少，增殖能力下降。Laska等[15]认为iASPP可以促进肿瘤细胞迁移，并且可能对促进肿瘤转移起重要作用。Liu等[12]用免疫组织化学法检测45例子宫内膜腺癌组织和26例正常子宫内膜组织中iASPP的表达，结果显示子宫内膜腺癌中iASPP表达明显增加，并与肿瘤浸润及淋巴结转移密切相关。Cao等[9]分析149例早期宫颈鳞癌(FIGO Ⅰb1-Ⅱa期)中iASPP的表达及其与临床病理因素间的关系，结果显示iASPP在宫颈鳞癌中表达升高，并与肿瘤分期、深间质浸润、盆腔淋巴结转移等密切相关，iASPP高表达者5年总生存期和无病生存期明显低于iASPP低表达者(P<0.05)，进一步行多因素分析显示iASPP高表达是宫颈癌总生存率的独立预后因素。以上研究结果均提示iASPP可能与肿瘤的进展有关，其可成为评估患者预后的一个指标。本研究中，不同N分期患者鼻咽癌组织的iASPP阳性表达率存在差异(P<0.05)，两者呈正相关性(P<0.05)，即随着N分期的增高iASPP阳性表达率升高，提示iASPP表达与鼻咽癌预后密切相关，这与上述文献报告相似。

综上所述，iASPP在鼻咽癌组织中的表达水平与患者的N分期有关，其有可能成为鼻咽癌预后的一个预测指标，但尚需进一步扩大病例研究。

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Relationship between expression level of inhibitory member of the apoptosis stimulating protein of p53 family and clinicopathological features in nasopharyngeal carcinoma

WUFang,WANGRen-sheng,ZHANGYong,FANGYe-yin,HUKai

(DepartmentofRadiotherapy,theFirstAffiliatedHospitalofGuangxiMedicalUniversity,Nanning530021,China)

Objective To explore the relationship between expression level of inhibitory member of the apoptosis stimulating protein of p53 family (iASPP) and clinicopathological features in nasopharyngeal carcinoma.Methods Immunohistochemistry was used to detect the expression of iASPP in the carcinoma tissues of 62 patients with nasopharyngeal carcinoma.The clinicopathological features were compared among the patients with different expressions of iASPP.Results Of 62 patients,positive expression of iASPP was observed in 44 patients (71.0%),and negative expression in 18 patients(29.0%).No significant difference in the positive expression rate of iASPP was found among the patients with different genders,ages,pathological types,T stages or clinical stages(P>0.05).But there was significant difference in the positive expression rate of iASPP among the patients with different N stages(P<0.05).The positive expression rate of iASPP positively correlated with N stage(P<0.05).Conclusion N stage correlates with the positive expression of iASPP in patients with nasopharyngeal carcinoma.iASPP expression level may be a prognostic predictor of nasopharyngeal carcinoma.

Nasopharyngeal carcinoma,Inhibitory member of the apoptosis stimulating protein of p53 family,Clinicopathological feature

广西医科大学青年科学基金(GXMUYSF2014036)

吴芳(1978～)，女，博士，副主任医师，研究方向：鼻咽癌综合治疗。

王仁生(1963～)，男，博士，主任医师，研究方向：鼻咽癌综合治疗，E-mail：13807806008@163.com。

R 739.6

A

0253-4304(2016)08-1075-03

10.11675/j.issn.0253-4304.2016.08.07

2016-03-13

2016-05-31)