邹孝顺袁 芳
(1.重庆市潼南区宝龙镇畜牧兽医站,重庆 402681;2.重庆市潼南区小渡镇畜牧兽医站,重庆 402681)
重庆板角山羊超排效果的影响因素
邹孝顺1袁 芳2
(1.重庆市潼南区宝龙镇畜牧兽医站,重庆 402681;2.重庆市潼南区小渡镇畜牧兽医站,重庆 402681)
自从FSH制品面世以来,许多作者做了大量关于FSH和PMSG (eCG)超排效果的比较研究。这些研究结果表明,在排卵率、受精率和高质量胚胎的产量方面,FSH超排效果比PMSG好。大多数情况下使用eCG或之后再用eCG抗体处理难以取得预期反应,这可能与山羊降解eCG较快有关,其半衰期仅为10~15h,这要比在牛短许多。山羊超排所用的FSH通常为猪FSH(pFSH),其效果要比eCG好,主要原因可能与其中所含的LH有关。对纯化的pFSH或者含40%及80%的纯化的pLH在山羊超排结果的比较发现,含40%LH时效果最好,超排效率较高,可移植胚胎数量也高。用纯化的FSH添加30%、40%和50%的pLH进行超排,结果仍表明FSH 和LH比例高时超排反应好,说明在山羊的超排中如果添加40%的LH效果最好。
制剂的来源不同,超数排卵效果亦有差异。用Ovagen(羊提纯FSH)超排绵羊所得可移植胚胎比用Folltropin(猪提纯FSH)多。并且,用国产激素同样可获得类似国外激素的超排效果,不同厂家不同批次间FSH超排效果无显著差异。
在山羊超排研究初期,撤栓发情后采用本交或子宫颈输精法。这两种配种方式对供体的刺激小,不会对供体造成损伤。但有研究发现,同期化或超排处理能改变子宫环境,使精子通过子宫颈困难,降低了受精率。原因可能与同期发情处理后精子的转运发生了改变有关,也可能与输精和排卵的同期化程度较差有关。前者可通过子宫内腹腔镜输精得到解决,后者可通过发情后,在输精前后用GnRH进行同期排卵处理。
本交、子宫颈口输精法、腹腔镜输精法各有其优缺点。尽管本交及子宫颈口输精法对供体受精率较低,但对供体损伤小,有利于供体重复利用并降低术后对供体繁殖力的影响。腹腔镜法受精率高,但会对供体造成一种刺激及损伤,输精后不久即进行手术法冲卵,连续刺激对供体重复利用及术后繁殖力也有一定负面影响。因此,哪种方式更加经济合理还有待进一步研究。
不同品种的山羊对同种、同剂量激素反应不同,超排效果也不同。即使同一品种、相同年龄的动物对激素的敏感性亦有差异。有试验证实,从超数排卵的效果看,个体营养水平、体重之间的差异不很明显,但个体对激素反应的敏感性存在着极大的差异(4~41枚),超排效果与可用胚之间的差异也极显著,达100%~0%(8/8~0/12)。
不同年龄的山羊对同种同剂量激素反应不同,超排效果也不同,相关研究表示,2.5~4.5岁供体母羊冲卵时,可用胚随年龄增长呈上长趋势,且年龄无显著差异,而5.5岁供体羊冲卵数、可用胚数均低于2.5岁、3.5岁、4.5岁年龄组的结果。
即使同一品种、同一超排方法,供体超排反应也有极大差异,大量的研究表明,FSH处理后的超排反应在很大程度上与处理开始时卵巢上卵泡的数量有关,如果存在有优势卵泡,则会使成熟卵泡的数量减少,可移植胚胎的数量也相应减少。近年来由于内窥镜和超声扫描仪在繁殖学上的应用,人们发现外源FSH处理后的排卵反应与卵巢上小腔卵泡(2-3mm)的数量有关,而回收可移植用胚胎的数量又受到超排处理时卵巢上的大卵泡(>6mm)的不利影响。
山羊季节性多次发情动物,一般来说,山羊的发情周期与绵羊基本相同,主要在春秋两季,且以秋季发情旺盛,在每个发情季节有多个发情周期。在发情季节,卵巢处于活动状态,呈现周期性卵泡发育。因此当供体处于发情及排卵率最高的季节时,超排效果最佳。相关研究表明,季节对超排效果影响差异显著,平均每只获可用胚分别为19.4±12.14枚和14.85±9.17枚。但也有研究显示,季节对超排效果无显著影响,只要掌握好超排方法及剂量,无论繁殖或非繁殖季节均可获得较好的超排效果。超排效果还与母本的营养状态相关,体况太差会降低外源激素的有效性。一些研究表明,波尔山羊体况的好与坏对超排效果影响差异显著,平均获得可用胚数量为16.80±8.75枚和13.32±6.53枚。而有部分则认为造成品种间超排效果差异的主要因素是供体羊在营养水平上的差异,合理营养供给和科学管理可获得大量优质胚胎。在黄体酮处理期间,供体饲养水平过高会抑制黄体酮循环,从而减少活胚的产生。实践证明,合理的营养供给和科学的管理不仅是获得大量优质胚胎的基础,也是保证胚胎移植羔羊正常生长发育所必需的条件之一。
回收超排所产生的卵子(或胚胎)所用的手术法需要将生殖道牵引出体外,这容易引起术后粘连导致重复超排胚胎产量下降。激素处理不是降低重复超排效果的主要因素。大量研究已经得到证实,重复超排的波尔山羊也具有较好的超排效果。
重复用pFSH处理会导致山羊出现免疫反应,从而使超排反应的效果降低,但这种情况在牛不会出现,主要原因可能是由于pFSH和牛的FSH同源性更高。因此在同一供体多次回收胚胎时,建议采用山羊或绵羊FSH制剂。
超排羊在第2次PGF2α处理后,由于母羊个体间体内受体水平不一,发情出现的时间有较大的差异(12h左右),若以PG处理时间来推算取卵时间极易造成取卵偏早或过迟,而以母羊发情初始肌注LRH的时间来推算取卵时间获得了满意的结果。
目前采用的山羊超排方法大多费时且昂贵,而且反应的时间长短不一。通过注射抑制素a链片段免疫山羊是目前仍处于研究阶段的一种超排方法。研究表明,间隔4周注射2次可使排卵数比对照动物增加3倍左右,而且只要有抗体效价存在,则可对免疫山羊反复进行配种和冲胚。但采用抑制素免疫超排时,主要问题是黄体的提早退化率高,面且通常会出现大量的未排卵卵泡。