观察骨髓间充质干细胞对大鼠心脏移植的免疫调节作用

赵敏 王慧琴



观察骨髓间充质干细胞对大鼠心脏移植的免疫调节作用

赵敏 王慧琴

【摘要】目的 探究骨髓间充质干细胞对大鼠心脏移植的免疫调节作用。方法 选取实验动物中心健康雄性SD大鼠与Wistar大鼠，将其分成A、B、C三组，建立大鼠心脏移植模型，贴壁法分离培养大鼠MSC（骨髓间充质干细胞），由受体颈外静脉注入，观察移植后大鼠的存活时间，HE（苏木精-伊红）染色观察移植心脏淋巴细胞浸润程度。结果 B、C两组与A组对比，大鼠平均存活时间差异有统计学意义（P＜0.05），B、C两组对比平均存活时间差异无统计学意义（P＞0.05）。B、C两组与A组移植心脏病理学分级评分对比差异有统计学意义（P＜0.05）。B、C两组移植心脏病理学分级评分差异无统计学意义（P＞0.05）。结论在体外混合淋巴细胞反应中MSC能抑制T细胞增殖，但在体内实验中没有观察到移植物存活时间显著延长及没有减轻淋巴细胞浸润。

【关键词】骨髓间充质干细胞；心脏移植；免疫调节

研究表明人体MSC与同种异体T淋巴细胞共同培养不能引起T细胞增殖，并抑制混合淋巴细胞反应，且不受组织相容性复合物限制[1]。MSC在体外混合培养发挥免疫调节作用已被证实[2]，但其在体内试验的有关数据不足。本次实验目的是验证MSC对大鼠心脏移植免疫调节作用。报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取实验动物中心健康雄性SD大鼠与Wistar大鼠，将其分成A、B、C三组，A组同种同系移植组，供受体全部为SD大鼠；B组同种异系非给药对照组，供体Wistar大鼠，受体SD大鼠；C组同种异系给药实验组，供体Wistar大鼠，受体SD大鼠。每组各8例，4例观察存活时间，4例术后第5天观察移植心脏病理变化。

1.2 方法

建立大鼠心脏移植模型[3]，贴壁法分离培养大鼠MSC（骨髓间充质干细胞），由受体颈外静脉注入。

1.3 观察指标

观察移植后大鼠的存活时间，HE（苏木精-伊红）染色观察移植心脏淋巴细胞浸润程度。排斥反应分为0～3级[4]（采用ISHT标准）。

1.4 统计学分析

采用SPSS 19.0软件处理数据，计数、计量资料行χ2检验/t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

培养48 h后，发现少量贴壁细胞，呈现成纤维细胞样。7 d左右85%以上呈现纤维细胞样，细胞不均，核仁清晰可见。11 d左右单层细胞形成。传代后细胞分布均匀，呈典型成纤维细胞样。HE染色方法[5]鉴定表明贴壁细胞（包括小圆形细胞）为MSC而非造血干细胞。A、B、C组大鼠平均生存时间分别为（20.5±4.4）d、（6.4±0.6）d、（6.7±1.0）d。B、C两组与A组对比差异有统计学意义（P＜0.05），B、C两组差异无统计学意义（P＞0.05）。术后5 d，A组心肌细胞出现轻度水肿，细胞结构无变化，骨髓间质未见淋巴细胞侵润；B、C两组可见淋巴细胞侵润。病理分级评分：A、B、C组评分分别为（0.21±0.25）分、评分为（2.97±0.51）分、（3.03±0.57）分。B、C两组与A组对比差异有统计学意义（P ＜0.05），B、C两组差异无统计学意义（P＞0.05）。

3 讨论

同种原位心脏移植被应用到末期心脏病治疗中，术后排斥反应影响心脏移植成败、患者生存期、生活治疗等问题显现出来。同种移植排斥反应以T淋巴细胞免疫反应为主要机制，已被证实体外培养MSC可抑制混合淋巴细胞反应，有效抑制T细胞增殖，其不受供体、受体或第三者MSC限制，均具有免疫调节作用[6]。MSC独特的免疫特性使其能够在同种异基因存活[7]，根据其这种特性理论上有理由推断MSC在异基因移植宿主内长期存活，避免宿主免疫监视[8]，而本次研究将MSC异基因移植到大鼠体内，未发现大鼠存活时间明显延长或是降低淋巴细胞侵润程度。

综上，在体外混合淋巴细胞反应中MSC能抑制T细胞增殖，但在体内实验中没有观察到移植物存活时间显著延长及没有减轻淋巴细胞浸润。

参考文献

[1]刘德忠，石炳毅，刘奎利，等.受者同系骨髓间充质干细胞对心脏移植大鼠的免疫调节作用[J].解放军医学杂志，2012，37（3）：185-189.

[2]秦静，赵振林.骨髓间充质干细胞的免疫原性特点及其免疫调节能力[J].现代免疫学，2010，30（6）：515-519.

[3]陈佳，关伟军，马月辉.间充质干细胞在各类疾病中的临床应用[J].黑龙江畜牧兽医（科技版），2015（9）：54-56.

[4]朱希山，台卫平，施薇，等.骨髓和脂肪来源间充质干细胞的免疫调节作用[J].中国组织工程研究与临床康复，2011，15（36）：6683-6686.

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[6]安志洁，赵丽萍，陈鹏，等.改良式外周置入中心静脉导管术在乳腺癌化疗患者中的应用效果[J].中华现代护理杂志，2011，17 （28）：3405-3408.

[7]黄幼程，张男.超声引导下微插管鞘技术在乳腺癌患者PICC置管中的应用[J].福建医药杂志，2011，33（6）：163-164.

[8]鲍咏咏.非超声引导下肘上塞丁格技术在乳腺癌患者中的应用体会[J].临床医药文献电子杂志，2015，2（15）：2957，2960.

·护理研究·

作者单位： 450000 郑州澍青医学高等专科学校基础医学部

To Observe the Effect of Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells on the Immune Regulation of Heart Transplantation in Rats

ZHAO Min WANG Huiqin, School of Basic Medical Sciences, Zhengzhou Shuqing Medical College, Zhengzhou 450000, China

[Abstract]Objective To explore the effect of bone marrow mesenchymal stem cells on heart transplantation in rats.Methods From the experimental animal center of healthy male SD rats and Wistar rats, divided into A, B, C three groups,to establish the model of rat heart transplantation, adherent cultured rat MSC (mesenchymal stem cells), injected by the external jugular vein of the recipient after transplantation, observe the survival time of rats, HE (hematoxylin and eosin) staining of cardiac allograft lymphocyte infiltration.Results B, C two groups compared with the A group, the average survival time difference was statistically significant (P＜0.05), B, C two groups compared with the average survival time difference was not statistically significant (P＞0.05).There was a significant difference in B, C two group and A group (P＜0.05).There was no significant difference in B and C two groups (P＞0.05).Conclusion MSC can inhibit the proliferation of T cells in vitro, but not significantly prolonged the survival time of grafts in vivo, and no significant decrease of lymphocyte infiltration.

[Key words]Bone marrow mesenchymal stem cells, Heart transplantation, Immune regulation

doi：10.3969/j.issn.1674-9308.2016.07.142

【文章编号】1674-9308（2016）07-0206-02

【中图分类号】R654

【文献标识码】A