褪黑素受体MT1在视网膜母细胞瘤中的表达及临床意义

褪黑素受体MT1在视网膜母细胞瘤中的表达及临床意义*

网络出版时间：2015-10-13网络出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/52.5012.R.20151013.1257.034.html

程俊美1， 候亚莉1， 杨一涛2， 谢锋1

(1.菏泽医学专科学校 病理学教研室， 山东 菏泽274000； 2.菏泽市立医院 眼科， 山东 菏泽274000)

[摘要]目的： 探讨褪黑素受体MT1在视网膜母细胞瘤(RB)中的表达及临床意义。方法： 用免疫组化SP法检测MT1在49 例RB组织和20例正常视网膜组织中的表达，分析MT1的表达水平与RB临床分期、细胞分化程度及是否浸润神经组织的关系。 结果： MT1在RB中的表达明显高于正常视网膜组织 (P<0.01)，MT1在RB临床Ⅰ期的表达低于临床Ⅱ和Ⅲ期、在未分化RB组织中的表达高于分化组织、在浸润神经组织的表达高于未浸润神经组织，差异有统计学意义(P<0.01)；而MT1表达与性别无关(P>0.05)。结论： MT1高表达与RB的发生发展有关。

[关键词]视网膜母细胞瘤； 褪黑素受体； 肿瘤分期； 细胞分化； 免疫组织化学

[基金项目]*菏泽医专课题项目(H13K05)

[中图分类号]R739.7[文献标识码] A

The Expression and Clinical Significance of Melatonin

Receptor MT1 in Retinoblastoma

CHENG Junmei1, HOU Yali1, YANG Yitao2, XIE Feng1

(1.DepartmentofPathology,HezeMedicalSchool,Heze274000,Shandong,China; 2.Departmentof

Ophthalmology,HezeCityHospital,Heze274000,Shandong,China)

Abstract[] Objective: To explore the expression of melatonin receptor (MT1) in retinoblastoma (RB) and its clinical significance. Methods: SP of immunohistochemistry was adopted to detect the expression of melatonin receptor (MT1) in retinoblastoma (49 cases) and normal retina tissue (20 cases). The relationship between the expression of MT1 in retinoblastoma and its clinical and pathologic features were analyzed. Results: The positive expression level of MT1 in retinoblastoma cases was obviously higher than in normal retina tissue cases (P<0. 01). The positive expression rate of MT1 in clinical stage Ⅰ cases was lower than in clinical stage Ⅱand Ⅲ cases (P<0. 01); The expression of MT1 in undifferentiated RB tissue was higher than in differentiated tissue while higher in invasive nerve tissue than in non-invasive nerve tissue, and the differences showed statistical significance (P<0.01). However, there was no significant difference in MT1 expression between male and female (P>0. 05). Conclusion: Melatonin receptor is related to the occurrence and development of retinoblastoma.

[Key words] retinoblastoma; melatonin receptor; neoplasm staging; cell differentiation; immunohistochemistry

视网膜母细胞瘤(Retinoblastoma，RB) 是婴幼儿最常见的一种眼内恶性肿瘤[1]，国际上首选的治疗方法是化学减容法联合局部治疗，但复发率较高[2]。褪黑素(Melatonin, MEL)是一种神经内分泌激素，是作用最强的自由基清除剂，具有明显的抗肿瘤作用，主要在哺乳动物和人类的松果体合成[3]，MEL可通过与其靶器官或靶组织上的褪黑素受体(Melatonin receptor，MR)结合发挥作用，因此，MR对于MEL发挥抗肿瘤作用至关重要。MR 广泛分布于人的多种正常组织及肿瘤组织中[4]，在人类组织有MT1和MT2两种亚型，关于MR在人RB中表达的相关研究较少。本研究通过探讨MT1在RB中的表达，为进一步研究MEL的抗肿瘤作用及其在治疗RB中的机制提供理论依据。

1对象与方法

1.1　研究对象

经病理诊断明确的RB手术切除标本49例(49眼)，男23例，女26例；右眼25例，左眼24例；9月~5岁，平均(2.7±1.8)岁，无双眼均发病患者。根据肿瘤分化程度(组织中有无菊形团排列)分为分化型22例、未分化型27例，根据肿瘤有无视神经浸润分为浸润视神经21例、未浸润视神经28例，临床分期Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期分别为21例、18例及10例。20例正常视网膜组织标本，受检者11月~8岁，平均(4.3±2.5)岁，距癌旁5 mm经病理诊断为正常视网膜组织15例，外伤眼球摘除术后病理诊断为正常视网膜组织5例。另选乳腺癌5例作为阳性对照。组织均为石蜡包埋标本。

1.2　免疫组织化学

所有组织切片经二甲苯脱蜡、酒精水化和抗原修复等常规处理。一抗为兔抗人多克隆抗体，按照Max Vision TM试剂盒说明书常规免疫组织化学染色。阳性对照组为已知MT1阳性表达的乳腺癌组织，阴性对照组为PBS液代替一抗。按参考文献[5]判断结果，每张组织切片在光学显微镜下随机选取5个高倍视野(400×)，每个视野下计数100个细胞，共计500个。按着色的强弱评分：无色记0分，淡黄色记1分，棕黄色记2分，棕褐色记3分；再按着色阳性细胞率评分：肿瘤细胞中无阳性着色者记0分，阳性细胞率≤10%记1分，11%~50%记2分，51%~75%记3分，>75%记4分。将两类评分相加即得免疫组织化学综合评分， 0～4分记阴性，5～7分记阳性。MT1表达为胞膜、胞浆同时着色，胞核分布最少。

1.3　观察指标

记录并比较MT1在RB和正常视网膜组织中的阳性表达数，分析MT1表达与RB肿瘤分化程度、有无视神经浸润和临床分期的关系。

1.4　统计学处理

数据采用SPSS 13.0统计软件处理，计量资料用例或率(%)表示，各组间比较采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1　MT 1表达

阴性对照或阳性对照组分别呈阴性或阳性反应，提示免疫反应结果可靠。MT1阳性颗粒呈棕黄色或淡黄色，在胞膜和(或)胞浆着色，见图1。MT1在RB组织中阳性表达(73.5%)显著高于正常视网膜组织(35.0%)，差异有统计学意义(P<0.01)，见表1。

注：A为正常视网膜组织，B为RB组织(免疫组织化学，400×) 图1　MT 1在RB和正常视网膜组织中的表达 Fig.1　Expression of MT 1 in RB tissue and normal retina tissue

分组MT1表达+-阳性率χ2PRB组361373.5%7.3880.007正常组71335.0%

2.2　MT 1表达与RB肿瘤分化程度、视神经浸润和临床分期的关系

结果显示，RB肿瘤分化程度越低MT1阳性表达率越高，未分化组MT1的阳性表达率(92.6%)高于分化组(50.0%)，差异有统计学意义(P<0.01)。浸润视神经组MT1阳性表达率(95.2%)高于未浸润视神经组(57.1%)，差异有统计学意义(P<0.01)。临床Ⅰ期和Ⅱ、Ⅲ期中的阳性表达率分别为47.6%、88.9%、100%，差异有统计学意义(P<0.01)；MT1表达与性别无关(P>0.05)。见表2。

表2　MT 1在RB组织中的表达与

3讨论

RB是原发于视网膜的恶性肿瘤，大多发生于婴幼儿，并且具有较高的致盲率和病死率。目前RB的主要治疗方法是化疗联合局部治疗，但现有的化疗药物如长春新碱、泊类和环磷酰胺等，毒副作用较大，还可能诱发眼外恶性肿瘤[5]，故使其临床应用受限。因此，寻找安全有效的RB化疗药物，一直是研究热点。MEL具有抗氧化、增强免疫及抗肿瘤的作用[6]。Helmbold等[7]研究发现，内源性MEL水平和昼夜节律性与肿瘤的发生、发展密切相关。MEL作用的发挥主要通过MR结合而实现。MR在乳腺癌[8]、甲状腺癌[9]、肝细胞肝癌[10]等高表达。MR中发挥抑制肿瘤生长作用的主要是MT1。本研究通过探讨MT1在RB中的表达，为研发新的靶向药物提供理论依据。

本研究结果MT1在RB组织中阳性表达(73.5%)显著高于正常视网膜组织(35.0%)，P<0.01；RB肿瘤分化程度越低MT1阳性表达率越高，分化组中的阳性表达率(50.0%)低于未分化组(92.6%)，P<0.01；浸润视神经组MT1阳性表达率(95.2%)高于未浸润视神经组(57.1%)，P<0.01；临床Ⅰ期和Ⅱ、Ⅲ期中的阳性表达率分别为47.6%、88.9%、100%，差异有统计学意义(P<0.01)；说明MT1的高表达不但与RB的发生有关，而且与肿瘤的分化及恶性程度有关。但与RB患者的性别无关。曾建等[8]报道，MT1在乳腺癌组织中的表达率明显高于正常乳腺组织，且MT1表达率与乳腺癌恶性程度呈正相关。该报道与本研究结果一致。李岚等[9]研究发现MR介导的抑制成人甲状腺癌的作用可能主要MT2发挥。而亢晓彬等[10]研究发现MT1和MT2在成人肝癌组织上均呈高表达，说明MT1和MT2都有抑制肝癌细胞增殖的作用。另有Yuan等[11]研究发现，MT1在MCF-7乳腺癌细胞阳性表达率越高，MEL抑制肿瘤作用越强，并且肿瘤细胞对MEL的敏感性也越强。这一研究证实了MEL 与其受体MT1结合可以发挥抑制肿瘤增殖的作用。目前已有临床研究发现MEL单独或联合应用均可有效地抑制肿瘤的生长和增殖，提高患者生存率，在口服适量MEL时尚未发现明确的毒副作用[12]。本课题组的前期研究表明，MEL通过不同的作用机制，对体外培养的RBHXO-RB44细胞显示出较好的抑制作用[13]。

综上， MT1在RB中的高表达可能在RB的发生、分化、发展、浸润、转移过程中起重要作用，可以考虑把MT1作为RB的预后判断指标。

4参考文献

[1] 秦静，段大鹏，车选义，等.RB中SHH与PTCH的表达及意义[J].中华实用诊断与治疗杂志， 2015(6)：559-561.

[2] Arika SK, Kasap B, Pintor J, et al. Impact of prognostic factors on survival rates in patients with ovarian carci-noma[J]. Asian Pac J Cancer Prev, 2014(15): 6087-6094.

[3] Bretin-ciftci J, Barre B, Wiechmann AF, et al. pRb / E2F-1-mediated caspase-dependent induction of Noxa amplifies the apoptotic effects of the Bcl-2/Bcl-xL inhibitor ABT-737[J]. Cell Death Differ, 2013(5):755-764.

[4] Gencer S, Cebeci A, Rada JA, et al.Silencing of the MMP-3 gene by siRNA transfection in gastric cancer AGS cells [J]. J Gastrointestin Liver Dis, 2011(1): 19-26.

[5] Poudel S, Song J, Jin EJ, et al. Sulfuretin induced miR-30C selectively downregulates cyclin D1 and D2 and triggers cell death in human cancer cell lines [J]. Biochem Biophys Res Com-mun, 2013(3): 572-578.

[6] Tallant C, Marrero A, Comai S, et al. Cell cycle dependent acetylation of Rb2/p130 in NIH3T3 cells [J]. Onco-gene, 2010(42): 5755-5760.

[7] Helmbold H, Galderisi U, Dubocovich M L, et al. The switch from pRb/p105 to Rb2/p130 in DNA damage and cellular senescence [J]. J Cell Physiol, 2012(2): 508-513.

[8] 曾建，陈丽萍，陈淼，等. 乳腺癌组织中褪黑素受体MT1和CUEDC2的表达及临床意义[J]. 临床肿瘤学杂志, 2012(9): 795-799.

[9] 李岚，何金，刘志民，张军初，等. 成人甲状腺肿瘤褪黑素及褪黑素受体蛋白表达异常及意义[J].医学与哲学:临床决策论坛版,2011(5):57-59.

[10]亢晓彬，马勇，魏伟. 成人肝癌组织褪黑素受体的表达及结合特性[J].中国药理学通报, 2010(2):174-177.

[11]Yuan L ，Collins A , Kiefer TL et al. Overexpression of the MT1melatonin receptor in MCF-7 human breast cancer cells inhibits mammary tumor formation in nude mice [J]. Cailcer Lett, 2003(1):49-57.

[12]Wang X, Sirianni A, Schernhammer ES，et al. A randomized controlled trial of oral melatonin supplementation and breast cancer biomarkers [J] Cancer Cause Control, 2012(4): 609-616.

[13]杨一涛, 唐罗生, 曾祥云, 等. 褪黑素对体外培养的RBHXO-RB44细胞增生活性的影响[J]. 中华眼底病杂志, 2009 (3):103-107.

(2015-07-29收稿，2015-08-30修回)

中文编辑： 吴昌学； 英文编辑： 刘华