枯草芽孢杆菌-刺五加多糖合生元对蛋雏鸡免疫器官指数及盲肠微生物的影响

■冯志华 邵丽玮 赵国先 龚建刚 张一为

（1.河北农业大学动物科技学院，河北保定071000；2.河北省畜牧兽医研究所，河北保定071000；3.河北农业大学食品学院，河北保定071000；4.天津市饲草饲料工作站，天津河西300210）

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)是一类分布广泛的好氧型、革兰氏阳性杆状细菌，能够产生孢子，耐热、抗逆性强，普遍存在于土壤和植物的表面，对人畜无毒无害，且不污染环境。由于枯草芽孢杆菌营养需求简单、生长速度快，易于存活、定植及繁殖，可以分泌多种酶和抗生素，无致病性，而且还具备良好的发酵基础，因此其用途十分广泛。研究证实，枯草芽孢杆菌可改善肠道微生物组成，对病原菌有竞争排斥作用，对仔鸡肠道内致病性大肠杆菌具有抑制作用(LaRagione等，2001)；枯草芽孢杆菌能排斥来航仔鸡肠道中沙门氏菌(LaRaglone等，2003)和产气荚膜梭菌。枯草芽孢杆菌还可以促进免疫器官发育及提高机体体液免疫功能。徐海燕等(2009)报道，饲粮中添加芽孢杆菌制剂能促进雏鸡胸腺、脾脏和法氏囊发育，显著提高血清中免疫球蛋白G的含量，增强抗应激能力。

刺五加又名西伯利亚人参、五加参和刺拐棒等，与人参同属五加科五加属，为多年生落叶灌木，主要分布于我国东北、华北、陕西、西川以及广西等地区，是我国东北地区典型的、丰富的药用植物。我国对刺五加的研究始于其药理作用，《神农本草经》列五加为上品，能“补中益气，坚筋骨强意志，久服轻身抗衰老”。研究表明，刺五加含有刺五加多糖(ASPS)、皂苷和黄酮等主要活性成分，其中ASPS具有激活机体免疫应答反应、调节机体肠道微生态平衡、良好的抗肿瘤和抗感染等功效。王洪连等（2007）将从刺五加根中分离提取的水溶性多糖给予C57DL小鼠，结果小鼠胸腺增大。袁学千等（2004）研究表明，ASPS不仅能增加小鼠脾脏白髓总体积和淋巴结皮质总体积，同时可以增加小鼠脾脏和肠系膜淋巴结的重量、细胞数目。尹富贵等（2007）和燕福永等（2010）研究表明，ASPS有助于提高断奶仔猪肠道内容物中乳酸杆菌数量，降低大肠杆菌数量，有利于盲肠中微生物多样性。王淑洁（2008）和王长文等（2010）试验表明，ASPS作为一种化学益生素，可提高犊牛消化道双歧杆菌和乳酸杆菌数量，促进犊牛肠道有益菌群的生长繁殖。

枯草芽孢杆菌-刺五加多糖合生元在蛋雏鸡上的应用国内外未见报道。本试验拟通过饲养试验和屠宰试验研究一种枯草芽孢杆菌-刺五加多糖合生元对蛋雏鸡的免疫器官指数及盲肠微生物的影响，对其全面评价枯草芽孢杆菌-刺五加多糖合生元在蛋雏鸡日粮中的应用效果具有重要意义。

1 材料与方法

1.1 试验材料

试验动物：海兰褐蛋雏鸡；金霉素，广东粤农兽药集团有限公司，含量98%；

枯草芽孢杆菌-刺五加多糖合生元，由河北农业大学动物科技学院动物营养2345实验室自制。

1.2 试验设计

选择600只健康、体重相似的1日龄海兰褐蛋雏鸡进行饲养试验，试验期56 d。随机将蛋雏鸡分成6组，每组4个重复，每个重复25只。各组蛋雏鸡饲养管理条件完全相同，试验鸡分为上、中、下三层全阶梯笼养，各组均匀分布，消除位置不同带来的影响，粉料投喂，自由采食、饮水，人工光照，机械通风，常规免疫。具体分组设计见表1，基础日粮组成及营养水平见表2。

表1 饲养试验设计

表2 日粮的组成及营养水平（风干基础）

1.3 饲养管理

饲养试验在河北省保定市易县的河北青山种禽有限公司进行，试验期56 d。鸡舍进雏前对鸡舍全面冲洗，消毒。试验过程按养鸡场的常规管理程序进行免疫，驱虫，采光和通风。采食方式、饮水方式、鸡群密度按鸡场程序调整。

在进雏当天空腹称鸡重，分组，各组均匀分布于四层阶梯式鸡笼，消除位置引起的误差。试验期每天07:00和17：00各喂1次料，自由饮水。每天观察鸡群健康状况，记录死鸡、病鸡数量。

1.4 测定指标和方法

1.4.1 免疫器官指数

分别在试验结束时，从各重复中随机取2只鸡，空腹称重后，颈静脉放血处死，分离脾脏、胸腺和法氏囊，剔除脂肪后称重、记录，计算各免疫器官指数。

免疫器官指数=免疫器官湿重（g）/活体重（kg）。

1.4.2 盲肠微生物

盲肠微生物的检测采用平板计数法。于试验期结束时，各重复取2只鸡进行宰杀，取盲肠末端2 cm肠段，液氮保存。在无菌操作台上，取盲肠食糜0.5 g于灭菌离心管中，加入生理盐水4.5 ml，稀释成10-1，振荡均匀后，吸取0.5 ml上清液转入盛有4.5 ml生理盐水的离心管稀释至 10-2，按此法再逐级进行 10-3、10-4、10-5、10-6、10-7的倍比稀释，每个稀释度设3个重复。大肠杆菌涂在麦康凯选择性培养基上（北京双旋微生物培养基制品厂），37℃生化培养箱中有氧培养24 h后菌落计数；乳酸杆菌接种于乳酸杆菌选择性培养基（MRS）上，双歧杆菌接种于双歧杆菌选择性培养基（LB）上，均于37℃生化培养箱中厌氧培养48 h后进行菌落计数。

1.5 数据处理

试验数据经Excel 2003处理，采用SPSS 17.0软件进行方差分析，结果以“平均值±标准差”表示，用Duncan's法进行数据间的多重比较，以P＜0.05作为差异显著性判断标准。

2 结果与分析

2.1 对蛋雏鸡免疫器官指数的影响(见表3)

表3 枯草芽孢杆菌-刺五加多糖合生元对蛋雏鸡免疫器官指数的影响

由表3数据可知，与Ⅰ组相比，Ⅳ、Ⅴ组胸腺指数比分别提高了5.84%、7.39%，差异均显著（P＜0.05），Ⅲ、Ⅵ组差异均不显著（P＞0.05）；与Ⅱ组相比，差异均不显著（P＞0.05）；各试验组间Ⅳ、Ⅴ显著高于Ⅲ组（P＜0.05），Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组间差异均不显著（P＞0.05），与Ⅰ组相比，Ⅳ、Ⅴ及Ⅵ组脾脏指数分别提高了5.83%、4.85%和2.91%，差异均显著（P＜0.05），Ⅲ组差异不显著（P＞0.05）；与Ⅱ组相比，Ⅳ、Ⅴ比Ⅱ组分别提高了4.81%、3.85%，差异均显著（P＜0.05），Ⅲ、Ⅵ组差异均不显著（P＞0.05）；各试验组间，Ⅳ、Ⅴ组显著高于Ⅲ、Ⅵ组（P＜0.05），Ⅳ和Ⅴ组间差异不显著（P＞0.05）。与Ⅰ组相比，Ⅳ、Ⅴ组法氏囊指数分别提高了5.51%、7.09%，差异均显著（P＜0.05），Ⅲ、Ⅵ组间差异均不显著（P＞0.05）；与Ⅱ组相比，Ⅳ、Ⅴ及Ⅵ组比Ⅱ组分别提高了6.35%、7.94%、5.56%，差异均显著（P＜0.05），Ⅲ组与Ⅱ组相比差异不显著(P＞0.05)；各试验组间Ⅳ、Ⅴ组显著高于Ⅲ组，与Ⅵ组相比差异均不显著（P＞0.05）。

2.2 对蛋雏盲肠微生物的影响

表4 枯草芽孢杆菌-刺五加多糖合生元对蛋雏鸡盲肠微生物的影响（lg10/g）

从表4的数据可以得出，与Ⅰ组相比，盲肠大肠杆菌的数量Ⅴ、Ⅵ组分别降低了3.09%、4.40%，差异均显著（P＜0.05），Ⅲ、Ⅳ组差异均不显著（P＞0.05）；与Ⅱ组相比，Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组分别提高了5.08%、2.87%、2.22%，差异均显著（P＜0.05），Ⅵ组差异不显著（P＞0.05）；各试验组间，Ⅴ、Ⅵ组显著低于Ⅲ、Ⅳ组（P＜0.05），Ⅴ和Ⅵ组间差异不显著（P＞0.05）。与Ⅰ组相比，乳酸杆菌的数量Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组分别提高了4.44%、4.93%、2.96%，差异均显著（P＜0.05），Ⅲ组差异不显著（P＞0.05）；与Ⅱ组相比，Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组分别提高了5.35%、5.85%、3.86%，差异均显著（P＜0.05），Ⅲ组与Ⅱ组相比差异不显著（P＞0.05）；各试验组间，Ⅳ、Ⅴ组显著高于Ⅲ、Ⅵ组（P＜0.05），Ⅳ和Ⅴ组间差异不显著（P＞0.05）。与Ⅰ组相比，双歧杆菌的数量Ⅳ、Ⅴ组分别提高了2.90%、1.81%，差异均显著（P＜0.05），Ⅲ、Ⅵ组间差异均不显著（P＞0.05）；各试验组间，Ⅳ、Ⅴ组显著高于Ⅲ、Ⅵ组（P＜0.05），Ⅳ和Ⅴ组间差异不显著（P＞0.05）。

3 讨论

3.1 对免疫器官指数的影响

法氏囊、胸腺和脾脏是动物机体重要的免疫器官。它们是动物机体免疫功能的产生者和维持者，其生长发育状况和结构变化会直接影响机体免疫状态。免疫器官重量的相对大小，从某种程度上反应其免疫功能的强弱。一般认为，动物免疫器官重量增加表明机体的免疫机能提高，重量减少表明机体免疫水平下降。许多研究表明，益生素可通过调节肠道菌群平衡，改善肠道免疫屏障，进一步促进免疫器官的生长发育，提高机体免疫能力。靳二辉等研究发现，添加芽孢杆菌类益生素可明显提高21和42日龄肉鸡的法氏囊器官指数，以及42日龄肉鸡的胸腺器官指数，但对21和42日龄肉鸡的脾脏器官指数无显著影响。芽孢杆菌类益生素对肉鸡免疫器官生长发育有明显促进作用，但其与肉鸡日龄、生理状态和添加剂量密切相关。本试验中，不同水平的枯草芽孢杆菌-刺五加多糖合生元对蛋雏鸡各免疫器官指数影响也不同。添加量为0.1%和0.8%时，对蛋雏鸡胸腺、脾脏、法氏囊的指数无显著影响；当添加量为0.2%～0.4%时，作用效果均显著，对胸腺指数的影响与金霉素作用相当，对脾脏和法氏囊指数的影响作用显著优于金霉素，且添加量在0.2%～0.4%之间变化时，作用效果变化不显著。

3.2 对盲肠微生物的影响

大肠杆菌是人和动物肠道中主要且数量较多的一种细菌，一般情况下不致病，为人和动物肠道中的必不可少的常居菌；但在一定条件下，它能侵入机体的某些部位，引起肠道感染，如胆囊炎、腹膜炎、膀胱炎及腹泻等。所以大肠杆菌是一种既对机体有益又有潜在危险的双性菌，我们必须要控制它的数量水平以防止其大量生长、繁殖进而引起机体病变。而乳酸杆菌、双歧杆菌是存在于人和动物体内两种重要的益生菌，它们具有促进动物生长，调节胃肠道微生物菌群平衡，提高胃肠道健康，提高饲料利用率，提高机体免疫力等功能。人们往往把检测肠道这三种菌的数量作为评价动物肠道菌群是否平衡和健康的指标。从表4的数据及结果分析，我们可以看出，与对照组相比，0.4%和0.8%组可以显著降低盲肠大肠杆菌数量，0.1%和0.2%组效果不显著；0.1%、0.2%、0.4%组效果不如金霉素，0.8%组与金霉素作用相当。在提高乳酸杆菌和双歧杆菌数量上0.1%组效果不显著，0.2%、0.4%效果均显著，0.8%组可以显著提高乳酸杆菌的数量却不能显著提高双歧杆菌的数量，这可能与肠道内菌群之间的拮抗、协同作用有关。综合这3种菌的数量变化可得出，枯草芽孢杆菌-刺五加多糖合生元可以改善盲肠微生物平衡，且0.4%组效果最好。

4 结论

在本试验条件下，枯草芽孢杆菌-刺五加多糖合生元产品对蛋雏鸡免疫器官指数及盲肠微生物有显著改善作用，其效果与添加量有关，就免疫器官指数而言，添加量为0.2%和0.4%时可以显著提高蛋雏鸡胸腺、脾脏、法氏囊器官指数，且0.2%与0.4%组差异不显著；在改善盲肠微生物平衡方面，添加量为0.4%时可以显著降低大肠杆菌数量，提高乳酸杆菌数量和双歧杆菌数量。综合考虑，0.4%组在提高免疫器官指数、改善盲肠微生物平衡方面效果较佳。

（参考文献18篇，刊略，需者可函索）