培元通脑胶囊对帕金森病小鼠的作用

培元通脑胶囊对帕金森病小鼠的作用

霍颖浩王进1张春霞2

(河北医科大学第二医院神经内科，河北石家庄050000)

摘要〔〕目的研究培元通脑胶囊对帕金森病小鼠的作用。方法选取72只小鼠作为实验对象，随机抽取12只作为正常对照组，60只制造帕金森病动物模型。采用1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氢吡啶(MPTP)制作帕金森病动物模型，并随机分为模型组、多巴丝肼组、0.6 g/kg培元通脑组、1.2 g/kg培元通脑组及1.8 g/kg培元通脑组，每组12只。模型组不给予干预措施，其余各组根据组别分别给予生理盐水、多巴丝肼及不同剂量培元通脑胶囊处理。比较各组帕金森病小鼠活动能力、行为学、爬杆时间及纹状体内DOPAC、DA与HVA水平变化。结果MPTP诱发的帕金森病模型组小鼠活动能力、行为学及爬杆时间指标水平明显低于正常组；与模型组帕金森病小鼠比较，培元通脑组帕金森病小鼠活动能力、行为学及爬杆时间均有所改善，纹状体内DOPAC、DA与HVA水平明显升高(P<0.05)。结论培元通脑胶囊能够有效改善MPTP对小鼠纹状体造成的损伤影响，减轻盘锦森小鼠震颤症状持续时间，促进小鼠纹状体内DOPAC、DA与HVA水平升高，是一种有效治疗帕金森病的药物。

关键词〔〕帕金森；培元通脑胶囊；纹状体

中图分类号〔〕R588〔文献标识码〕A〔

基金项目：河北省卫计委青年科技课题(No.20110368)

1药学部2肾内科

第一作者：霍颖浩(1978-)，男，主治医师，主要从事脑血管疾病、老年病研究。

帕金森病是由中脑黑质多巴胺能神经元发生变性坏死引起的一种神经系统疾病〔1〕，起病隐匿、病程进展较慢〔2〕，主要病理改变为多巴胺能神经元坏死，导致纹状体内多巴胺含量减少〔3〕，是遗传易感性、年龄老化、环境因素共同作用的结果〔4〕。目前，临床治疗帕金森病常用方法为多巴丝肼等西药治疗，但不良反应较多，严重者可发生血液及淋巴系统疾病〔5〕。培元通脑胶囊是由何首乌、熟地黄、鹿茸、龟甲及天冬等多种成分构成的中药制剂〔6〕，具有益肾填精、熄风通络之效。本研究探讨培元通脑胶囊对帕金森病小鼠的作用。

1材料与方法

1.1药物与试剂1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氢吡啶(MPTP)购自美国Sigma公司，培元通脑胶囊(河南羚锐制药股份有限公司，国药准字Z20000022)，多巴丝肼片(上海罗氏制药有限公司，国药准字H99010318)，所用酸、盐等试剂为国产分析纯。

1.2实验动物选取72只SPF级C57BL 6J小鼠作为实验对象，7～9周龄，体重19～21 g，实验动物由河北医科大学提供。采取分笼自由进食、饮水饲养方式，自控日光灯照射维持昼夜交替规律，每天早晨7∶00开启日光灯，晚上7∶00关闭日光灯，室内温度保持在(21±2)℃，湿度控制在50%～60%。

1.3器材Vertex Sti P5000高效液相色谱仪购自上海禾工科学仪器有限公司，波长范围190～700 nm。

1.4制造动物模型与给药正常组小鼠不给予任何处理，其余小鼠腹腔注射MPTP制造帕金森病模型，给药量为25 mg/kg，连续给药7 d。正常组小鼠为空白对照，腹腔注射生理盐水。模型组小鼠作为病理对照，同样腹腔注射生理盐水。多巴丝肼组给予多巴丝肼片灌胃治疗，给药量为0.25 g/kg；培元通脑组取3个剂量，分别为0.6、1.2、1.8 g/kg，连续给药21 d，于第21天给药后测定各组小鼠行为学变化。

1.5观察指标(1)小鼠活动能力检测方法〔7〕：将小鼠放置在开放实验盒中，自由活动5 min后，计数3 min内小鼠直立次数、理毛次数及活动轨迹与试验盒场地格子的交点数。(2)小鼠行为学检测〔7〕：小鼠持续剧烈的全身震颤为5分；四肢及头部表现连续颤动为4分；呈明显间断性颤动为3分；仅头部表现间断性颤动为2分；偶尔观察到肌肉颤动，但头部无明显颤动表现为1分；无震颤现象为0分。(3)小鼠爬杆活动〔7〕：自制长度为40 cm、直径1.5 cm的长杆，一端固定一个直径为10 cm的软木球，为增加摩擦可将长杆用纱布包缠，固定软木球一端向上，将小鼠头朝上放置于靠近软木球端，观察小鼠自起始处至软木球折返长杆底部所需时间〔8〕。(4)小鼠纹状体内3，4-二羟基苯乙酸(DOPAC)、多巴胺(DA)及3-甲氧基4-羟基苯乙酸(HVA)水平检测〔7〕：帕金森病小鼠活动能力、行为学及爬杆指标检测完成后，将小鼠麻醉处死，取小鼠头部置于预先准备好的冰盒中，剪开头部取出纹状体部位并称重，转移至1.5 ml EP管中，向管中加入预冷0.15 mol/L高氯酸0.6 ml，二羟基苯甲胺氢溴酸盐0.4 ml，高压双蒸水0.4 ml，经超声破碎5 s，4℃条件下12 000 r/min离心25 min，取上清液采用高效液相色谱仪分析纹状体内DOPAC、DA及HVA水平。

1.6统计学分析采用SPSS17.0软件行F检验。

2结果

2.1培元通脑胶囊对帕金森病小鼠活动能力的影响模型组帕金森病小鼠直立、理毛及活动轨迹与格子交点数指标与正常组比较明显降低，多巴丝肼组及不同给药量培元通脑组帕金森病小鼠各指标与模型组比较明显改善，与模型组帕金森病小鼠活动能力指标比较，培元通脑组帕金森病小鼠活动能力指标差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

永嘉水则云：平字上高七寸合开陡门，至平字诸乡合宜，平字下低三寸合闸陡门。规定涨水淹没“开”字便开闸放水,以免农田受灾；落水露出“平”字就关闭闸门，进行蓄水，维持温瑞平原农业、百姓生活用水。通常闸工将根据闸前水位变化，严格参照此规定开闭闸门。由此可以断定，“开”字的顶部高程就是千年前温瑞塘河的警戒水位，“闸”字的顶部高程为正常水位，古人在1100年前就已掌握了当地水文规律，并能根据水情进行水闸调节。

2.2培元通脑胶囊对帕金森病小鼠行为学的影响与模型组震颤症状评分比较，多巴丝肼组及不同给药量培元通脑组震颤症状评分均明显降低(P<0.05)。见表2。

2.3培元通脑胶囊对帕金森病小鼠爬杆活动的影响与模型组帕金森病小鼠爬杆时间比较，多巴丝肼组及不同给药量培元通脑组帕金森病小鼠爬杆时间均缩短(P<0.05)。见表2。

表1　培元通脑胶囊对帕金森病小鼠

表2　培元通脑胶囊对帕金森病小鼠行为

2.4培元通脑胶囊对帕金森病小鼠纹状体内DOPAC、DA及HVA水平的影响见表3。模型组帕金森病小鼠纹状体内DOPAC、DA及HVA水平与正常组小鼠各指标比较均显著降低；与模型组帕金森病小鼠纹状体内DOPAC、DA及HVA比较，多巴丝肼组及不同给药量培元通脑组相应指标水平均有所改善，且培元通脑组随着治疗给药量增加，帕金森病小鼠纹状体内DOPAC、DA及HVA水平逐渐升高(P<0.05)。

表3　培元通脑胶囊对帕金森病小鼠纹状体内DOPAC、

3讨论

帕金森病是我国常见老年神经系统疾病〔8，9〕。帕金森病患者会发生震颤、运动迟缓及动作协调性降低等症状，可导致患者生活能力明显下降，严重者生活不能自理〔10〕。目前，帕金森病发病原因尚未明确，临床治疗帕金森病主要采取药物治疗，常用药物有抗胆碱、金刚烷胺及左旋多巴等，通过提高多巴胺效应、促进神经末梢合成并释放多巴胺或使用多巴胺前体在体内代谢转化为多巴胺发挥替代功效，以实现治疗帕金森病的目的〔11〕。但长期西药治疗，患者不良反应增加〔12〕。培元通脑胶囊是由熟地黄、龟甲、肉桂及炙甘草等13味中药材研制而成的中药制剂，具有益肾填精、熄风通络功效。

本研究结果显示，MPTP是一种嗜神经毒性物质，通过对线粒体中呼吸链酶复合体产生抑制作用，减少ATP合成，并产生活性氧基团致使细胞凋亡，诱发小鼠中脑黒质纹状体内多巴胺能神经元变性坏死，形成帕金森病动物模型。多巴丝肼是帕金森病治疗常用药物，由此可以认为培元通脑胶囊对帕金森病小鼠纹状体内多巴胺能神经元损伤具有改善功效。培元通脑胶囊能够缓解帕金森病症状表现，改善帕金森病引起的多巴胺能神经损伤病变程度。帕金森病小鼠纹状体内DOPAC、DA及HVA水平显著降低，培元通脑组小鼠纹状体内DOPAC、DA及HVA水平显著升高，说明培元通脑胶囊对帕金森病多巴胺能神经元损伤具有恢复作用，促进多巴胺合成，减轻多巴胺缺乏引起的震颤、运动迟缓及协调性降低等帕金森病症状。

4参考文献

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〔2015-07-16修回〕

(编辑曲莉)