RP—HPLC法测定人工牛黄甲硝唑胶囊中甲硝唑的溶出度

秦松　张蓓

【摘要】目的建立RP-HPLC法对人工牛黄甲硝唑胶囊中甲硝唑溶出度的测定方法。方法采用C₁₈色谱柱，甲醇-水（20：80）为流动相，流速：1.0mL/min，检测波长320nm，柱温35℃。结果甲硝唑进样量在0.4～4.0μg范围内呈良好线性关系，r=0.9999，平均回收率为99.45%，RSD为0.46%（n=6）；3批次样品溶出度检查结果良好。结论本法简单、准确、重现性高、专属性强，符合溶出度方法的建立原则，可用于人工牛黄甲硝唑胶囊中甲硝唑溶出度的测定。

【关键词】人工牛黄甲硝唑胶囊；RP-HPLC法；甲硝唑；溶出度

【中图分类号】R927 【文献标识码】B 【文章编号】2095-0616（2015）21-48-04

人工牛黄甲硝唑胶囊为复方制剂，曾用名是牙痛安胶囊，主要成分是甲硝唑和人工牛黄，外加淀粉和胶囊壳等辅料组成，其中甲硝唑是对大多数厌氧菌有明显抗炎作用，而人工牛黄起解热抗炎作用，其制剂是临床常用的一种抗厌氧菌药物，用于治疗急性智齿冠周炎、局部牙槽脓肿、牙髓炎、根尖周炎等有显著疗效。甲硝唑在此复方制剂的抗炎作用中起主要作用，同时溶出度作为药品质量的重要参考指标，而目前我国国家药品标准中未收载其溶出度的检查项目。所以，为了有效控制药品质量，本研究采用RP-HPLC法对人工牛黄甲硝唑胶囊中甲硝唑的溶出度测定方法进行考核。

1仪器与材料

1.1仪器

安捷伦1260型高效液相色谱仪（美国安捷伦）；CPA225D型电子天平（德国赛多利斯）；RCZ-8M型溶出试验仪（天津市天大天发科技有限公司）

1.2试药

人工牛黄甲硝唑胶囊（市售品，规格：甲硝唑0.2g、人工牛黄5mg，ABC三个生产企业与批号分别为：靖宇天池制药有限公司，20131106、新乡恒久远药业有限公司，20130705），重庆迪康长江制药有限公司，140226）；甲醇为一级色谱纯（美国天地，1410106）；盐酸为分析纯（洛阳市化学试剂厂，140606）；水为高纯水（自制）。

1.3对照品

甲硝唑对照品批号为100191-201507，来源为中国食品药品检定研究院，其含量为100%。

2方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱：Agela Promosil C₁₈柱（4.6 mm×250mm，5μm）；流动相：甲醇-水（20：80）；检测波长：320nm；流速：1.0mL/min；柱温：35℃；进样量：10μL；在此色谱条件下，理论板数按甲硝唑峰计算不低于2000。

2.2溶液制备

取人工牛黄甲硝唑胶囊各1粒，用盐酸溶液（9→1000）溶解后，稀释至900mL，摇匀，经0.45μm滤膜过滤，即得供试品溶液。精密称取甲硝唑对照品20.00mg置100mL容量瓶中，用盐酸溶液（9→1000）溶解后，稀释至刻度，即得对照品溶液（0.2000mg/mL）。取空白胶囊壳1粒，加入按处方比例称取的1粒胶囊量的淀粉辅料和人工牛黄约5mg，然后按供试品溶液的制备方法配制成阴性对照溶液。

2.3系统适用性试验

在上述色谱条件下，分别取上述制备的对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液注入色谱仪，记录色谱图，见图1。甲硝唑峰保留时间为8.51min，在此时间对照品溶液和供试品溶液均出现甲硝唑色谱峰，而阴性对照溶液则在此时间段未出现干扰吸收峰，表明在本实验条件下处方中其他成分对测定无影响。

2.4方法学考察

标准曲线绘制：在上述色谱条件下，精密吸取上述对照品溶液2、5、10、15、20μL，注入液相色谱仪，测得峰面积。以对照品峰面积Y为纵坐标，以折算后按20¨L进样量的对照品溶液浓度X（μg/mL）为横坐标（分别为20、50、100、150、200μg/mL），进行线性回归，得回归方程为Y=29.680X+1.226，r=0.9999。结果表明，甲硝唑进样量在0.4～4.0μg范围内与峰面积有良好线性关系。

精密度试验：取对照品溶液按上述色谱条件连续进样6次，测定甲硝唑的峰面积，结果甲硝唑峰面积的RSD为0.32%（n=6），表明该方法的精密度良好。

稳定性试验：取供试品溶液分别在配制完成后室温放置0、4、8、12和16h时进样，测得峰面积RSD为0.45%（n=5），表明供试品溶液在16h内稳定。

加样回收试验：精密称取甲硝唑对照品20.00mg置50mL容量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）适量溶解后稀释至刻度，摇匀后作为对照品贮备溶液（0.4000mg/mL）。精密量取6份已知质量浓度的供试品溶液（0.1947 mg/mL）各5mL，分别置6个10mL容量瓶，再精密量取对照品贮备溶液（0.4000mg/mL）1mL、2mL和3mL各2份分别置上述6个10mL容量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度并摇匀，分别进样测定含量，计算回收率，结果见表1。

2.5溶出度测定和溶出曲线的绘制

按《中国药典2010年版（二部）》的附录XC第二法（桨法）操作。量取经脱气处理的盐酸溶液（9→1000）900mL，倒入溶出杯，待恒温至（37℃±0.5℃），以转速50r/min启动溶出仪，取人工牛黄甲硝唑胶囊1粒装入沉降篮，投入溶出杯中并开始计时，分别在第5、10、20、30、40、50分钟时间点取溶液5mL，用0.45μm滤膜过滤后进样测定，并在每次取样后立即补充相同温度相同体积的盐酸溶液（9→1000）。经本文的RP-HPLC法测定后计算各时间点的累计溶出百分率，结果见表2。将表2的数据以时间为横坐标、累积溶出百分率为纵坐标，绘制成溶出曲线。结果见图2。由溶出曲线可见，样品在30min时甲硝唑的溶出量达到了90%以上，按照口服制剂溶出度的要求，参考甲硝唑片已有的国家标准的溶出度要求，考虑甲硝唑的体外一体内相关性及不同企业工艺的影响，可确定取样时间为30min，限度为标示量的80%较为合适。

2.6批次样品的溶出度检查

分别取3批次样品，照上述2.5的方法操作，在30min时取样5mL，经0.45μm滤膜过滤后进样测定其溶出度。结果见表3。从3批次样品的检查结果可见，此方法测得的结果稳定可靠，溶出度结果良好。

3讨论

3.1溶出条件的选择

在溶出方式的选择上，一般常用转篮法和桨法，因试验药品为胶囊剂，在使用转篮法时转篮易被胶囊碎片堵塞，影响药物溶出，因此选择桨法；但因溶出过程胶囊会浮于液面而影响溶出，所以还需要使用沉降篮；桨法常用的转速为50～75r/min，但考虑到为保证药品质量，以便对胃动力减弱的患者也能有较好的治疗效果，故选用转速50f/min。在溶出介质的选择上，因人工牛黄甲硝唑胶囊是一种胃溶型制剂，所以选择盐酸溶液（9→1000）作为溶出介质，这与其现行标准的含量测定项溶剂一致。

3.2检测条件的选择

据有关研究的文献报道甲硝唑所用检测波长有277nm、318nm、320nm、390nm，经比较后选择320nm波长较为理想，与甲硝唑各制剂的现行国家检测标准一致。在流动相的选择上，筛选了不同比例的甲醇-水，并与文献报道的流动相进行比较，结果显示甲醇-水（20：80）的流动相成本低，易配制，所得的色谱图峰形及系统适用性也很好。

3.3本研究方法的优点

上述试验及一些文献资料表明，不同厂家生产的人工牛黄甲硝唑胶囊溶出速率存在一定差别，可见在制剂生产工艺上有较大差异。溶出度作为制剂质量控制的一种方式，其目的就是使不同企业生产的同一品种能达到一定程度的生物等效。经本文的试验验证，RP-HPLC法测定人工牛黄甲硝唑胶囊中甲硝唑的溶出度，方法简单、准确、重现性高、专属性强，可作为人工牛黄甲硝唑胶囊质量评价与控制的有效手段。endprint