当归芍药散及其拆方对肝硬化腹水大鼠电解质的影响

姚　瑶，王成业，岳晓莉，潘永福，王运来，许　钒

(安徽中医药大学药学院,安徽 合肥　230012)



当归芍药散及其拆方对肝硬化腹水大鼠电解质的影响

姚瑶，王成业，岳晓莉，潘永福，王运来，许钒

(安徽中医药大学药学院,安徽 合肥230012)

[摘要]目的观察当归芍药散及其拆方对肝硬化腹水大鼠电解质紊乱的纠正作用。方法将雄性SD大鼠随机分为正常组，模型组，甘利欣组，当归芍药散低、中、高剂量组，拆方活血药组和利水药组。采用苯巴比妥联合四氯化碳腹腔注射复制肝硬化腹水大鼠模型，用代谢笼收集大鼠24 h尿液，采用冰点法测定大鼠尿渗透压，采用全自动生化分析仪检测大鼠血清及尿K+、Na+、Cl-浓度。结果与模型组比较，当归芍药散各剂量组大鼠尿渗透压显著降低(P<0.05)，血清K+、Na+、Cl-水平显著升高(P<0.05)，尿K+、Na+水平显著降低(P<0.05)；当归芍药散各剂量组与甘利欣组、活血药组、利水药组血清和尿电解质水平比较，差异无统计学意义(P>0.05)。结论当归芍药散可纠正肝硬化腹水大鼠电解质紊乱，无明显剂量依赖性，全方和拆方的效应无明显差异。

[关键词]肝硬化腹水；电解质紊乱；当归芍药散；活血利水

肝硬化是一种常见的慢性进行性疾病，是各种肝脏疾病(肝炎、脂肪肝、肝纤维化)的终末性病变。其具有一定的病理组织形态特点，且常伴有肝功能不全。腹水是肝硬化进入失代偿期的重要临床表现之一，多发生在肝硬化的中晚期。肝硬化失代偿期患者易并发低钠、低钾、低氯血症[1]，而腹水患者的电解质紊乱又可使病情加重，影响预后。中医学认为，肝硬化腹水是肝硬化病变的晚期阶段，属“臌胀”范畴[2]。《金匮要略·水气病脉证并治》云：“趺阳脉伏，水谷不化，脾气衰则鹜溏，胃气衰则身肿。少阳脉卑，少阴脉细，男子则小便不利，妇人则经水不通，经为血，血不利则为水，名曰血分。”当归芍药散作为活血利水的代表方剂，最初用于妇科痛证的治疗，疗效显著。该方当归、白芍、川芎养血活血，柔肝息风；白术、茯苓、泽泻通阳利水，健脾化湿。六药合用，活血促进利水，利水益于活血。该方经历代医家不断研究与拓展，现开始逐渐用于肝硬化腹水、肾病综合征等疾病的治疗。

近年来，学者对当归芍药散展开了深入的探索，但多见于临床疗效的评价，而当归芍药散对肝硬化腹水的实验研究却少见。本课题组在前期的研究中，发现当归芍药散可以明显减少肝硬化腹水大鼠24 h尿量和腹腔积液量[3]。为进一步研究其作用机制，本研究采用苯巴比妥联合CCl4腹腔注射复制肝硬化腹水大鼠模型，研究当归芍药散全方及其拆方组(活血药组：当归、芍药、川芎；利水药组：茯苓、泽泻、白术)对肝硬化腹水大鼠尿液渗透压及电解质的影响，以期为临床提供实验依据。

1材料

1.1药物及试剂当归、芍药、川芎、白术、茯苓、泽泻，购自安徽协和成药业饮片有限公司，并经安徽中医药大学药学院金传山教授鉴定，均符合《中华人民共和国药典》(2010年版)项下标准。按原方比例(当归3 g，芍药16 g，川芎、泽泻各8 g，白术、茯苓各4 g)称量药材，加10倍量50%乙醇，浸泡1 h，水浴回流1.5 h，冷却后收集滤液；再加10倍量50%乙醇水浴回流1.5 h，冷却后收集滤液。合并两次滤液，过滤，水浴浓缩至所需浓度药液。分别制备生药浓度为0.43、0.86、1.72 g/mL的当归芍药散低、中、高剂量全方药液；浓度为1.08 g/mL的活血药组药液；浓度为0.64 g/mL的利水药组药液。甘利欣：江苏正大天晴药业股份有限公司，批号 100702。CCl4(分析纯)：江苏强盛化工有限公司，批号 2008121。福临门一级菜籽油：中粮东海粮油工业有限公司，批号 20111010。甲醛(分析纯)：上海中试化工总公司，批号 20100130。苯巴比妥片：上海信宜药厂有限公司，国药准字H31022038。无水乙醚(分析纯)：上海中试化工总公司，批号 20101010。

[Key words]lumbar disc herniation; acupuncture therapy;round-sharp needle; muscle contraction;muscle tension; JOA score cirrhotic ascites; electrolyte disturbance; Danggui Shaoyao Powder; blood-activating and diuresis-promoting

1.2仪器MP6001电子天平：上海恒平科学仪器有限公司；TGL-16B高速台式离心机：上海安亭科学仪器厂；光学显微镜：日本Olympus；移液器：德国Eppendorf；AF-10型自动制冰机：意大利SCOTSMAN；TGL-20M高速台式冷冻离心机：长沙湘仪离心机仪器有限公司；岛津全自动生化分析仪：日本Olympus。

1.3动物SD大鼠80只，雄性，SPF级，体质量(220±20)g，由江苏南京青龙山动物繁殖场提供，生产许可证号：SCXK(苏)2009-0001。

2方法

2.1分组、复制模型及给药将80只雄性SD大鼠随机分为正常组，模型组，甘利欣组，当归芍药散低、中、高剂量组，活血药组，利水药组，每组10只。适应性喂养1周后，除正常组外，其余组给予35%苯巴比妥作为饮用水诱导1周。第2~3周腹腔注射10% CCl4油溶液，第4~5周给予12% CCl4油溶液，第6~7周给予14% CCl4油溶液，第8~9周给予16% CCl4油溶液，第10~11周给予18% CCl4油溶液，第12~14周给予20% CCl4油溶液，每周2次，给药剂量为1 mL/kg，首次剂量加倍。治疗组自模型复制同时分别灌胃给予低剂量(4.3 g/kg)、中剂量(8.6 g/kg)、高剂量(17.2 g/kg)当归芍药散，活血药(10.8 g/kg)，利水药(6.4 g/kg)药液，给药容积为10 mL/kg。甘利欣组给予甘利欣药液，0.052 5 g/kg，每日1次。正常组给予等容积蒸馏水。均连续给药13周。末次给药12 h后，所有大鼠禁食不禁水，于次日麻醉，取材。

2.2尿渗透压检测第13周，将大鼠置代谢笼内适应性饲养2 d后，观察饮水及尿排泄情况。收集尿液，测量24 h尿量，取适量尿液于4 ℃条件下，3 500 r/min离心10 min，分离上清液，冰点法测定尿渗透压。

2.3电解质检测第13周，将各组大鼠编号，置代谢笼内适应性饲养2 d后，收集24 h尿液。取适量于4 ℃条件下，3 500 r/min离心10 min，分离上清液置于5 mL EP管内，全自动生化检测仪检测尿电解质K+、Na+、Cl-浓度。

第14周末，大鼠乙醚麻醉后，腹主动脉取血，加入非抗凝管，室温放置30 min，3 500 r/min离心10 min，分离血清。全自动生化仪检测血清电解质K+、Na+、Cl-浓度。

3结果

3.1大鼠一般状态正常组大鼠较活泼、被毛光泽、正常饮食饮水，大小便正常，整个实验周期体质量稳步增长。模型组大鼠在模型复制期被毛疏松无光泽且易脱落，性情暴躁，精神不振，尿量减少，肝、脾、肾等器官肿大。给药组大鼠皮毛较顺，性情较模型组温和，尿量明显增多。

3.2各组尿渗透压比较模型组大鼠尿渗透压较正常组显著升高(P<0.05)；各治疗组尿渗透压均较模型组显著降低(P<0.05)；各治疗组之间尿渗透压相比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1　当归芍药散及其拆方对肝硬化腹水

注：含有相同右上标符号的组别相比较，P>0.05；不含相同右上标符号的组别相比较，P<0.05。

3.3各组血清和尿电解质水平比较模型组血清K+、Na+、Cl-浓度较正常组显著降低(P<0.05)，尿K+、Na+浓度显著升高(P<0.05)；各组尿Cl-浓度相比较，差异均无统计学意义(P>0.05)；当归芍药散各剂量组均可明显升高血清K+、Na+、Cl-水平，显著降低尿K+、Na+水平；当归芍药散各剂量组血清K+、Na+、Cl-水平和尿K+、Na+水平相比较，以及当归芍药散各剂量组与活血组、利水组和甘利欣组比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。结果提示当归芍药散对肝硬化腹水大鼠血清和尿电解质水平的影响无剂量依赖性，全方与拆方的效应近似。结果见表2、表3。

表2　当归芍药散对肝硬化腹水大鼠血清电解质的影响±s)

注：含有相同右上标符号的组别相比较，P>0.05；不含相同右上标符号的组别相比较，P<0.05。

表3　当归芍药散对肝硬化腹水大鼠尿电解质的影响±s)

注：含有相同右上标符号的组别相比较，P>0.05；不含相同右上标符号的组别相比较，P<0.05。

4讨论

当归芍药散由当归、芍药、川芎、茯苓、泽泻、白术组成。方中重用芍药以柔肝血、缓急止痛；佐以川芎疏肝理气；与当归配合又能行血活血；以茯苓、泽泻淡渗利湿，白术健脾燥湿，三药通过祛湿而使脾得健运。六药合用则肝血足而气调达，脾运健而湿邪除，肝调和则诸证愈。

肝硬化失代偿期患者多伴有不同程度的血钠、血钾、血氯降低等电解质紊乱现象，尤以肝硬化腹水患者更为常见。肝硬化腹水患者血清电解质紊乱与其腹水严重程度相关，且电解质紊乱若不及时纠正，可加重病情、增加并发症的发生率[4]，特别是失代偿期患者常常伴有低钠血症，临床上多用精氨酸加压素拮抗剂进行治疗[1]。肝硬化患者在形成腹水之前已出现电解质紊乱，出现腹水后，病情加重，常伴有代谢性碱中毒。因此，电解质水平可作为评价肝硬化腹水患者病情的重要指标[5]。在肝硬化腹水发病过程中，引起肝硬化患者电解质紊乱的根本原因是肝功能异常，高能磷酸键减少，钠泵活性降低，细胞内Na+不能主动转向细胞外，胞外K+不易进入细胞内，使细胞外液Na+含量减少。甘利欣是甘草有效成分的第三代提取物，通过抗炎、抗纤维化、抗内皮素分泌以及解毒作用达到对肝脏的保护作用。前期实验及文献记载表明，甘利欣对肝硬化腹水具有一定的改善作用。

本研究通过定期监测肝硬化腹水大鼠尿K+、Na+、Cl-浓度，考察其是否出现电解质紊乱，及药物干预后大鼠电解质紊乱是否得到纠正。实验13周，收集24 h尿液，检测尿K+、Na+、Cl-，发现模型组大鼠尿K+、Na+较正常组显著升高，而当归芍药散各剂量组尿K+、Na+浓度均表现明显下降。通过检测血清K+、Na+、Cl-，发现模型组电解质水平较正常组显著降低，出现低钠、低钾、低氯血症，其中血清Na+水平降低最为明显，这与尿电解质水平变化趋势正好相反。拆方中活血药组养血活血，利水药组通阳利水，对血清及尿K+、Na+、Cl-水平都有一定的改善作用，且利水组较活血组稍好。当归芍药散可能通过改善肝功能，提高离子泵活性，改善细胞膜的通透性，减少电解质进入细胞内，以提高血清K+、Na+、Cl-浓度，达到纠正肝硬化腹水大鼠电解质紊乱的作用。本实验中，甘利欣虽然对肝硬化腹水大鼠尿渗透压有显著的降低作用，但其升高血清K+、Na+的效应与各剂量当归芍药散及其活血药拆方、利水药拆方比较，差异均无统计学意义。

另外，血浆渗透压降低及抗利尿激素、醛固酮的激活，可使水潴留超过钠潴留，也会引起稀释性低钠血症。通常肝功能异常易诱发低钠血症，血钠降低的程度也可反映肝功能的状况，二者互为因果，进而造成恶性循环，正如中医所说的“血不利则为水”[6]。

实验结果表明，当归芍药散各剂量组及拆方组对血清和尿中K+、Na+、Cl-水平都有一定的改善作用，尤以改善Na+水平最为显著，说明当归芍药散对肝病引发的低钠血症具有一定的治疗作用。

参考文献：

[1]Ginès P, Càrdenas A, Schrier RW. Liver disease and the kidney. Diseases of the Kidney & Urinary Tract：Vol.3[M]. 8thed. Philadelphia, PA: Lippincott Williams & Wilkins, 2006：2179-2205.

[2]龙舟.中医药治疗肝硬化腹水概况[J].中医临床研究,2012,4(5):20-21.

[3]王成业,许钒, 王满媛，等.当归芍药散对肝硬化腹水大鼠的干预作用研究[J].中国中药杂志,2013,38(6):871-874.

[4]陈静娴.肝硬化腹水病人电解质紊乱的临床意义[J].广东微量元素科学,2005,12(4): 38-40.

[5]邬战勇,秦晓华.肝硬化并低钠血症152例临床分析[J].中国现代药物应用,2008,2(2):72-73.

[6]王宇明.肝硬化合并低钠血症的处理[J].中国实用内科杂志,2013,33(9):679-683.

Effect of Danggui Shaoyao Powder and Its Separated Prescription on Electrolytes in Rats with Cirrhotic Ascites

YAOYao,WANGCheng-ye,YUEXiao-li,PANYong-fu,WANGYun-lai,XUFan

(SchoolofPharmacy,AnhuiUniversityofChineseMedicine,AnhuiHefei230012,China)

[Abstract]ObjectiveTo investigate the effect of Danggui Shaoyao Powder and its separated prescription on the electrolyte disturbance in rats with cirrhotic ascites. MethodsMale Sprague-Dawley rats were randomly divided into normal group, model group, Ganlixin group, low-, middle-, and high-dose Danggui Shaoyao Powder groups, blood-activating separated prescription group, and diuresis-promoting drug group. A rat model of cirrhotic ascites was established by intraperitoneal injection of phenobarbital combined with carbon tetrachloride. Metabolic cages were used to collect rat urine within 24 hours; urine osmotic pressure was measured by cryoscopy, and the levels of K+, Na+, and Cl-in serum and urine were determined by the automatic biochemical analyzer. ResultsCompared with the model group, all Danggui Shaoyao Powder groups had significantly reduced urine osmotic pressure (P<0.05), significantly increased serum levels of K+, Na+, and Cl-(P<0.05), and significantly reduced urine levels of K+and Na+(P<0.05). There were no significant differences in serum and urine levels of electrolytes between the Danggui Shaoyao Powder group and the Ganlixin group, blood-activating separated prescription group, or diuresis-promoting drug group (P>0.05).ConclusionFor rats with cirrhotic ascites, Danggui Shaoyao Powder can correct electrolyte disturbance with little dose dependence, and its effect shows no significant difference between the whole prescription and the separated prescription.

收稿日期：(2014-09-15；编辑：张倩)

通信作者：许钒，13505514407@163.com

作者简介：姚瑶(1989-)，女，硕士研究生

基金项目：国家自然科学基金项目(81173368)

[中图分类号]R285.5[DOI]10.3969/j.issn.2095-7246.2015.02.018

ficant difference in JOA scores between the two groups (F=2.317,P=0.133). At the end of the first course of treatment, the treatment group had a significantly better clinical outcome than the control group (P=0.037); at the end of the second course of treatment, no significant difference in clinical outcome was observed between the two groups (P=0.259). ConclusionCompared with conventional acupuncture, round-sharp needle therapy has better short-term efficacy and comparable long-term efficacy.