P38 MAPK通路在老年卵巢癌化疗药物耐药性产生中的作用

王素琴　安红军　徐胜东　常　青

(济源市人民医院妇科,河南　济源　459000)

P38 MAPK通路在老年卵巢癌化疗药物耐药性产生中的作用

王素琴安红军1徐胜东1常青2

(济源市人民医院妇科,河南济源459000)

〔摘要〕目的研究P38 MAPK通路在老年卵巢癌化疗药物耐药性产生中的作用，对可能的机制进行探讨。方法采用免疫组化法测定P38 MAPK、凋亡抑制蛋白 Survivin、耐药相关蛋白切除修复交叉互补基因 1(ERCC1)，肺耐药相关蛋白(LRP)，谷胱甘肽转移酶(GST-π)在25例老年原发性卵巢上皮癌和32例老年复发性卵巢上皮癌治疗前后标本中的表达情况。结果P38 MAPK在原发性卵巢癌中的表达显著高于复发性卵巢上皮癌(P<0.01)，而Survivin、ERCC1、GST-π的表达则明显低于复发性卵巢癌组(P<0.01)，P38 MAPK 与 Survivin、ERCC1、LRP 之间存在负相关性(P<0.01)，但与 GST-π 之间无相关性(P>0.05)。结论化疗抑制了P38 MAPK信号通路，增加了Survivin、ERCC1、GST-π的表达，进一步导致了耐药性的发生，P38 MAPK信号通路开通可能是改善卵巢癌化疗效果的理论途径。

〔关键词〕P38 MAPK通路；卵巢癌；耐药性

卵巢癌是威胁女性生命的恶性肿瘤之一，由于缺乏有效的早期诊断，死亡率居女性肿瘤首位〔1〕。P38 MAPK 是丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的重要亚家族成员，在应激条件下，胞质内P38 可转入核内，进行磷酸化并调控相关基因表达。有研究提示，P38 MAPK受抑制可能是以顺铂为主的化疗药物耐药的原因〔2〕。本文对P38 MAPK 通路受抑制对老年卵巢癌化疗药物耐药性产生的作用进行实验设计，探讨可能的机制。

1材料与方法

1.1一般资料病例均来自于济源市人民医院妇科收治并经宁夏医科大学同一病理专家确认的卵巢上皮癌病例57例，患者均为老年女性，年龄55～65岁，平均(55.3±4.6)岁。其中原发性卵巢上皮癌25例，术前未行放化疗治疗，患者均经过病理确诊为晚期卵巢上皮癌，需行手术治疗，术后病理证实与术前诊断一致；复发性卵巢上皮癌32例，均行TP或CP方案化疗6～8个疗程达到临床缓解，停药半年后肿瘤再次复发。

1.2研究方法及材料检测材料包括鼠抗人磷酸化P38多克隆抗体(Santa Cruz 公司)，兔抗人Survivin多克隆抗体(Santa Cruz 公司)，兔抗人耐药相关蛋白切除修复交叉互补基因1(ERCC1)多克隆抗体(Santa Cruz 公司)，鼠抗人肺耐药相关蛋白(LRP)多克隆抗体(北京中杉生物技术有限公司)，鼠抗人谷胱甘肽转移酶(GST-π)多克隆抗体(北京中杉生物技术有限公司)，免疫组织化学 SP 试剂盒(北京中杉生物技术有限公司)，DAB 显色试剂盒(北京中杉生物技术有限公司)。 P-P38，Survivin，GST-π，ERCC1 及 LRP 采用免疫组织化学分析 SP 法，DAB 显色，PBS 代替一抗作阴性对照，相同染色条件下的已知阳性片作为阳性对照。400倍光镜下观察切片。检测标准和程序严格按照试剂说明书进行。

1.3数据分析采用SPSS18.0软件行χ2检验。

2结果

2.1P38 MAPK的表达情况25例原发性卵巢上皮癌中P38 MAPK阳性表达24例(96.0%)，32例复发性卵巢癌患者中阳性表达13例(40.6%)，与原发性卵巢上皮癌患者比较差异有统计学意义(P<0.01)。

2.2Survivin、GST-π、ERCC1 及 LRP的表达情况25例原发性卵巢上皮癌中 Survivin阳性表达18例(72.0%)，ERCC1阳性表达17例(68.0%)，LRP阳性表达19例(76.0%)，GST-π阳性表达16例(64.0%)明显低于复发性卵巢癌患者中各蛋白的阳性表达(均为100%，均P<0.01)。

2.3P38 MAPK与Survivin、GST-π、ERCC1及LRP表达的相关性通过对P38 MAPK与 Survivin、ERCC1、LRP、GST-π表达相关性的分析，结果显示P38 MAPK与Survivin、ERCC1、LRP之间存在负相关性(r=-0.388、-0.399、-0.395，均P<0.01)，但与 GST-π 之间无相关性(r=-0.069，P>0.05)。

3讨论

研究显示，肿瘤对化疗药物产生耐药性是导致肿瘤化疗失败或疗效差的主要原因，可能存在交叉耐药性〔3〕。有学者明确指出，先期化疗耐药性的产生可导致后期治疗无效〔4〕。研究认为化疗药物产生耐药性主要有三个途径：(1)药物外排增加(如MRP)，不能使细胞内药物浓度达到有效浓度；(2)药物失活增加(如GST)，药物代谢失活；(3)DNA损伤修复发挥作用〔5〕。国内外多项研究显示，p38 MAPK通路被抑制可能为顺铂等化疗药物发生机体耐药的原因〔6〕。Losa 和Mansouri 等〔7，8〕的研究也对此有所提示。项涛等〔9〕报道上调P38可以提高A2780多肿瘤细胞对顺铂等化疗药物的敏感性，这也佐证了上述国外研究。

MAPKs是胞内信号传导的重要通路，是多个信号传递的交点和共同通路，在细胞质内分布广泛，将细胞外刺激信号传递至细胞核内，影响着细胞增殖、分化和应激的调控〔10〕。三级激酶级联传递信号是该家族信号传导的共同特点。P38是MAPK家族中重要的一员，具有α，β，δ和γ四个亚型，其中P38α具有调节细胞增殖、生存、分化的作用。近些年，对P38介入炎性反应而发病的研究较为广泛，研究显示其具有细胞免疫调节、炎症反应调控的重要作用，在生物学刺激下经过磷酸化等激活，可在细胞核等重要部位发挥作用〔11〕。本研究结果显示，P38 MAPK通路被抑制可增加Survivin、ERCC1、LRP、GST-π的阳性表达，促进了耐药性的增加。根据后期的随访，也发现P38 MAPK与卵巢上皮癌的预后密切相关，需要进一步研究。综上所述，化疗抑制了P38 MAPK信号通路，但增加了Survivin、ERCC1、GST-π的表达，导致了耐药性的发生，P38 MAPK信号通路的重新开通可能是改善卵巢癌化疗效果的理论途径。

4参考文献

1Bristow RE，Tomacruz RS，Amstrong DK，etal.Survival effect of maximal cytoreductive surgery for advanced ovarian carcinoma during the platinumera：a meta-analysis〔J〕.Clin Oncol，2002；20(5)：1248.

2Coukos G，Rubin SC.Chemotherapy resistane in ovarian cancer：new molecular perspectives〔J〕.Obst Gynecol，1998；91(5)：783-92.

3焦今文，王蕾，温放，等.p38 MAPK在不同疗程化疗后卵巢癌中的表达及临床意义〔J〕.中国现代医学杂志，2011；15：1828-34,1838.

4Gershenson D.Treatment of advanced ovarian cancer〔M〕.Alexandria，VA：ASCO Educational Book，2000：130.

5Sun P，Yoshizuka N，New L，etal.PRAK is essential forras-induced senescence and tumor suppression〔J〕.Cell，2007；128：295-308.

6Wong SH，Shih RS，Schoene NW，etal.Zinc-induced G2/M blockage is p53 and p21 dependent in normal human bronchial epithelial cells〔J〕.Am J Physiol Cell Physiol，2008;294：C1342-9.

7Losa JH，Paradacobo C，Viniegra JG，etal.Role of the P38MAPK pathway in cisplatin-based therapy〔J〕.Oncogene，2003;22(26)：3998-4006.

8Mansouri A，Ridgway LD，Korapati AL，etal.Sustained activation of JNK/p38MAPK pathways in response to cisplatin leads to Fas ligand induction and cell death in ovarian carcinoma cells〔J〕.J Biol Chem，2003;278(21)：19245-56.

9项涛，夏曦，王世宣，等.上调 p38 表达提高卵巢癌多细胞球体顺铂敏感性〔J〕.肿瘤防治研究，2008;35：157-60.

10Rahman L.Oxidativ stress in pathogenesis of chronic obstructive pulmonary disease：cellular and molecular mechanisms〔J〕.Cell Biochem Biophys，2005；43(1)：167-88.

11黄翠萍，杨和平，张珍祥，等.p38蛋白激酶对支气管哮喘大鼠Th2类细胞因子表达的调控〔J〕.中国病理生理杂志，2006；22(2)：311-3.

〔2015-09-24修回〕

(编辑郭菁)

基金项目：国家自然科学基金项目(No.81460230)

通讯作者：常青(1974-)，男，博士，副教授，主要从事基础医学教学及研究工作。

〔中图分类号〕R737.9

〔文献标识码〕A

〔文章编号〕1005-9202(2016)11-2601-02；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.11.014

1济源市妇幼保健院2宁夏医科大学基础医学院

第一作者：王素琴(1975-)，女，副主任医师，主要从事妇产科临床及科研工作。