推拿疗法对衰老家兔皮肤组织超氧化物歧化酶、丙二醛含量的影响

王宇峰　商强强　丛德毓　楚云杰

(长春中医药大学附属医院，吉林　长春　130021)



推拿疗法对衰老家兔皮肤组织超氧化物歧化酶、丙二醛含量的影响

王宇峰商强强丛德毓楚云杰

(长春中医药大学附属医院，吉林长春130021)

摘要〔〕目的观察推拿疗法对衰老家兔皮肤组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量的影响。方法无特定病原体(SPF)级家兔48只随机分为空白组、模型组和推拿组，每组16只。推拿组施以推拿治疗21 d，其余两组不予特殊处置。分别在治疗前后取家兔皮肤组织，采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定SOD、MDA含量。结果治疗后与模型组比较，推拿组SOD含量明显高(P<0.01)，MDA含量明显降低(P<0.05)。结论推拿疗法可通过调节兔皮肤组织中SOD、MDA的含量，以达到抗御皮肤衰老的作用。

关键词〔〕推拿；皮肤；衰老；超氧化物歧化酶；丙二醛

皮肤是人体最大的器官，具有感受刺激、排泄汗液、保护身体等作用。由于皮肤经常暴露于外部环境中，易于衰老退化。推拿疗法是抗御皮肤衰老的有效治法，在美容、保健领域具有广泛的应用。本研究观察推拿疗法对衰老家兔皮肤组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量的影响。

1材料与方法

1.1实验动物及分组吉林大学动物实验中心无特定病原体(SPF)级家兔48只，体重2.0～2.5 kg，雌性〔合格证：SCXK-(吉)2007-0004〕。通过随机数字表法，将家兔随机分为空白组、模型组和推拿组，每组16只，同等环境下正常喂养。

1.2主要实验仪器与试剂Lambda 25紫外/可见分光光度计(美国PerkinElmer公司)，Σ960型全自动酶标仪(美国Metertech公司)，GS-15R低温高速离心机(美国Beckman公司)，T-500型电子天平(美国G&G公司)，乙酰苯肼(APH，上海试剂三厂)，SOD试剂盒(南京建成生物工程研究所)，MDA试剂盒(南京建成生物工程研究所)。

1.3动物造模取模型组、推拿组家兔，采用APH皮下注射法建立亚急性衰老模型：2%APH生理盐水注射液皮下注射，第1天注射5 ml·kg-1·只-1，第4、7天注射2.5 ml·kg-1·只-1。在同时间段，空白组皮下注射等量生理盐水。

1.4干预方法推拿组在造模成功24 h后，予推拿治疗：①家兔俯卧位，由上至下轻揉背部膀胱经2 min，推背部膀胱经第1、2侧线2 min，由下至上捏脊9次，小鱼际直擦背部并以透热为度。②家兔仰卧位，摩腹5 min，点按中脘、天枢(双)、关元穴各1 min。1次/d，连续21 d。模型组和空白组不予特殊处置。

1.5标本采集与测定在第1次治疗前和最后1次治疗后，各组分别处死家兔8只，取背部皮肤组织3 cm×3 cm。预冷生理盐水漂洗，除去皮下脂肪和其他结缔组织，滤纸拭干，用肌肉均浆器4℃搅拌，30 s/次，间隔15 s/次，共搅拌3次制备皮肤匀浆；加入含有0.4 mmol/L乙二胺四乙酸 (EDTA)，0.4 mmol/L NaN3，0.004 mmol/L苯甲基磺酰氨(PMSF)和2% Iodoacetamide的磷酸盐缓冲液(PBS)10 ml；4℃，12 000 r/min离心，取上清液；用含2%Triton X-100 的PBS缓冲液15 ml重悬后再次离心，取上清液备用。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测SOD、MDA的表达水平，操作按试剂盒说明书进行。

1.6统计方法应用SPSS18.0统计软件进行t检验。

2结果

治疗后，推拿组皮肤组织中SOD含量明显高于模型组，MDA含量明显低于模型组(P<0.05)；推拿组治疗前后的组内比较，有统计学意义(P<0.05)，见表1。

组别SOD(U/ml)治疗前治疗后MDA(mmol/ml)治疗前治疗后空白组168.2350±2.0021168.8213±1.52762.3475±0.12852.3588±0.1441模型组164.9663±2.89742)165.3375±3.06292.9650±0.28202)2.9263±0.2531推拿组165.4675±1.70351)167.5588±1.43673)5)2.8775±0.23711)2.2775±0.11314)6)

与空白组比较：1)P<0.05，2)P<0.01；与模型组比较：3)P<0.05，4)P<0.01；与治疗前比较：5)P<0.05，6)P<0.01

第一作者：王宇峰(1981-)，男，主治医师，博士，主要从事推拿手法与效应机制研究。

3讨论

人体的皮肤组织经常接受紫外线、风吹、烟雾、化学物质等有害刺激，容易出现皮肤粗糙、皱纹增加、色素沉着、血管扩张等衰老改变〔1〕，对人们的生活质量和心理均会带来一定程度的影响。衰老的自由基学说认为在多种因素的作用下，机体产生过多的自由基，对机体内的蛋白质、核酸、脂质等产生氧化损伤导致机体衰老〔2，3〕。MDA是脂质过氧化最重要的产物之一，可直接损伤生物大分子及细胞膜，是导致机体衰老的重要因素〔4〕，体内MDA的含量可以间接反映自由基对机体损伤的程度。SOD是体内重要的氧化自由基清除剂，具有重要的抗氧化作用，SOD的表达水平可以间接反映机体清除氧化自由基的能力〔5〕。中医学的推拿〔6〕、针灸疗法〔7〕等疗法具有良好的抗衰老的作用。

参考文献4

1Helfrich YR, Sachs DL, Voorhees JJ.Overview of skin aging and photoaging〔J〕.Dermatol Nurs,2008;20(3):177-83.

2Labat-Robert J，Robert L.Longevity and aging.Role of free radicals and xanthine oxidase.A review〔J〕.Pathol Biol (Paris)，2014；62(2)：61-6.

3Kumar H，Lim HW，More SV，etal.The role of free radicals in the aging brain and Parkinson′s disease：convergence and parallelism〔J〕.Int J Mol Sci，2012；13(8)：10478-504.

4李超彦，周媛媛，辛庆锋，等.黄精多糖对自然更年期大鼠超氧化物歧化酶、丙二醛及血脂的影响〔J〕.中国老年学杂志，2013；33(24)：6215-6.

5张笑天，郑晓英.氧化自由基清除剂超氧化物歧化酶与疾病〔J〕.中国公共卫生，2014；30(10)：1349-52.

6王宇峰，丛德毓，高辉，等.推拿疗法对亚急性衰老家兔谷胱甘肽过氧化物酶、乳酸脱氢酶表达水平的影响〔J〕.中国老年学杂志，2014；34(22)：6433-4.

7姜艳玲，李野.针灸抗衰老机制研究〔J〕.长春中医药大学学报，2012；28(4)：632-3.

〔2014-11-17修回〕

(编辑苑云杰)

通讯作者：楚云杰(1965-)，男，副主任医师，硕士生导师，主要从事推拿临床与技术规范化研究。

基金项目：吉林省自然科学基金项目(No.201215153)

中图分类号〔〕R244.1〔

文献标识码〕A〔

文章编号〕1005-9202(2015)23-6671-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2015.23.012