红色毛癣菌致脓癣1例

石庆 张丽 孙毅 陈启红 曾同祥（湖北省荆州市中心医院皮肤病与性病科，荆州434100）



红色毛癣菌致脓癣1例

石庆 张丽 孙毅 陈启红 曾同祥
（湖北省荆州市中心医院皮肤病与性病科，荆州434100）

【摘要】目的 报告1例由红色毛癣菌引起的脓癣，通过病发分子鉴定明确病原菌，早期诊断并进行经验性治疗。方法提取病发及脓液中的真菌DNA，进行ITS区扩增、测序和比对；同时，对病发和脓液进行真菌镜检及培养，对培养阳性菌落进行形态学、分子生物学鉴定以及体外药敏检测。结果 病发和脓液DNA提取及ITS区鉴定提示红色毛癣菌；真菌镜检阴性；真菌培养经形态学和分子生物学鉴定提示红色毛癣菌。体外药物敏感性检测显示其对特比萘芬高度敏感。诊断为红色毛癣菌所致头癣，予口服特比萘芬125 mg／d，治疗1个月后明显改善。结论 直接提取病变组织DNA进行早期分子诊断能够能尽早明确致病菌种并指导用药。

【关键词】红色毛癣菌；脓癣；非培养诊断

[Chin J Mycol，2015，10（5）：299⁃301]

头癣系头皮和头发的皮肤癣菌感染，根据病原菌及临床表现的不同，可分为黄癣、白癣、黑癣和脓癣[1]。脓癣是炎症性头癣，是宿主对皮肤癣菌的超敏反应，可引起瘢痕性脱发，严重影响患者身心健康[2]。传统的诊断方法主要根据直接镜检、真菌培养及鉴定[3]，不仅可明确致病菌种，还可以提供药物敏感性测试结果，但耗时较长；分子生物学诊断不仅可用于培养菌落的菌种鉴定，还可以用于病变组织的诊断，可缩短诊断时间，明确菌种，但后者无法提供药物敏感性结果，因而不同方法各有利弊。

本例结合了病发分子诊断和传统真菌病原学检测方法，早期诊断，并进行经验性抗真菌治疗，真菌培养及药敏进一步证实致病菌种及药物敏感性。

1　 临床资料

患儿，女，6岁，体重25 kg，因头顶部斑块伴不适2个月余来我院门诊就诊。2个月前患儿无明显诱因出现头顶部斑块，逐渐增大，伴破溃、渗出，偶有瘙痒、疼痛等不适。曾于多家医院诊治未见明显好转。既往史、家族史无殊。家中未饲养宠物。体格检查：一般情况可，系统查体未见异常。皮肤科检查：头顶可见一约4 cm×5 cm大小红色斑块，境界较清楚，质地柔软，其上可见大量毛囊性脓疱及脓痂。毛发易拔除，压痛（＋），见图1。

2　 实验室检查

2．1 直接镜检及培养

断发直接镜检未找到菌丝、孢子；脓液直接镜检见大量孢子，未找到菌丝（见图2a）。断发中脓液细菌培养阴性。收集脓液及断发，提取DNA，同时将脓液及断发分别接种于沙氏培养基（含卡那霉素）中，置于27℃培养箱中培养。

2．2 病发及脓液分子鉴定

取病发10余根及脓液于1．5 mL离心管中，加入DNA提取液及少量玻璃珠震荡10 min后离心收集上清，采用EasyPure Plant Genomic DNA Kit（北京全式金生物技术有限公司）提取DNA，后利用引物ITS1 5＇⁃TCCGTAGGTGAACCTGCGG⁃3＇和ITS4 5＇⁃TCCTCCGCTTATTGATATGC⁃3＇扩增所提取真菌DNA的ITS区。将PCR扩增产物送上海生工进行测序，测序结果登录GenBank进行Blast比对，结果与红色毛癣菌的序列一致性为100%。

2．3 真菌培养及分子鉴定

取培养真菌于燕麦琼脂培养基、察氏琼脂培养基中培养（见图2b、2c），行形态学观察，同时玻璃珠法提取菌株DNA，并利用ITS1、ITS4扩增及测序鉴定，于Gene Bank比对。

2．4 药物敏感性检测

伊曲康唑（Sigma⁃Aldrich，批号84625⁃61⁃6，纯度＞99%）、特比萘芬（Sigma⁃Aldrich，批号78628⁃ 80⁃5，纯度＞99%）及伏立康唑（Sigma⁃Aldrich，批号182369⁃73⁃9，纯度＞99%），试验时用二甲基亚砜将3种药物溶解成储存液，浓度均为1 600 mg／L。参考美国临床实验室标准研究所（CLSI）M38⁃A2方案[4]，近平滑念珠菌ATCC22019作为试验的质控菌株，药敏板按照方案推荐方法配制。将配好的药敏板置于35℃孵育72 h后肉眼观察判读结果，最低抑菌浓度（MIC）定义为肉眼观察到的80%真菌生长受抑制的最低药物浓度。

3　 诊断与治疗

该例患者病发直接镜检未见菌丝成分，仅脓液中存在大量孢子，本文根据早期病发的分子诊断结果及临床表现诊断为红色毛癣菌所致脓癣，经验性给予患儿特比萘芬125 mg每日口服，并辅以泼尼松片，5 mg／d，口服1周后停药；同时剪发、消毒、联苯苄唑洗剂外洗及特比萘芬乳膏外用。治疗1个月后复诊。经菌落分子生物学及形态学鉴定，分离菌种证实为红色毛癣菌，与早期分子鉴定结果一致。微量液基稀释法测得伊曲康唑、特比萘芬及伏立康唑对该株红色毛癣菌的MIC为：2 μg／mL、0．06 μg／mL及0．25 μg／mL。药敏实验提示其对特比萘芬敏感。患儿服药期间无任何不良反应。复诊时见皮疹明显好转，红斑多数消退，无脓疱、丘疹，局部形成瘢痕，暂无毛发生长（见图3）。提示病发的分子检测可以早期诊断，指导治疗。

图1　 头顶部毛囊性脓疡，部分融合成，表面附脓痂 图2　 a．脓液直接镜检：仅见大量孢子，未找到菌丝；b．红色毛癣菌（镜下100倍）；c．红色毛癣菌大体：表面白色绒毛状（察氏固体培养基，27℃培养7 d） 图3　 治疗1个月后皮损基本消退，无脓疱、丘疹，局部形成瘢痕Fig．1 Kerion on the forehead：soft abscess on the forehead with partial fusion and puric crust Fig．2 a．Microscopic examination：fungal spore in the fester；b．Culture：plenty of hyline lateral microconidia；c．Fungal colony on CZA：white villiform on the surface Fig．3 The lesion cured after 1 month terbinafine therapy，while leaving scar

4　 讨 论

脓癣是炎症性头癣中的一种，是对皮肤癣菌的超敏反应。它临床表现可为炎性丘疹、斑块、脓疱、脓肿或结节等，常伴破溃、糜烂、结痂及脱发，可有瘙痒或疼痛[1⁃2]。常由亲土性或亲动物性真菌（如犬小孢子菌、趾间型毛癣菌等）引起，由红色毛癣菌引起的脓癣较少见。因其临床表现的多样性和不典型性，临床易误诊。脓癣临床治疗主要依靠抗真菌药物治疗，目前常用伊曲康唑、伏立康唑或特比萘芬，不同的致病菌种对这些抗真菌药物的敏感性存在差异[1]，因此及时准确的诊断及菌种鉴定对于指导临床用药意义重大。

传统诊断方法主要包括真菌的直接镜检和培养，直接镜检阳性率低，而采用传统的培养法鉴定菌种耗时长，至少需要1～2周[1]，给临床诊治带来不便。而病变部位分子鉴定能提早明确致病菌种并为经验性治疗用药提供依据。本例患儿由于镜检取断发及脓液行直接镜检，脓液中见大量孢子，未找到菌丝，断发中未见菌丝、孢子。培养需耗时1周，然而采用病发和脓液直接提取DNA鉴定在2 d内即可完成，大大缩短了临床诊疗的进程。

虽然分子诊断可以给临床诊治带来便捷，但是目前致病真菌对药物敏感性的检测只能对培养获得的纯菌进行，并且培养菌株的分子生物学和形态学鉴定结果可与早期诊断获得的结果相互验证。传统的真菌培养仍是非常必要的。

本例患儿就诊时取病发做镜检和培养，同时行早期分子检测，结果吻合，均为红色毛癣菌。经验性给予特比萘芬治疗的同时，对培养出来的红色毛癣菌进行了药物敏感性检测，发现其对特比萘芬高度敏感。患者治疗1个月后获得较好的临床效果。嘱患儿继续口服特比萘芬治疗。

参考文献

[1] 王端礼．医学真菌学⁃实验室检验指南[M]．北京：人民卫生出版社．2005：164．

[2] Larry EM．Current concepts in systemic and topical therapy for su⁃perficial mycoses[J]．Clin Dermatol，2010，28（2）：212⁃216．

[3] Claus S，Jean⁃Philippe B，Bernard M．Updates on the epidemiolo⁃gy of dermatophyte infections[J]．Mycopathologia，2008（5⁃6），166：335⁃352．

[4] Clinical and Laboratory Standards Institute．Reference method for broth dilution antifungal susceptibility testing of filamentous fun⁃gi；Approved standard．Document M38⁃A2[S]．CLSI，Wayne，PA，USA，2008．

[本文编辑] 王 飞

·综述·A case of kerion caused by Trichophyton rubrumSHI Qing，ZHANG Li，SUN Yi，CHEN Qi⁃hong，ZENG Tong⁃xiang

（Department of Dermatology and Venereology，Jingzhou Central Hospital，Jingzhou 434100，China）

【Abstract】Objectives We reported a girl with kerion due to Trichophyton rubrum．By molecular diagnosis of affected hairs，the pathogenic isolate was identifiedso that direct treatment could be executed．Methods As well as direct microscopic examination and fungal culture of affected hairs，fungal DNA of them was extracted，and amplification of ITS and sequencing．Results The molecular identification of affected hairs revealed T．rubrum，which was in accordance with fungal culture from the affected hairs．The patient was diagnosed as kerion due to T．rubrum and treated with oral terbinafine 125 mg per day．The lesions subsided after 1 month．Conclusion

PCR⁃based molecular diagnosis of DNA from hair could help to identify pathogenic fungus promptly and indicate proper antifungal treatment．

【Key words】T．rubrum；kerion；culture⁃independent diagnosis

[收稿日期]2015⁃07⁃11

基金项目：国家自然科学基金（81401677）

【文章编号】1673⁃3827（2015）10⁃0299⁃03

【文献标识码】A

【中图分类号】R 756．1

通讯作者：孙毅，E⁃mail：710514760＠qq．com

作者简介：石庆，女（汉族），本科，副主任医师．E⁃mail：jzzxyypfk＠163．com