利用原子荧光光谱法检测雏鸡肝脏硒含量

利用原子荧光光谱法检测雏鸡肝脏硒含量

刘哲卢义梁建斌1于德斌1武瑞1

(黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院，黑龙江大庆163319)

摘要〔〕目的硒作为人和动物生长发育的必需的微量元素，影响了动物的消化系统，探讨雏鸡肝脏硒含量的检测方法。从而为硒缺乏的测定，为以后的科研实验做充分准备。方法以雏鸡为实验动物，应用原子荧光吸收法测量雏鸡全血及肝脏中的硒含量。建立低硒雏鸡模型。结果第3天试验组血浆及肝脏组织的硒含量明显减少，并且缺硒组7 d、14 d 血浆与肝脏硒含量依次递减。正常组雏鸡血硒及肝脏内硒含量正常。由此结果可确定低硒雏鸡模型复制成功。结论结果表明氢化物原子荧光光谱法测定雏鸡血浆与肝脏中硒含量具有精确、灵敏、干扰小、成本低等优点。

关键词〔〕硒；原子荧光光谱法

中图分类号〔〕R826.15〔文献标识码〕A〔

基金项目：国家自然科学

通讯作者：武瑞(1967-)，男，教授，博士，主要从事动物营养与临床兽医学研究。

1黑龙江八一农垦大学动物科学技术学院

第一作者：刘哲(1978-)，女，在读博士，主要从事细胞凋亡及临床兽医学研究。

The detection of chickling selenium content by atomic fluorescence spectrometry

LIU Zhe,LU Yi,LIANG Jian-Bin,etal.

Heilongjiang Bayi Agricaltural University,Daqing 163319,Heilongjiang,China

Abstract【】ObjectiveTo investigate the detection method of selenium in chicken liver.MethodsAtomic fluorescence absorption was used to measure selenium content in chicks plasma and liver，and low selenium chicks model was set up. Results At the third day,the selenium content of plasma and liver tissue of experimental group were decreased significantly;and at 7th,14th day,the selenium contents of selenium deficiency group were reduced in plasma and liver. The selenium contents in the liver and blood of normal group were normal.The low selenium chicks model was copied successfully.ConclusionsThe determination of selenium contents in chicken blood and liver by hydride atomic fluorescence spectrometry has advantages of accuracy,sensitivity,interference and low cost.

【Key words】Selenium;Atomic fluorescence spectrometry

硒作为人和动物生长发育的必需微量元素，对维持生命活动和提高生产性能发挥着至关重要的作用。但硒的最佳摄入量仍不明确，不合理的补充硒可能会危害人体的健康〔1，2〕。本文以雏鸡为实验动物，应用原子吸收法测量雏鸡血及组织中硒含量，建立低硒雏鸡模型，为以后的科研实验做充分准备。

1材料和方法

1.1试剂与仪器氢氧化钠，5%HCl，硫酸，过氧化氢溶液，Se标准溶液 GBW(E)，3.0%KBH4，均购自上海生工公司。双道原子荧光光度计AFS-920型，北京吉天仪器有限公司； DL-10型离心机：上海安亭仪器有限公司；AL204型电子天平：梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司。

1.2日粮组成实验组(A组)组饲喂低硒饲料，以低硒玉米-豆粕型为基础日粮，其他成分按8730商品代蛋用雏鸡饲料营养标准配置。对照组(B组)予8730商品代蛋用雏鸡饲料。

1.3动物与分组日龄SPF蛋用雏鸡120只，公母各半，购自中国农科院哈尔滨兽医研究所实验动物中心。随机分为两组，实验组饲喂低硒饲料，观察组饲喂正常硒水平饲料。饲喂14 d，动物饲养于室温20℃±2℃，相对湿度40%～50%，严格参考雏鸡饲养管理要求进行，第1周用开料盘，第2周用料槽自由采食和饮水。加强环境管理，确保试验动物不受外来病原微生物的影响。

1.4测定饲料、血浆及肝脏中的硒含量在饲养3、7、14 d时间点，分别从两组随机挑选9只雏鸡，采血，加抗凝保存，检测血浆、肝脏组织中硒含量(黑龙江八一农垦大学分析测试中心检测)。检测条件：倍增管伏高压300 V，原子化器高度8 mm，灯电流50 mA，载气流速1 000 ml/min，原子化器高度11 mm；注入量0.5 ml。还原剂3.0%KBH4，试液介质5%HCl。使用双道原子荧光光度计在31℃ 54%RH下低硒样品呈深红色液体，对照组为深红棕色液体。标准浓度(ng/ml)分别为1.0、2.0、4.0、8.0～10.0 ng/ml时，荧光强度分别为82.95%、148.41、309.44、593.41、769.35，载距：1.443 4，斜率：75.795 4，相关系数r=0.999 6。标准曲线见图1。

图1　标准曲线图

精密度：在重复条件下获得的三次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。A1～A3：实验组血浆样品；A4～A6：实验组肝脏； B1～B3：对照组血浆样品；B4～B6：对照组肝脏样品，检测结果见表1(空白之夜荧光值均为32.66)。计算公式：X=〔(C1-C0)×V〕÷(m×1 000)试样体积(V)A1～A3、B1～B3均为12.5 ml，A4～A6、B4～B6均为25 ml。

表1　样品硒含量的检测参考值

1.5统计学分析组间比较行t检验。

2结果

2. 1饲料硒含量的测定日粮硒含量检测结果，实验组是0.01 mg/kg；对照组是0.40 mg/kg。对照组是实验组的40倍。

2.2血浆与肝脏硒含量的测定血浆硒含量在3、7 d差异显著(P<0.05)，在14 d差异均显著(P<0.01)；肝脏中硒含量在3、7、14 d差异均显著(P<0.01)。见表2。

表2　血液与肝脏中硒含量的检测结果( ± s, n=9)

与对照组比较：1)P<0.05,2)P<0.01

3讨论

动物体内正常硒含量为0.05～0.2 μg/g，克山病病区等缺硒病发生地区的居民体内硒含量为0.074 μg/g。适宜水平Se的摄入有益健康。本结果表明实验组肝脏组织的硒含量明显减少，并且7、14 d血浆与肝脏硒含量依次递减。3、7、14 d 对照组血浆硒含量分别是实验组的1.85、3.05、4.46倍多，3、7、14 d 对照组肝脏硒含量是实验组的3.41、3.55、4.09倍多〔3，4〕。

1至3日龄时，由母体而来的硒尚可提供最基本的代谢需求，持续的低硒摄入可导致体内硒逐渐耗竭。随着试验期延长，其血硒含量随时间推移递减，肝脏硒含量也随之偏低。缺硒组肝脏病变渐趋严重，组织出血、坏死。低硒雏鸡生长缓慢，还往往发生贫血和低蛋白血症，且出现消化问题，其血硒含量随时间推移递减，肝脏硒含量也随之偏低〔5〕。正常雏鸡生长正常，并没有消化吸收问题，血硒含量为0.1 mg/kg以上，肝脏内硒含量正常。由此结果可确定低硒雏鸡模型复制成功。因此，本结果表明，氢化物原子荧光光谱法测定雏鸡血浆与肝脏中硒含量具有精确、灵敏、干扰小、成本低等优点。

4参考文献

1郝玉波，刘华琳，慈晓科，等. 施硒对两种类型玉米硒元素分配及产量、品质的影响〔J〕.应用生态学报，2012；23(2)：411-8.

2李秀华，刘雪枫，刘晋敏. 食物中硒含量测定与分析质量控制〔J〕.山西医科大学学报，2001；4，32(2)：135-7.

3薛平，宋欢. 饲料中砷和硒含量的原子吸收法测定〔J〕.检验检疫科学，2001；11(2)：48-56.

4郝小琴，吴子恺. 鲜食甜糯玉米子粒硒含量的研究〔J〕.作物杂志，2004；5(1)：15-7.

5马作江，陈永波，王尔惠，等. 原子吸收光谱法测定茶叶中硒和铜〔J〕.微量元素与健康研究，2011；28(1)：41-5.

〔2014-12-07修回〕

(编辑袁左鸣)