人脑胶质瘤不同病理分级标本中神经丛素1与细胞增殖抗原的阳性表达及临床意义

王子谦 赵 刚

(吉林大学第一医院神经外科，吉林 长春 130021)

·外科与麻醉·

人脑胶质瘤不同病理分级标本中神经丛素1与细胞增殖抗原的阳性表达及临床意义

王子谦 赵 刚

(吉林大学第一医院神经外科，吉林 长春 130021)

目的探讨人脑胶质瘤不同病理分级标本中神经丛素A1(plexinA1)和细胞增殖抗原(Ki-67)的阳性表达及临床意义。方法 选取50例脑胶质瘤患者本行常规苏木精-伊红染色(HE染色)。根据病理分级Ki-67分为A、B两组，其中A组21例(Ⅰ～Ⅱ级)，B组29例(Ⅲ～Ⅳ级)。采用免疫组织化学法对标本中神经丛素A1及Ki-67抗原的阳性表达情况进行检测。结果 神经丛素A1在A组中的阳性表达率为23.81%(5/21)，低于B组72.41%(21/29)(P<0.05)；Ki-67在A组中的阳性表达率为14.29%(3/21)，低于B组55.17%(16/29)(P<0.05)；神经丛素A1及Ki-67在人脑胶质瘤组织中的表达呈正相关性(P<0.05)。结论 对脑胶质瘤组织中神经丛素A1进行检测有利于评估患者的预后。人脑胶质瘤的发生及发展过程中Ki-67和神经丛素A1可能起到协同作用。

胶质瘤；病理分级；细胞增殖抗原；神经丛素A1

神经丛素A1是一种跨膜蛋白，具有多向潜在功能，为信号素的主要受体之一。神经丛素A1在免疫反应、心血管生成、胚胎发育及神经系统形成等方面发挥重要作用〔1〕。细胞增殖抗原(Ki-67)是恶性肿瘤研究中的热门生物指标，通过检测Ki-67能够观察恶性肿瘤的细胞增殖活性。研究发现，神经丛素A1与口腔癌、胃癌和舌癌等肿瘤的发生密切相关〔2〕，然而关于人脑胶质瘤方面的研究却少见报道。本研究对人脑胶质瘤不同病理分级标本中神经丛素A1和Ki-67的阳性表达及临床意义进行探讨。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2013年8月至2015年5月我院收治的50例脑胶质瘤患者，男28例，女22例，年龄(53.7±4.8)岁。对每例患者的肿瘤标本行常规苏木精-伊红染色(HE染色)。根据WHO脑肿瘤分类标准对肿瘤标本的恶性度进行分级，其中Ⅰ级8例，Ⅱ级13例，Ⅲ级19例，Ⅳ级10例，将Ⅰ～Ⅱ级划分为A组，Ⅲ～Ⅳ级划分为B组。A组室管膜瘤4例，星形细胞瘤11例，少支胶质瘤6例；B组混合性胶质瘤7例，脉络丛瘤2例，神经母细胞瘤13例，星形细胞瘤7例。

1.2 方法

1.2.1 试剂 SP-9001试剂盒(内含辣根酶标记链霉卵白素、封闭用正常山羊血清、内源性过氧化物酶阻断剂和生物素标记羊抗兔IgG)、兔抗人Ki-67多克隆抗体、DAB显色试剂盒、兔抗人神经丛素A1多克隆抗体，上述试剂盒均由北京中杉金桥生物技术有限公司提供。

1.2.2 免疫组织化学法 对收集冻存的50个脑胶质瘤标本进行解冻等处理，将石蜡块按厚度3 μm连续切片，将其放置在防脱载玻片上，采用浓度为0.1 mol/L的硫化铅冲洗3次，每次冲洗时间为5 min；于切片上滴加浓度为3%的过氧化氢溶液，室温下反应10 min，阻断内源性过氧化物酶的活性；硫化铅冲洗3次，每次5 min。室温下滴加正常山羊血清并封闭，反应时间为30 min；同时滴入相应一抗，4℃过夜；硫化铅冲洗3次，每次5 min。滴入辣根酶标记链霉卵白素，室温下反应15～25 min；滴加DAB显色，显微镜下观察显色时间，终止显色后采用蒸馏水冲洗，对比染色选用苏木精，脱水封固。阴性对照采用硫化铅代替一抗，阳性对照选取阳性对照片。

1.3 阳性的判定标准 细胞膜或细胞质上的神经丛素A1在显微镜下观察阳性细胞即是细胞质或细胞膜染色棕黄色的细胞。判定标准：随机观察高倍视野个数≥10个，阳性细胞占细胞总数比例<30%为阴性，≥30%为阳性。胞核上Ki-67通过高倍显微镜观察，随机选取视野个数≥10个，计算阳性细胞占同类细胞的比例。判定标准：(1)根据细胞显色对染色强度进行评分，无色：0分，浅黄色：1分，棕黄色：2分，棕褐色：3分。(2)根据阳性细胞占的比例评分，阴性0分，阳性细胞≤10%：1分，11%≤阳性细胞≤50%：2分，51%≤阳性细胞≤75%：3分，阳性细胞>75%：4分。每例染色积分为上述两项乘积，积分≥3分为阳性，积分<3分为阴性〔3〕。

1.4 统计学分析 应用SPSS18.0软件，计数资料组间比较采用χ2检验，相关性分析采用Pearson分析。

2 结 果

2.1 不同病理分级中神经丛素A1和Ki-67的表达 神经丛素A1在A组中的阳性表达率为23.81%，低于B组的72.41%(χ2=11.528,P<0.05)。Ki-67在A组中的阳性表达率为14.29%，低于B组的55.17%(χ2=8.642,P<0.05)。

2.2 神经丛素A1和Ki-67表达的相关性 Ki-67和神经丛素A1均阳性15例，均阴性21例，仅Ki-67阳性9例，仅神经素A1阳性5例。神经丛素A1及Ki-67在人脑胶质瘤组织中的表达呈正相关(r=9.736，P<0.05)。

3 讨 论

胶质细胞瘤是最常见的原发性中枢神经系统肿瘤，由于其以浸润的方式生长，因而采用手术治疗难以将其切除干净，术后复发率极高，患者预后情况较差。近年来，胶质瘤的治疗已经成为研究热点，主要表现在寻找新的治疗靶点〔4〕。目前，有学者研究了12种胶质瘤细胞株，结果显示神经丛素家族在7～9种胶质瘤细胞株中呈阳性表达，而神经丛素A1则在其中9种细胞株中呈阳性表达〔5〕。另有研究发现，神经丛素A1和多种肿瘤的发生密切相关〔6〕。有学者研究了胃癌组织中神经丛素A1的表达，结果发现神经丛素A1对促进肿瘤新生血管增生及细胞增殖方面可能起到重要作用〔7〕，然而目前有关神经丛素A1在肿瘤发生及发展过程中的具体作用机制尚未完全明确。

Ki-67是一种核抗原，能够反映增殖期细胞表达的特异性。由于Ki-67的半衰期短，因而在增殖周期后会迅速降解，相较于其他DNA聚合酶α、细胞增殖核抗原和溴脱氧尿嘧啶等胶质瘤增殖指标更能清晰地反映肿瘤细胞的恶性和增殖程度等情况〔8〕。Ki-67是恶性肿瘤研究中的热门生物指标，通过对其进行检测能够观察恶性肿瘤的细胞增殖活性。

本次研究表明胶质瘤中神经丛素A1的阳性表达率与其恶性程度有关，胶质瘤的恶性程度越低神经丛素A1的阳性表达率也越低，神经丛素A1及Ki-67在脑胶质瘤组织中的表达呈正相关。提示在胶质瘤的发展过程中两者可能起到协同作用，然而两者间的作用机制尚未明确。

1 王维军，杨 华.神经从素A1在人脑胶质瘤中的表达与意义〔J〕.中国微侵袭神经外科杂志，2015；20(3)：134-5.

2 Kei-ichi Katayama，Fumiyasu Imai，Fumikazu Suto，etal.Deletion of Sema3a or plexinA1/plexinA3 causes defects in sensory afferent projections of statoacoustic ganglion neurons〔J〕.PLoS One，2013；8(8)：e72512.

3 王维军，杨 华，刘 沣，等.神经丛素A1和细胞增殖抗原在胶质瘤中的表达及其临床意义〔J〕.肿瘤研究与临床，2015；27(5)：336-8.

4 Valdés PA，Jacobs J，Harris BT，etal.Quantitative fluorescence using 5-aminolevulinic acid-induced protoporphyrin Ⅸ biomarker as a surgical adjunct in low-grade glioma surgery〔J〕.J Neurosurg，2015；123(3)：771-80.

5 Céline Delloye-Bourgeois，Arnaud Jacquier，Camille Charoy，etal.PlexinA1 is a new slit receptor and mediates axon guidance function of slit c-terminal fragments〔J〕.Nat Neurosci，2015；18(1)：36-45.

6 丛 宇，包倪荣，许 斌.信号素家族在免疫系统中作用的研究进展〔J〕.中国肿瘤生物治疗杂志，2015；22(4)：528-35.

7 赵向阳，陈 凛，许 倩，等.Plexin A1在胃癌中的表达及其与肿瘤细胞增殖和血管生成的关系〔J〕.中国胃肠外科杂志，2007；10(3)：265-8.

8 徐文鑫，杨俊荣，王秋实，等.Ki-67、p53、Survivin在食管癌及癌前病变组织中的表达意义〔J〕.中国医师杂志，2015；17(2)：224-7.

〔2016-05-04修回〕

(编辑 郭 菁)

赵 刚(1958-)，男，主任医师，博士生导师，主要从事神经肿瘤的基础和临床研究。

王子谦(1990-)，男，在读硕士，主要从事神经肿瘤的基础和临床研究。

R651.1

A

1005-9202(2016)24-6193-02；

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.24.070