紫归子泡腾栓抑菌作用研究

武静莲，姜林芬，胡林海，吴红梅，胡芳弟，4

（1.甘肃省第三人民医院，甘肃 兰州 730000；2.甘肃省中医学校，甘肃 兰州 730050；3.嘉峪关市第一人民医院，甘肃 嘉峪关 735100；4.兰州大学药学院，甘肃 兰州 730000）

紫归子泡腾栓抑菌作用研究

武静莲1，姜林芬2，胡林海3，吴红梅2，胡芳弟1，4

（1.甘肃省第三人民医院，甘肃 兰州 730000；2.甘肃省中医学校，甘肃 兰州 730050；3.嘉峪关市第一人民医院，甘肃 嘉峪关 735100；4.兰州大学药学院，甘肃 兰州 730000）

目的 研究紫归子泡腾栓各处方药配伍组合的抑菌作用。方法 采用琼脂稀释法进行抑菌实验，定量测定紫归子泡腾栓各处方药及其配伍组合物抑制白色念珠菌的最低浓度（MIC）以及三味药的分级（或部分）抑菌浓度指数（FIC）。结果 苦豆子、当归、紫草三味单药不同配比均具有一定的抑菌作用；苦豆子和当归的抑菌作用强于紫草；紫草∶当归∶苦豆子按1∶2∶3配比抗菌作用最强，且FIC指数≤0.5，说明该配比时表现为抗菌协同作用。结论 该实验研究为紫归子泡腾栓处方确定提供了理论依据。

紫归子泡腾栓；抑菌作用；配伍组合

由于广谱抗菌素、免疫抑制剂及皮质固醇激素的广泛应用，以及老年人群的不断增长，念球菌所致深部感染日益增多。目前临床应用的抗真菌药物主要为多烯类抗生素、氨基甲酸脂及咪唑类等。这些药物疗效肯定，但有一些毒性和副作用，高效低毒的药物极少。近年来，越来越多的药理实验证实，部分中草药具有显著的抗霉菌作用[1～6]。紫归子泡腾栓处方中各单药均有治疗妇科炎症及其抗菌作用的相关研究报道[5～8]，但尚未见全方抗菌活性的研究报道。本研究以筛选最强抗霉菌活性配比为目标，系统研究了紫归子泡腾栓处方中当归、紫草、苦豆子多种配伍组合体外抗白色念珠菌作用。现将初步研究结果报告如下，以期为开发用于治疗妇科阴道炎症的药物提供药学研究资料。

1材料与方法

1.1材料

（1）当归、紫草、苦豆子药材均购自兰州市黄河药市，由兰州大学药学院周印锁教授鉴定。

（2）菌种及培养基：白色念珠菌标准菌株，由兰州大学微生物病理学研究所韩俭教授友情提供；沙氏琼脂培养基（产品编号：HB0235-10 GB/16294-2010，青岛高科园海博生物技术有限公司）；RPMII640培养基（赛默飞世尔生物化学制品）。

（3）仪器：ZHWY-200B型恒温培养振荡器（上海智城分析仪器制造有限公司），LDZX-75KB立式压力蒸气灭菌器（上海申安医疗器械厂），麦氏比浊管（81M294477，上海申源科技有限公司），JJ200型电子天平（常熟市双杰测试仪器厂），SW-SJ-1D型单人净化工作台（沪净净化设备仪器厂）。

1.2方法

1.2.1菌种活化 将供试的菌种移接入相应的试管斜面培养基上，置于28℃培养箱培养48 h，取出置于0～4℃冰箱冷藏备用。

1.2.2提取物的制备 当归、紫草、苦豆子各自的提取物、当归∶紫草按1∶1混合提取物、当归：苦豆子按1∶1混合提取物，紫草∶苦豆子按1∶1混合提取物、紫草∶当归∶苦豆子分别按1∶1∶1、1∶1∶2、1∶1∶3、1∶2∶3配比提取物均由实验室自制。

1.2.3材料灭菌 无菌水、滤纸片和培养基均采用常规湿热灭菌法，玻璃用品采用干热灭菌法。

1.2.4菌悬液制备 把预先活化的白色念珠菌制成菌悬液，菌悬液中的白色念珠菌为处于旺盛生长期的营养菌丝。试验菌种浓度应用麦氏比浊法（McFarland Standards）确定浓度，最终配制成浓度为5×108CFU/ml的菌悬液。

1.2.5抗菌效价测定 采用双倍稀释法，将各药液分别加入沙氏葡萄糖液体培养基中，使其成不同稀释度（1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32、1∶64、1∶128、1∶256；1∶512；1∶1 024），每管中加真菌液0.2 ml，最终细菌浓度为5×105CFU/ml。35℃孵育18～24 h。观察各药的最低抑菌浓度（MIC）。每一种药液同法操作。同时。另外接种相同体积的真菌液于不含药物之同样培养基中作对照，37℃孵育48 h，完全抑制白色念珠菌生长的最高稀释度为该药物抗菌效价，每个浓度重复3份。

2结果

2.1抑菌浓度

以24 h无霉菌生长的提取液质量浓度为最低抑菌质量浓度，结果见表1。

表1 单组分药物的最低抑菌浓度

由表1可知，苦豆子、当归和紫草三药材提取物体外均具有抑菌作用，苦豆子的抑菌作用最好，紫草的抑菌能力弱于当归和苦豆子。当归、紫草和苦豆子两两配伍后抑菌作用增强，当归、紫草和苦豆子三味药配伍时抑菌作用进一步增强。考察增加当归和苦豆子的配伍量的各组合物的抑菌作用，结果发现紫草∶当归∶苦豆子按1∶2∶3配比时抑菌作用最强。

2.2处方药物分级（或部分）抑菌浓度指数（fractional inhibitory concentration，FIC）

通过各单药最低抑菌体浓度和配伍后最低抑菌浓度，计算FIC，判断各药的相互作用。FIC=联合用药时甲药MIC/单独应用甲药时MIC+联合应用乙药时MIC/单独应用乙药时MIC，FIC指数为≤0.5、0.6～1.0、1.1～2.0、＞2时分别表示协同、相加、无关、拮抗作用。本实验计算的各药的FIC见表2。

表2 各组分配伍药物的最低抑菌浓度

由表2可知，紫草∶当归∶苦豆子分别在1∶1∶3和1∶2∶3两种配比时，FIC指数均小于0.5，这说明这三味药具有抗菌协同作用，且在紫草∶当归∶苦豆子按1∶2∶3配比时，FIC值为0.08，说明其抗菌协同作用最强。

3讨论

念珠菌是一种最常见的真菌，是条件致病菌。免疫功能低下的病人，如肿瘤病人、器官移植病人、艾滋病病人、身体衰弱的老年人非常容易发生白色念珠菌感染，如不及时治疗可造成死亡。当归、紫草、苦豆子提取物都有一定的抑菌作用，三味药的抑菌效果可以通过相互配伍而增强。

长期以来，化学农药的滥用引发了一系列的公害问题，如环境污染、人畜中毒、杀伤天敌、破坏生态平衡，因此，从植物药中探寻具有强抗菌性的活性物质具有十分重要的意义。甘肃省当归资源极其丰富，品质优良，因此利用甘肃丰富的当归资源开发天然的抑制白色念珠菌的药物，具有重要的现实意义。若能对三味药物中的抗菌活性成分进行进一步的分离、纯化及结构鉴定，将会使植物源杀菌剂的研究得到更深一步的拓展，也有望开发出高活性天然抗菌药物，为人类健康作出巨大贡献。

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R285.1

B

1671-1246（2016）23-0108-02

注：本文系甘肃省卫生厅2013年资助中医药科研课题（GZK-2012-15）