MiRNA-155在肝细胞癌组织中的表达及其与临床病理特征和预后的关系

郑嵘炅,张丽娟

(新疆医科大学第一附属医院感染性疾病中心,新疆 乌鲁木齐 830054)



MiRNA-155在肝细胞癌组织中的表达及其与临床病理特征和预后的关系

郑嵘炅,张丽娟

(新疆医科大学第一附属医院感染性疾病中心,新疆 乌鲁木齐 830054)

目的：观察微小RNA-155(miRNA-155)在肝细胞癌(hepatocellular cancer，HCC)组织中的表达及其与临床病理特征和预后的关系。方法：应用实时定量反转录PCR检测77例HCC患者癌组织和癌旁组织中miRNA-155表达情况，并分析不同病理特征HCC患者间miRNA-155表达差异。Kaplan-Meier生存曲线分析miRNA-155和患者预后的关系。结果：miRNA-155在HCC癌组织中表达量显著高于癌旁组织(P<0.01)；高miRNA-155表达和HCC患者TMN分期(P<0.05)、微血管侵犯(P<0.05)密切相关。Kaplan-Meier生存分析显示，miRNA-15高表达的HCC患者平均生存期(16.07±1.52)个月，miRNA-155低表达患者为(28.25±1.38)个月，差异有统计学意义(P<0.05)。结论：miRNA-155在HCC患者中存在过表达，且与患者预后存在一定关系。

肝细胞癌；微小核糖核酸；临床病理特征；预后

肝细胞癌(hepatocellular cancer，HCC)是最常见恶性肿瘤之一，位居全球恶性肿瘤发病率第6位和死亡率第2位[1-2]。中国是肝癌新发病例最多的国家，数据显示，全国肝癌的发病率居第3位，死亡率仅次于肺癌[3]。HCC发生和发展涉及原位癌基因激活和/或抑癌基因失活，是一种病理机制复杂的多阶段、多步骤过程。目前临床诊断和评估肝脏炎症、慢性纤维化和癌变程度需结合抗原、抗体等血清标志物以及甲胎蛋白(AFP)等实验室相关指标，因此寻找特异性生物标记物是 HCC 早期诊断的研究热点[4-5]。微小RNAs(miRNAs)是一类长度为 19～25个核糖核苷酸的非编码单链小分子 RNA，参与机体多种生物学信号通路调节，与细胞周期活动、肿瘤的进入和转移有关[6]。随着对miRNAs的深入研究，发现其异常表达与HCC的发生发展密切相关，对肿瘤进展和生存预后判断具有潜在价值[7-8]。报道[9-10]称miRNA-155在一系列实体肿瘤中存在过表达，具有肿瘤诊断和预后判断的作用。但也有研究[8]表明，miRNA-155在黑色素瘤中表达降低，并能靶向抑制SKI蛋白的抑癌作用。目前为止，针对miRNA-155与HCC相关性的报道相对较少。本研究运用实时定量PCR技术检测HCC患者癌组织中miRNA-155的表达水平，并初步探讨其在肝癌预后中的诊断价值。

1 材料与方法

1.1 标本来源

收集2012年4月至2014年7月新疆医科大学第一附属医院收治的77例HCC患者的临床病理资料、手术切除癌组织和癌旁组织标本。患者入组标准：①既往乙型肝炎病毒(HBV)感染、肝硬化后进展为HCC;②符合NCCN临床实践指南：肝胆肿瘤[11]中肝癌根治手术指征；③术后病理组织确诊为HCC；④术后随访资料完整。排除标准：①合并丙型肝炎病毒(HCV)感染，或其他病毒性肝炎导致的HCC患者；②合并其他器官、系统恶性肿瘤患者。77例患者中男性59例，女性18例；年龄41～65岁，平均(53.21±7.05)岁；肿瘤TNM分期：Ⅰ期24例，Ⅱ期27例，Ⅲ～Ⅳ期26例。

1.2 方法

1.2.1 标本采集 分别收集患者癌组织标本和距离癌组织边缘>5 cm的癌旁组织标本，充分研磨后，每50 mg标本中加入1 mL裂解液，无水乙醇和氯仿处理后离心去杂质，-80℃保存备检。

1.2.2 细胞总RNA提取 按照RecoverALLTM总核酸提取成套盒(购自美国Ambion公司)说明书提取总RNA，并用Nano Drop ND-1000分光光度计测定RNA的含量和纯度。

1.2.3 逆转录和实施定量PCR 应用逆转录试剂盒(购自大连Takara公司)将总RNA 逆转录为cDNA。以cDNA为模板，根据实时PCR引物设计原则及miR-155序列设计miR-155实时 PCR引物。选择U6作为miR-155的内参基因(见表1)，定量PCR反应条件按照试剂盒说明书严格进行。每个样品均设置3个平行反应复孔，miR-155表达量用实时定量 PCR的CT均值来表示，相对定量用 2-ΔΔCt来计算。

表1 实时定量PCR使用引物列表

1.3 观察指标

对比HCC患者癌组织和癌旁组织中miRNA-155表达水平差异，并根据病理资料对HCC患者进行分类，探讨miRNA-155表达与病理特征之间的关系。收集患者术后随访资料，分析不同miRNA-155表达水平的HCC患者术后生存情况。

1.4 统计学分析

2 结果

2.1 癌组织和癌旁组织miRNA-155表达

HCC患者癌组织中miRNA-155平均表达水平为5.70(3.40,11.06)，癌旁组织miRNA-155平均表达水平为1.14(0.75, 2.21)，miRNA-155在HCC癌组织中表达水平显著高于癌旁组织，差异有统计学意义(P<0.01)。

2.2 miRNA-155表达与临床病理关系

以miRNA-155中位数作为临界值，将77例HCC患者分为低表达组(n=39)和高表达组(n=38)，结果显示，miRNA-155表达水平与TMN分期(P<0.05)、微血管侵犯(P<0.05)密切相关，而与性别、肿瘤分化程度、肿瘤最大径、肿瘤数目和术前AFP水平无明显关系(P>0.05)。见表2。

表2 miRNA-155表达与HCC患者临床病理特征的关系[n(%)]

病理特征例数高表达组(n=38)低表达组(n=39)t/χ2值P值性别 男5930(78.95)29(74.36) 女188(21.05)10(65.64)TMN分期 I～II5120(52.63)29(74.36) III～IV2618(47.36)10(25.64)肿瘤分化 低分化3114(36.84)17(43.59) 高、中分化4624(63.16)22(56.41)肿瘤最大径 ≤5cm3717(44.74)20(51.28) >5cm4021(55.26)19(48.72)肿瘤数目 单发4220(52.63)22(56.41) 多发3518(47.37)17(43.59)微血管侵犯 无5621(55.26)32(82.05) 有2117(44.74)7(17.95)术前AFP/(μg/L) ≤4004924(63.16)25(64.10) >4002814(36.84)14(73.68)0.226>0.053.926<0.050.364>0.050.330>0.050.110>0.054.037<0.050.007>0.05

2.3 miRNA-155表达水平和患者生存预后的关系

随访时间至2015年9月，Kaplan-Meier生存分析显示miRNA-155高表达患者平均生存时间为(16.07±1.52)个月，显著短于miRNA-155低表达组(28.25±1.38)个月，差异有统计学意义(P<0.01)，可见miRNA-155高表达患者的预后较差(图1)。

3 讨论

miRNA是一种非编码RNA，成熟的miRNA通过核酸序列互补识别特定目标mNRA,当miRNA和编码蛋白的mRNA3′-UTR完全配对时，能诱导靶mRNA的降解；而当miRNA和靶mRNA3′-UTR不能完全配对时，在转录过程抑制基因的翻译，从而抑制蛋白质合成并调控基因表达[12]。miRNA-155位于人染色体21q21非编码转录本B细胞整合簇(BIC)第3个外显子内，其表达水平受BIC的转录水平和miRNA加工等调控[13]。miRNA-155作为一种多功能miRNA，参与调控造血细胞和免疫细胞的发育分化。继Acunzo等[14]表明miRNA-155在慢性淋巴细胞白血病中表达异常之后，越来越多的试验表明miRNA-155在胰腺癌、乳腺癌、宫颈癌等实体恶性肿瘤中呈现高表达。本研究显示，HCC患者癌组织中miRNA-155表达水平较癌旁组织显著上调，表达水平和TMN分期(P<0.05)、微血管侵犯密(P<0.05)密切相关。同时，Kaplan-Meier生存分析显示，miRNA-155高表达患者预后较差，韩中博等[15]通过COX多因素模型分析也指出miRNA-155是影响患者肝癌移植术后生存的独立因素，但miRNA-155是否能作为HCC潜在的肿瘤标志物仍需进一步研究证明。

miRNA-155通过降低caspase-3的活性来抑制肿瘤细胞的凋亡，同时其异常表达也能造成肿瘤蛋白表达减少，抑制细胞周期[16]。miRNA-155还可能参与介导炎症反应相关的基因调节过程[17]，而炎症反应在肿瘤发生、发展、恶化、浸润和转移中同样扮演重要角色。傅春江等[18]也发现在肿瘤微环境的刺激下，肝肿瘤细胞的生物学行为和肿瘤细胞内miRNA表达谱均发生了变化，以miRNA-155改变最为显著。本研究中HCC患者有既往HBV感染、肝硬化病史，后续研究可以探讨miRNA-155在疾病进展不同阶段的表达情况。

综上所述，miRNA-155在肝细胞癌组织中存在过表达，且与患者预后存在一定关系，是一种潜在的肝癌诊断、治疗和预后判断的分子标志物。

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(学术编辑：刘凤君)

Expression of miRNA-155 in hepatocellular cancerous tissues and its relationship with clinical pathological characteristics and prognosis

ZHENG Rong-jiong,ZHANG Li-juan

(CenterforInfectiousDiseases,TheFirstAffiliatedHospitalofXinjiangMedicalUniversity,Urumchi830054,Xinjiang,China)

Objective：To observe the expression of micro-RNA-155 (miRNA-155) in tissues of hepatocellular cancer (HCC) and its relationship with clinical pathological characteristics and prognosis.Methods：Quantitative real-time reverse transcription polymerase chain reaction (PCR) was used to detect the expression of miRNA-155 in the cancerous tissues and para-cancerous tissues of 77 patients with HCC,and the difference of miRNA-155 expression in HCC patients with different pathological characteristics was analyzed. Kaplan-Meier survival curve was used to analyze the correlation between miRNA-155 and patients’ prognosis.Results：miRNA-155 expression was evidently higher in cancerous tissues than that in para-cancerous tissues of HCC(P<0.01).High expression of miRNA-155 was in close association with TMN staging (P<0.05) and microvascular invasion (P<0.05) in patients with HCC.Kaplan-Meier survival curve analysis showed that the average survival time was (16.07±1.52) months in HCC patients with high expression of miRNA-155 and (28.25±1.38) months in those with low expression of miRNA-155,and there was significant difference (P<0.05).Conclusion：MiRNA-155 over-expresses in patients with HCC and it has certain relationship with patients’ prognosis.

Hepatocellular cancer;Micro ribonucleic acid;Clinical pathological characteristics;Prognosis

10.3969/j.issn.1005-3697.2016.06.032

2016-07-12

郑嵘炅(1981-)，女，硕士，主治医师。E-mail: zhengrongjiong@163.com

时间：2017-1-3 22∶01

http://www.cnki.net/kcms/detail/51.1254.R.20170103.2201.064.html

1005-3697(2016)06-0891-03

R735.7

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