卵巢癌腹腔积液中ERCC1表达与铂剂相关性研究

卵巢癌腹腔积液中ERCC1表达与铂剂相关性研究

孔雁1，张宁1，贾琳2，左静1，张敏3，刘亮1，刘荣风1，姜达1

(1.河北医科大学第四医院,河北 石家庄 050000;2.河北省保定市第三医院,河北 保定 071000;3.河北省邢台市人民医院,河北 邢台 054000)

摘要：目的探讨卵巢癌恶性腹腔积液中ERCC1表达水平与铂类药物化疗疗效及预后关系。方法存在恶性腹腔积液的晚期卵巢癌患者腹水标本65例，采用流式细胞术检测腹水肿瘤细胞ERCC1蛋白表达水平。Kaplan Meier生存曲线分析比较不同ERCC1表达水平患者的中位生存期和无病进展时间。结果ERCC1的阳性率为38.5%。ERCC1低表达者含铂方案化疗效果优于高表达者,但两者间的差异无统计学意义(P>0.05);ERCC1低表达的患者总生存期(overall survival，OS)明显长于高表达者(P=0.03)。结论腹腔积液中肿瘤细胞ERCC1表达与卵巢癌预后具有相关性，与铂剂化疗疗效的关系尚待进一步明确。

关键词：ERCC1；卵巢癌；腹腔积液；铂剂

中图分类号：R 737.31

DOI：10.3969/j.issn.1673-1492.2015.03.016

作者简介：单喜花(1968-),女，河北南皮人，主治医师，主要研究方向：宫颈病变；不孕不育。

作者简介：郑建兴(1976-)，男，河北唐山人，主治医师，主要研究方向：肝胆胰脾疾病的诊治。

Studies on Correlation between ERCC1 Expression and Platinum in Ovarian Carcinoma Ascites

KONG Yan1,ZHANG Ning1,JIA Lin2,et al

(1.The Fourth Hospital of Hebei Medical University,Shijiazhuang 050000,Hebei China;

2.The Third Hospital of Baoding,Baoding 071000,Hebei China)

Abstract:ObjectiveTo investigate the expression of excision repair cross complementation group 1(ERCC1)in ovarian carcinoma ascites and explore the correlation of ERCC1 expression with therapeutic effect of cisplatin and survival time.MethodsAscites were collected from 65 patients from March 2012 to March 2014 at the Fourth Hospital of Hebei Medical University,while the expression of ERCC1 protein was studied by immunocytochemistry staining,and Kaplan Meier survival curve analysis was used to compare median overall survival time and median progression free survival time among the patients of with different expression of ERCC1.ResultsThe positive rates of ERCC1 expression in ovarian Carcinoma samples were 38.5%,while the therapeutic effect of cisplatin in patient with ERCC1 low expression was obviously better than that with ERCC1 high expression(P>0.05).The median overall survival time and progression free survival time of patients with ERCC1 low expression were obviously longer than that with high expression(P=0.03).ConclusionsThe ERCC1 expression in ascites could correlate with prognosis in ovarian carcinoma.

Key words:ERCC1；ovarian carcinoma;ascites;cisplatin

卵巢癌是女性常见恶性肿瘤，治疗以含铂方案化疗为主，根据对铂类的敏感程度，分为铂剂敏感及铂剂耐药两大类型，对铂类药物原发及继发耐药是导致化疗失败、病情进展的主要原因。然而，目前缺乏铂剂疗效预测因子，在治疗初期无法判断患者对铂剂的敏感程度，故化疗方案的选择有一定盲目性。已有研究表明，卵巢癌组织中DNA修复基因核苷酸切除修复交叉互补基因1(excision repaircross complementation group 1,ERCC1)不仅是生存预后指标，也可能预测含铂化疗方案的疗效。我们通过检测卵巢癌患者恶性腹腔积液中ERCC1表达水平，研究了其表达情况与铂类为主的化疗方案疗效及预后的关系。

1资料和方法

1.1　一般资料

2012-03—2014-03月河北医科大学第四医院收治的存在恶性腹水的晚期卵巢上皮癌患者腹水标本65例，临床分期均为IV期，PS评分0~2分。一线给予紫杉醇联合铂剂(顺铂或卡铂)方案化疗。其中浆液性囊腺癌28例，黏液性囊腺癌15例，子宫内膜样癌10例，其他类型12例；高、中分化癌27例，低分化癌38例。随访至2014-12月,随访率为100%,其中死亡23例。

1.2　方法

1.2.1应用肿瘤细胞采集器收集肿瘤细胞通过腹腔穿刺引流收集腹水标本500 mL,全部用肿瘤细胞采集器收集细胞，取出滤膜涂片两张,通过HE染色进行细胞学诊断。然后将滤膜放入盛有10 mL PBS离心管中涮洗滤膜,1 000 r·min-1离心5 min,弃上清。加入适量PBS调整细胞浓度为1×106/mL，制成单细胞悬液,进行流式检测。如不能及时检测,可加入70%乙醇固定,4 ℃冰箱长期保存。

1.2.2流式细胞术检测ERCC1的蛋白表达取单细胞悬液0.1 mL,加入单克隆抗体ERCC1工作液0.1 mL，室温孵育30 min,加入PBS缓冲液10 mL洗涤1次(去除未与细胞结合的一抗),离心弃上清,加入二抗工作液100 μL,避光室温孵育30 min,加入PBS缓冲液10 mL离心,弃上清(除去未与一抗结合的二抗),然后加入PBS 1 mL经500目铜网过滤后上机检测荧光的强弱。该实验需设细胞悬液只加入一抗或二抗作阴性对照或本底对照。

1.2.3ERCC1蛋白表达量判定以荧光指数(fluoresence index,FI)表示相对含量,公式为：FI=(样品蛋白表达的平均荧光强度-对照样品平均荧光强度)/正常对照样品平均荧光强度。如果FI>1.0为阳性表达,FI≤1.0为阴性表达。

1.3　疗效评价

疗效按实体瘤评价标准(RECIST 1.1):完全缓解(CR)、部分缓解(PR)、疾病稳定(SD)、疾病进展(PD)。近期客观有效为RR=CR+PR,有效者1个月后检查确认。毒性反应按照NCI抗癌药物毒副反应分级标准评价。总生存期(overall survival，OS)为自治疗开始到患者死亡或失访,若末次随访仍然存活则定为截尾值。无进展生存期(progression free survival，PFS)为自治疗开始到疾病进展,均以月为单位计算。

1.4　统计学方法

应用SPSS 13.0统计软件包处理数据,蛋白表达水平与临床病理指标采用χ2检验,采用Kaplan Meier生存分析法进行单因素生存分析，并进行Log-rank时序检验,P<0.05为差异具有统计学意义。

2结果

2.1　ERCC1表达情况及与临床病理特征的关系

65例NSCLC患者中，ERCC1阳性表达25例，阳性表达率为38.5%(25/65)。经χ2检验，与年龄、分化程度、组织类型、淋巴结转移均无相关性(P>0.05)(表1)。

表1　ERCC1与临床病理特征的关系　( n)

2.2　ERCC1表达情况与化疗疗效的关系

65例患者中一线紫杉醇联合铂剂(顺铂或卡铂)方案化疗CR者1例,35例PR(53.8%),10例SD(15.4%),19例PD(29.2%)。总客观缓解率RR(CR+PR)为55.38%。ERCC1表达阳性患者中，RR为44%(11/25);表达阴性患者中，RR为62.5%(25/40)，两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。

表2　ERCC1蛋白表达与化疗敏感性的关系(%)

2.3　ERCC1表达情况与生存的关系

65例患者中23例死亡，中位OS为18个月，中位PFS为6个月。ERCC1阳性表达组中位OS为9个月，中位PFS为4.1个月;ERCC1阴性表达组中位OS为18.9个月，中位PFS为6.8个月，OS比较差异有统计学意义(χ2=5.75，P=0.03)。

3讨论

铂类药物是卵巢癌治疗的基石，目前尚缺乏明确的可以预测化疗疗效及毒副作用的生物标记物，造成化疗的盲目性及过度性，给患者带来经济及身体上的负担。近年来，有关铂类药物化疗标记物的研究较多，其中ERCC1作为参与DNA修复的关键基因是目前研究的热点。铂类药物主要作用于肿瘤细胞DNA分子的鸟嘌呤，通过与DNA结合形成铂类-DNA复合物，干扰肿瘤细胞DNA的合成，并且产生细胞毒性作用[1]。ERCC1是核苷酸切除修复(nucleotide excision repair，NER)途径的关键基因，而NER途径是DNA修复的主要途径[2]，通过这条通路能够阻断铂类和DNA结合，并且能修复DNA链间的交联，最终导致耐药的发生。

多项研究表明卵巢癌组织中ERCC1表达水平与铂剂为主的化疗方案的疗效具有相关性，体外试验也证实恶性胸腔/腹腔积液中肿瘤细胞的ERCC1 mRNA的表达水平与顺铂体外药物敏感性相关，临床可将其作为含铂类方案化疗敏感性及预测预后的指标之一[3]。晚期肿瘤患者组织标本常不易取得，但多易出现恶性腹腔积液，其中含有大量肿瘤细胞，有关恶性腹腔积液中ERCC1表达水平与铂类药物化疗疗效关系的临床研究甚少。

我们收集卵巢癌腹腔积液中的肿瘤细胞，测定ERCC1蛋白表达情况，研究结果提示ERCC1蛋白的阳性表达与分化程度、年龄、组织学类型、淋巴结转移无关，与梁梦等[4]报道一致。ERCC1与铂剂疗效的关系已有许多报道，周英琼等[5]研究证实,封闭或下调ERCC1基因，可减弱卵巢癌耐药细胞的增殖及侵袭能力，增强其对顺铂的敏感性。张自森等[6]研究发现腹腔积液中ERCC1 mRNA的表达与腹腔热灌注顺铂疗效显著相关，顺铂治疗有效患者腹腔积液中ERCC1 mRNA存在低表达。本研究提示，ERCC1阴性表达者疾病缓解率较阳性者高，但差异无统计学意义，仍需扩大样本量进一步证实。有关ERCC1与预后的报道较少，本研究提示ERCC1阴性表达者较阳性表达者可获得更长的PFS和OS，差异有统计意义，与肺癌内的研究结论一致[7]。刘小丽等[8]研究发现ERCC1阳性表达与预后密切相关，认为高表达患者临床分期较早，术后生存期较长。研究结论存在分歧的原因可能与DNA修复能力在不同期别肿瘤作用不同有关。DNA修复能力是与肿瘤易感性和化疗敏感性密切相关的双刃剑，在肿瘤早期，DNA修复能力强，肿瘤易感性低，然而在肿瘤治疗过程中，DNA修复能力的增加却阻碍了疗效的发挥[9]。

综上所述，我们的研究发现腹腔积液中肿瘤细胞ERCC1表达与卵巢癌的预后具有相关性，与铂剂化疗疗效的关系仍待开展多中心、随机化、前瞻性的临床研究进一步明确。对于伴有恶性腹腔积液而无法获得组织标本的卵巢癌患者而言,以腹腔积液为基础对相关预后、疗效预测分子分析是一条可行的途径。

参考文献：

[1]Hildebrandt M A，Gu J，Wu X.Pharmacogenomics of platinum-based chemotherapy in NSCLC[J].Expert Opin Drug Metab Toxicol，2009，5(7):745-755.

[2]Roth J A，Carlson J J.Prognostic role of ERCC1 in advanced non-small-cell lung cancer:A systematic review and meta-analysis[J].Clin Lung Cancer，2011，12(6):393-401.

[3]王立峰,殷海涛,钱晓萍,等.恶性胸腔和腹腔积液中ERCC1和BRCA1 mRNA的表达水平与顺铂敏感性的关系[J].肿瘤,2010，30(3)：226-231.

[4]梁梦，周英琼，郭芳,等.GST-ERCC1 MRP和LRP在卵巢癌组织中的表达及意义[J].中国现代医学杂志,2012，22(5)：10-14.

[5]周英琼,梁梦,黎雁英,等.ERCC1反义寡核苷酸对人卵巢癌细胞增殖、周期、药物敏感性及侵袭能力的影响[J].中国现代医学杂志,2013，23(29)：25-29.

[6]张自森,李灿宇,巴楠，等.晚期卵巢癌患者外周血与腹腔积液中ERCC1基因表达研究[J].中国妇幼保健,2013，28(20)：3342-3344.

[7]Simon G R，Schell M J，Begum M，et al.Preliminary indication of survival benefit from ERCC1 and RRM1-tailored chemotherapy in patients with advanced non-small-cell lung cancer:Evidence from an individual patient analysis[J].Cancer，2012，118(9):2525-2531.

[8]刘晓丽,马礼鸿,王全义,等.COX-2、ERCC1在卵巢癌组织中的表达及意义[J].中国病原生物杂志,2013,8(8):739-741.

[9]Wei Q，Frazier M L，Levin B，et al.DNA repair:A double-edged sword[J].J Natl Cancer Inst，2000，92(6):440-441.

[责任编辑：李蓟龙英文编辑：谢利峰]

通信作者：张国志(1964 -)， 男，吉林双辽人，主任医师，教授，硕士生导师，主要研究方向：普外科各类疾病的诊治。