滇重楼须根中的化学成分*



滇重楼须根中的化学成分*

文彦诗，耿圆圆，王军民，华燕

(西南林业大学，云南昆明650224)

摘要：为研究滇重楼须根中的化学成分，通过D101大孔树脂、硅胶柱层析、反相硅胶(Rp-18)、Sephadex LH-20和半制备HPLC等多种分离方法，对滇重楼干燥须根的乙醇提取物进行了化学成分研究。根据现代波谱学(NMR和质谱MS)技术，从中分离并鉴定了1个三萜，1个黄酮和2个甾体皂苷化合物，它们的结构分别鉴定为乌索酸(1)，三裂鼠尾草素(2)，重楼皂苷Ⅴ(3)，重楼皂苷Ⅵ(4)。其中，化合物1和2为首次从该属植物中分离得到。

关键词：重楼属；滇重楼；须根；化学成分

滇重楼(Parispolyphyllavar.yunnanensis)隶属于百合科(Liliaceae)重楼属(Paris)植物，为多年生草本。其根茎(药用部位)在中国有着悠久的药用历史，是一种具有很高药用价值的传统中药。其具有清热解毒、消肿止痛和熄风定惊的功效，常用于疗疮痈肿、咽喉肿痛、蛇虫咬伤、跌扑伤痛和惊风抽搐[1]。重楼属植物全世界共有24种和10变种，主要分布于欧亚大陆的热带及温带地区，在中国有19种和10变种，主要分布于云南、贵州、四川等省[2]。目前，从本属植物中报道的主要成分为甾体皂苷[3]、蜕皮激素[4]和三萜类[5]等化合物。同时药理活性研究表明，这些化合物具有多方面的生物活性，如抗癌[6～8]、抗生育[9]、抗炎[10]和止血[11]等。由于近年来对滇重楼根茎药用需求量越来越大，加上长期的滥采滥挖，已使该植物资源严重枯竭。由于滇重楼地上部分(非药用部位)也含有大量的甾体皂苷类化合物[12]，而滇重楼的须根部位化学成分方面的研究未见报道。为了充分利用该植物资源，对采自云南景东地区滇重楼的须根部分进行了化学成分的研究，从中分离得到1个三萜，乌索酸(1)，1个黄酮，三裂鼠尾草素(2)，以及2个螺甾烷型甾体皂苷类型的化合物，重楼皂苷Ⅴ(3)和重楼皂苷Ⅵ(4)。其中，化合物1和2为首次从该属植物中分离得到。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1实验材料

滇重楼干燥须根部分5.0 kg。药材样品由本课题组于2013年10月采自云南省景东地区，由中国科学院昆明植物研究所陈昌祥研究员鉴定，标本保存在中国科学院昆明植物研究所植物化学与西部植物资源持续利用国家重点实验室。

1.1.2主要仪器和试剂

1D NMR谱用Avance III 600兆超导核磁共振仪测定，以TMS为内标，化学位移δ用Hz表示，耦合常数J用Hz表示；MS由Bruker HTC/Esquire spectrometer质谱仪测定；旋转蒸发仪(瑞士步琪)；反相色谱用Bruker AM-681制备型中压液相色谱；分析和半制备用Agilent 1100高效液相色谱仪，半制备色谱柱为Agilent公司的ZORBAX SB-C18反相柱。薄层层析硅胶板GF254板和柱层析硅胶(80～100目，200～300目，300～400目及硅胶H)均为青岛海洋化工厂产品；凝胶Sephadex LH-20(Amershm生科公司)；反相填充材料Rp-18(40～60 μm,Merck公司产品)。

氯仿(工业纯重蒸)；甲醇(工业纯重蒸)；纯净水(娃哈哈公司)；乙腈(色谱纯)。10 %硫酸-乙醇溶液(v/v)。

1.2化学成分的提取分离

滇重楼干燥须根药材5.0 kg，粉碎后用75 %的乙醇回流提取3次(3 h，2 h和2 h)。合并提取液并减压浓缩回收乙醇，得到浸膏697.2 g。

浸膏用温水溶解后，经D101大孔吸附树脂，依次用乙醇-水(20 %，45 %，70 %和95 %)依次洗脱。70 %的乙醇洗脱部分减压浓缩得到220 g粗品。后用300 g(80～100目)硅胶拌样，用2.5 kg硅胶(200～300目)干法装柱，用氯仿-甲醇(5︰1→1︰1)梯度洗脱，TLC检测后合并得到2个组分(Fr.1和2)。

Fr.1(102 g)部分取5 g经硅胶柱层析(氯仿-甲醇，4︰1→2︰1)洗脱，TLC检测后合并得到2个组分Fr.1-1(4 g)和Fr.1-2(1 g)。

Fr.1-1(4 g)经Rp-18(甲醇-水，20︰80→80︰20)梯度洗脱并经Sephadex LH-20(氯仿-甲醇，1︰1)纯化得到化合物1(26 mg)。Fr.1-2(1 g)部分经硅胶柱层析(氯仿-甲醇，4︰1→2︰1)洗脱后经Sephadex LH-20(氯仿-甲醇，1︰1)纯化得到化合物2(12 mg)。

Fr.2(100 g)部分取5 g经硅胶柱层析(氯仿-甲醇，5︰1→1︰1)洗脱，TLC检测后合并得到2个组分Fr.2-1(2 g)和Fr.2-2(2 g)。

Fr.2-1(2 g)经Rp-18(甲醇-水，35︰65→90︰10)梯度洗脱和半制备HPLC纯化后得到化合物3(16 mg)。Fr.2-2(2 g)部分经硅胶柱层析(氯仿-甲醇，5︰1→0︰1)洗脱和半制备HPLC纯化后得到化合物4(10 mg)。

2结果与分析

从滇重楼须根中分离得到4个化合物，其化学结构见图1。

化合物1白色无定形粉末；分子式：C30H48O3；ESI-MSm/z:457 [M+H]+；1H-NMR(Pyridine-d5,150 MHz)data:δ5.44(1H,dd,J= 3.4,3.5 Hz,H-12)，1.20(3H,s,Me-23),1.26(3H,s,Me-27),0.99(3H,s,Me-25),1.05(3H,s,Me-30),0.96(3H,d,J= 6.8Hz,Me-29),0.92(3H,s,Me-26),0.91(3H,d,J=6.1Hz,Me-24)。13C-NMR(Pridine-d5,150 MHz)data:δ179.8(s,C-28),139.1(d,C-13),125.9(d,C-12),78.0(d,C-3),56.1(d,C-5)，53.8(d,C-18),48.3(d,C-9),48.3(q,C-17),42.7(q,C-14),40.2(q,C-8),39.7(s,C-1),114.0(d,C-19),39.7(d,C-20),39.6(q,C-4),39.2(t,C-21),37.3(t,C-22),37.1(q,C-10),33.4(t,C-7),30.9(t,C-21),75.4(q,C-23),28.7(t,C-15),28.5(t,C-2),24.8(t,C-16),24.8(t,C-16),23.8(q,Me-27),23.8(t,C-11),21.3(q,Me-30),18.6(t,C-6),17.4(q,Me-29),17.3(q,Me-26),16.4(q,Me-24),15.5(q,Me-25)。该化合物数据与文献[3]报道一致,因此化合物1的结构鉴定为ursolic acid [3-羟基-(3β)-乌索-12-烯-28-酸乌索酸]。

化合物2淡黄色无定形粉末；分子式：C18H16O6；ESI-MSm/z:329 [M+H]+；1H-NMR(Pyridine-d5,150 MHz)data:δ12.7(1H,br s,HO-5),8.07(2H,d,J= 8.8Hz,H-2′,H-6′),7.12(2H,d,J= 9.0 Hz,H-3′,H-5′),6.91(1H,s,H-8),6.91(1H,s,H-3),3.91(3H,s,7-OMe),3.82(3H,s,4′-OMe),3.73(3H,s,6-OMe)；13C-NMR(Pyridine-d5,150 MHz)data:δ183.0(s,C-4),164.7(s,C-2),162.7(s,C-4′),159.2(s,C-7),153.3(s,C-5),152.6(s，C-9),133.0(s,C-6),128.8(s,C-2′,C-6′),123.2(d，C-1′),115.4(d,C-3′,C-5′),103.6(s，C-10),103.6(s，C-3),91.4(s，C-8),60.4(q，6-OMe),56.2(q，7-OMe),55.6(q，4′-OMe)。该化合物数据与文献[13]报道一致,因此化合物2结构确定为salvigenin(5-羟基-4′,6,7-三甲氧基-1-笨并吡喃-4-酮)。

图1　化合物1-4的化学结构

化合物3白色无定形粉末；分子式：C39H62O12；ESI-MS:m/z= 723 [M+H]+，1H-NMR(Pyridine-d5，150 MHz)data:δ6.22(1H,s,H-Rha-1″),5.32(1H,m,H-6),4.51(1H,s,H-Glc-1′),1.20(3H,d,J=5.9Hz,H-Rha-6″),1.22(3H,d,J=6.9Hz,H-21),1.02(3H,s,H-19),0.79(3H,s,H-18),0.70(3H,d,J=3.6Hz),13C-NMRDEPT(Pyridine-d5,150 MHz)δ:140.6(s,C-5),121.5(d,C-6),109.6(s,C-22),102.1(d，Rha-C-1″),100.0(d，Glc-C-1′),62.3(d，C-17),81.6(s，C-16),73.0(d，Rha-C-2″),73.9(d，Glc-C-2′),78.0(d，Glc-C-4′),74.8(d，Rha-C-4″),72.4(d,Rha-C-3″),69.8(d,Rha-C-5″),66.5(t，C-26),61.4(d,Glc-C-6′),53.4(s，C-14),50.8(s，C-9),45.6(s，C-13),45.2(d，C-20),39.2(t，C-4),37.9(t，C-1),37.5(s，C-10),32.6(d，C-7),32.5(t，C-8),32.3(t，C-12,C-15),32.0(t，C-23),31.0(d，C-25),30.6(d，C-2),29.1(t，C-24),21.3(C-11),19.8(q，C-19),19.2(d,Rha-C-6″),17.1(q，C-27),17.5(q，C-18),9.8(q，C-21)。化合物3与文献[4]所报道化合物重楼皂苷Ⅴ谱数据基本一致，故化合物3的结构鉴定为:薯蓣皂苷元3-O-α-L-鼠李吡喃糖基(1→2)-β-D-葡萄吡喃糖苷。

化合物4白色无定形粉末；分子式：C39H62O13；ESI-MS:m/z=739[M+H]+，1H-NMR(Pyridine-d5，150MHz)δ:1H-NMR(Pyridine-d5，150 MHz)data:δ6.22(1H,s,H-Rha-1′′),5.32(1H,m,H-6),4.51(1H,s,H-Glc-1′),1.20(3H,d,J=5.9Hz,H-Rha-6″),1.22(3H,d,J=6.9Hz,H-21),1.02(3H,s,H-19),0.79(3H,s,H-18),0.70(3H,d,J=3.6Hz),13C-NMR DEPT(Pyridine-d5,150 MHz)δ:140.6(s,C-5),121.5(d,C-6),109.6(s,C-22),101.8(d，Rha-C-1″),100.0(d，Glc-C-1′),89.7(d，C-17),89.9(s，C-16),73.0(d，Rha-C-2″),73.9(d，Glc-C-2′),78.0(d，Glc-C-4′),74.8(d，Rha-C-4″),72.4(d,Rha-C-3″),69.8(d,Rha-C-5″),66.5(t，C-26),61.4(d,Glc-C-6′),53.4(s，C-14),50.8(s，C-9),45.6(s，C-13),45.2(d，C-20),39.2(t，C-4),37.9(t，C-1),37.5(s，C-10),32.6(d，C-7),32.5(t，C-8),32.3(t，C-12,C-15),32.0(t，C-23),31.0(d，C-25),30.6(d，C-2),29.1(t，C-24),21.3(C-11),19.7(q，C-19),19.1(d,Rha-C-6″),17.2(q，C-27),17.3(q，C-18),9.7(q，C-21)。化合物4与文献[4]所报道化合物重楼皂苷Ⅵ谱数据基本一致，故化合物4的结构鉴定为:pennogenin3-O-α-L-rhamnopyranosyl(1→2)-β-D-glucopyranoside {偏诺皂苷3-O-α-L-鼠李吡喃糖基(1→2)-β-D-葡萄吡喃糖苷}。

3结论与讨论

对采自云南景东地区的滇重楼须根部分的乙醇提取物，综合应用多种分离材料和分离技术，从滇重楼须根部分70 %乙醇洗脱部分中共分离并通过核磁(NMR)和质谱(MS)波谱数据鉴定了4个化合物，包括2个甾体皂苷(3和4)，并首次从重楼属植物中得到1个乌苏烷型五环三萜(1)和1个黄酮(2)类化合物。

滇重楼须根的化学成分研究报道较少，且在该属植物中对黄酮和三萜类化合物的研究较少，本次实验为进一步开发利用滇重楼须根的化学成分提供一定的理论依据。

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Chemical Constituents of the Fibrous Roots of Paris polyphylla var.yunnanensis

WEN Yan-shi,GENG Yuan-yuan,WANG Jun-min,HUA Yan

(Southwest Forestry University,Kunming Yunnan 650224,P.R.China)

Abstract:In order to clarify the chemical constituents of the fibrous roots of Paris Polyphylla var.yunnanensis,an phytochemical investigation on its fibrous roots was carried out.Four compounds were isolated on the basis of various chromatographies over D101 macroporous resin,normal and reverse phase silica gel(Rp-18),SephadexLH-20,and semi-prepative HPLC.Their structures were identified as ursolic acid(1),salvigenin(2),polyphyllin Ⅴ(3)and polyphyllin Ⅵ(4)on the by comparison of their NMR and MS data with those reported values.Among them,compounds 1 and 2 were isolated from Paris species for the first time.

Key words:Paris；Paris polyphylla var.yunnanensis；fibrous roots；chemical constituents

中图分类号：R 284

文献标识码：A

文章编号：1672-8246(2015)06-0051-04

通讯作者简介：华燕 (1968-)，女，教授，博士，博士生导师，主要从事天然产物化学的教学与研究工作。E-mail：1026535163@qq.com

作者简介：第一文彦诗 (1988-)，男，硕士，主要从事天然产物化学方面的学习与研究。E-mail：45664506@qq.com

基金项目：国家自然科学基金资助项目 (31260083)。

收稿日期：*2015-05-26

doi10.16473/j.cnki.xblykx1972.2015.06.011