仔猪流行性腹泻发病诊断及感染毒株S基因特点分析

马坤

（普莱柯生物工程股份有限公司，河南 洛阳 471000）

仔猪流行性腹泻发病诊断及感染毒株S基因特点分析

马坤

（普莱柯生物工程股份有限公司，河南 洛阳 471000）

2016年2月，江苏某猪场发生仔猪病毒性腹泻，临床表现为拉黄色、灰色水样粪便，个别呕吐，严重者脱水死亡。年龄越小，症状越重，以产房仔猪最为严重，发病率和死亡率最高。笔者对发病场进行了流行病学调查，临床解剖，实验室病原检测，阳性抗原S基因测序及变异特点分析，最终诊断此次疫病为新流行变异猪流行性腹泻病毒（PEDV）毒株感染引起的仔猪流行性腹泻。

猪流行性腹泻；发病诊断；基因变异分析

猪流行性腹泻，英文缩写为PED（Porcine Epidemic Diarrhea），是由猪流行性腹泻病毒引起的一种接触性急性肠道传染病。1971年首发于英国，20世纪80年代初我国陆续发生本病。临床变化和症状与猪传染性胃肠炎极为相似。以呕吐、水样腹泻、脱水为特征，粪便颜色有黄色、黄绿色、灰色等，在我国多发生在每年12月份至翌年2月份，夏季也有严重发病案例。各种年龄的猪均易感，在本病暴发的猪场，一般先感染肥育猪，然后到种猪最后到哺乳仔猪的感染过程，但以哺乳仔猪的致死率最高，其中7日龄内仔猪感染后迅速脱水死亡，损失惨重。尤其2010年以来以变异型猪流行性腹泻病毒引起的仔猪流行性腹泻，给我国养猪业造成严重的经济损失。

1 临床症状

2016年2月初江苏某规模猪场发生病毒性腹泻，临床症状为黄色、灰色水样腹泻，脱水，个别有呕吐。年龄越小，症状越重，以产房仔猪最为严重，发病率和死亡率最高。少数病猪出现体温升高1～2℃，精神沉郁，食欲减退或不食。

2 剖检病变

共剖检10头发病猪，剖检变化主要为脱水、消瘦、肠管膨胀扩张，肠壁变薄、透明、肠黏膜出血脱落，小肠内充满大量黄色、红色带泡沫水样液体，肠系膜淋巴结出血肿大（图1—图10）。

图1 肠管膨胀，肠系膜淋巴结出血

图2 肠黏膜脱落、肠系膜淋巴结出血

图3 肠道出血、充满红色水样液体

图4 肠腔充满黄色水样液体

图5 胃肠胀气、肠系膜淋巴结出血

图6 肠黏膜脱落、肠壁变薄

图7 肠黏膜脱落、肠壁透明

图8 肠道充满黄色带泡沫液体

图9 肠壁变薄、充满黄色水样液体

图10 肠道出血、膨胀

3 实验室诊断

采集剖检猪的肠内容物及送检的发病猪粪便，用国家兽用药品工程技术研究中心诊断实验室自建的PCR方法检测猪流行性腹泻病毒（PEDV）、猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）和猪轮状病毒（PoRV）。

4 实验室检测结果

病料分8个待检样品，其中剖检大箱-保育猪肠内容物编号16106-1，大箱-小猪肠内容物编号16106-2，大箱-粪便编号为16106-3和16106-4，小箱-2份肠内容物编号16106-5，小箱-3份肠内容物编号16106-6，大箱-肠内容物/粪便编号16106-7，小箱-5份肠内容物编号16106-8。PEDV的PCR检测结果：除16106-1外，其余均为阳性，如图11；TGEV和PoRV的PCR检测结果均为阴性，如图12、图13。

图11 PEDV PCR产物凝胶电泳

图12 TGEV PCR产物凝胶电泳

图13 PoRV PCR产物凝胶电泳

根据以上实验室检测结果，结合流行病学特征、临床症状和剖检变化确诊为PEDV感染引起的仔猪流行性腹泻。

5 阳性样品16106-3测序结果及分析

5.1 PEDV阳性样品测序结果

测序获得PEDV阳性样品16106-3的S基因的部分序列，长为543 bp。

5.2 测序结果与已知PEDV分离株之间S基因序列同源性分析

将PEDV阳性样品16106-3与已分离的PEDV代表毒株S基因核苷酸序列进行同源性比较（图14）。结果显示，16106-3与31株PEDV代表株的基因序列同源性均高于77.1%，但各序列之间存在少量突变、插入或缺失，导致同源性也不尽相同。目前，PEDV的商品化弱毒疫苗主要有我国的CV777株、日本的83P-5株和韩国的DR13株，P16106-3与其同源性分别是77.8%、77.1%和77.5%，而与近几年流行毒株USA_MN、CH_FJND-3、CH_GD-A、TW_Yun lin-91、TW_Chiayi-32等的同源性均高于93.1%，这说明与近些年流行的美洲株、中国大陆株和台湾株亲缘关系较近，而与我国以前的地方流行株，如CH_S、JS-2004、JS2008等亲缘关系较远，均不高于77.1%。

图14 不同PEDV毒株之间S基因核苷酸序列同源性分析

5.3 测序结果与已知PEDV分离株之间S基因核苷酸序列的进化树分析

PEDV不同毒株S基因核苷酸序列进化树分析发现（图15），PEDV阳性样品16106-3与中国流行株CH_FJND-3处于同一个分支。

图15 不同PEDV毒株之间S基因核苷酸序列的进化树分析结果

5.4 16106-3核苷酸序列与已知PEDV毒株全基因序列比对分析

PEDV阳性样品16106-3核苷酸序列与其它毒株相应序列的比对分析结果显示，PEDV阳性样品16106-3的核苷酸序列在180 bp和340 bp处，分别有3 bp、12 bp的碱基缺失。此外16106-3与中国近些年（2011年以后）流行株CH_FJND-3、CH_GD-A、TW_Yunlin-91、TW_Chiayi-32等一样，在470 bp处有6 bp碱基缺失，而与中国早前流行的CH_S、JS-2004、JS2008等毒株在200 bp和240 bp处分别有数量不等的碱基突变不同。推测PEDV阳性样品16106-3可能属于中国近些年引起仔猪病毒性腹泻的流行毒株。

6 讨论与分析

我国自2010年年底开始至今，新流行变异株引起的仔猪流行性腹泻给我国养猪业造成很大损失，尤其是造成了产房仔猪大批死亡。因为新流行变异株在基因序列上发生变异导致其抗原性也发生了一定的改变，所以以CV777疫苗株为代表的早期疫苗的免疫效果不是很理想，因此尽早研发出新变异株的有效疫苗尤为重要。当前形势下针对该疫病的防控，不光要采取增加免疫次数和免疫剂量等强化免疫方式，还要做好饲养管理和猪场生物安全等综合防控措施。针对发病猪场，隔离、消毒，及时准确的诊断，无其它病原基础上的母猪返饲，高效自家苗免疫，补液增能和控制继发感染治疗，病死猪的无害化处理，以及完善的综合防控措施的实施为该病的控制发挥了重要作用。

（编辑：郭玉翠）

全球高血压患者激增至11亿

发展中国家增幅大 中国占五分之一强

【法新社巴黎11月16日电】根据周三公布的一份研究报告，全球饱受高血压之苦的人数近40年来增加一倍，高达10亿多，其中大多数人生活在发展中国家。

早在1975年，高血压主要影响富裕国家。时至今日，情况发生了根本性的转变，中低收入国家患高血压人数的增长令人瞠目。

研究报告主要作者、伦敦帝国理工学院教授马吉德·伊扎蒂指出，高血压是脑血管意外和心血管疾病的主要风险因素，每年可造成约750万人死亡。

【法新社巴黎11月16日电】研究人员周三称，过去40年全球高血压患者人数几乎翻了一番，南亚和非洲是高血压患者人数增加最多的地区。

研究报告主要作者伊扎蒂说：“从全球看，高血压不再是西方世界或富国才有的健康问题。对世界上最贫困国家及其民众来说，高血压也是严重问题。”

据医学杂志《柳叶刀》公布的这份报告称，1975至2015年，成年高血压患者人数从5.94亿增至11亿。

研究发现，澳大利亚、加拿大、德国和日本等高收入国家同期的高血压患病率“明显下降”。撒哈拉以南非洲国家、南亚国家和一些太平洋岛国等中低收入国家的高血压患者人数增幅最大。

2015年，成年高血压患者中有一多半（约5.9亿人）生活在东亚、东南亚和南亚地区，其中有2.26亿人生活在中国，1.99亿人生活在印度。

高血压患者罹患心脏病、中风、肾病和痴呆症的风险更高。

据世界卫生组织称，血压值升至或超过140/90即可认定为高血压。该机构设定了一个目标：到2025年高血压患者人数要减少25%。

但伊扎蒂说，如果不推行“有效政策”让最贫困群体改善饮食—特别是要减少盐摄入量并吃得起水果蔬菜，世界卫生组织制定的目标将“不太可能实现”。

研究报告使用的数据来自生活在200个国家的1 910万名18岁及以上年龄受访者。

（转自参考消息[N]，2016-11-17）

S858.28

A

1002-1957(2016)06-0113-03

2016-10-10

马 坤（1983-），男，安徽毫州人，兽医师，执业兽医师，硕士，主要从事猪疫苗销售技术服务工作.E-mail：abcmakun306@163.com