福州市周边蛋鸡场禽白血病亚群的血清流行病学检测

林伯全，徐 磊，黄招玲，廖惠珍，林祚贵，杜海江，杨 慧

(1.福建农业职业技术学院动物科学系，福建福州350119;2.长乐市农业局农产品质量安全检测站，福建长乐350200)

禽白血病是由禽白血病病毒(avian leukosis virus，ALV)引起的以禽类造血组织中某些细胞成分过度增生为主的一类可传染的肿瘤性疾病.ALV属于反转录病毒科禽C型反转录病毒属，其病毒可划分为A－J 10个亚群，其中，从鸡分离的有6个亚群(A、B、C、D、E、J)[1].禽白血病以垂直和水平传播两种方式在世界各国鸡群中广泛流行，病鸡不仅仅表现为内脏肿瘤或体表皮肤血管瘤，更多的鸡表现产蛋下降、免疫抑制、发育不良及生长迟缓，甚至死亡[2].

从鸡分离的6个亚群中，ALV-A是商品蛋鸡和肉鸡中最常见感染的外源型病毒，其次是ALV-B，而ALV-C、ALV-D 较少报道，ALV-E 主要是以内源性前病毒形式存在[2].1988 年，Payne et al[3]从肉鸡中分离出ALV-J.自报道以来，ALV-J已经迅速蔓延至许多国家不同品种的蛋鸡和肉鸡中，对世界养鸡业造成了严重的危害[4－6].我国禽白血病的发病率呈逐渐上升的趋势，全国近80%的省份报道了鸡群感染了ALV，给鸡场带来了严重的经济损失[7－8].

为了解福州市周边蛋鸡场禽白血病亚群的流行情况，应用ELISA方法对福州市周边蛋鸡场不同品系鸡群ALV-A/B和ALV-J抗体进行血清流行病学调查，旨在为禽白血病的综合防制提供科学依据.

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 样品来源 2148份蛋鸡血清样品，分别采集自福州市周边30个蛋鸡场的597羽海兰蛋鸡、512羽罗曼蛋鸡、486羽伊莎蛋鸡和553羽特佳蛋鸡，均为8－15月龄的产蛋母鸡.

1.1.2 试剂与仪器 ALV-A/B和ALV-J抗体检测试剂盒均购自美国IDEXX公司;全自动酶标仪为美国BIO RAD公司产品.

1.2 方法

计算方法:阴性对照平均值(NCX)=[D650nm(A1)+D650nm(A2)]/2;阳性对照平均值(PCX)=[D650nm(A3)+D650nm(A4)]/2;S/P=(样品平均值－NCX)/(PCX－NCX).

ALV-A/B和ALV-J抗体的检测严格按照相应试剂盒说明书进行.具体操作步骤如下:取100 μL不需稀释的阴性对照加在A1和A2孔中，取100 μL不需稀释的阳性对照加在A3和A4孔中，取100 μL 500倍稀释的被检样品液加在相应的孔中，所有被检样品都应进行双孔测定;室温下孵育30 min，每孔加入约350 μL稀释的洗涤液进行3－5次洗版;每孔加入100 μL酶标羊抗鸡抗体，室温下孵育30 min，进行3－5次洗版;每孔加入100 μL TMB底物液，室温下孵育15 min;每孔加入100 μL终止液.酶标仪空气清零，测定各孔于650 nm波长处的光密度(D650nm).

福州市周边30个蛋鸡场ALV-A/B和ALV-J抗体双阳性率为16.7%(5/30)，双阳性率由高至低依次为:罗曼蛋鸡群1.37%(7/512)、特佳蛋鸡群0.90%(5/553)、海兰蛋鸡群0.34%(2/597)和伊莎蛋鸡群0.20%(1/486).样品ALV-A/B和ALV-J抗体双阳性率合计为0.70%(15/2148)(表1).

目前国内许多省份蛋鸡群中己普遍发生禽白血病，蛋鸡群禽白血病发病率在5%－20%，阳性率在不同品系和不同鸡群间有所差异[8]，与本试验结果类似.本试验结果表明，福州市周边蛋鸡场不同品系和不同鸡群间存在不同程度的ALV流行.

2 结果与分析

2.1 ALV-A/B抗体测定结果

福州市周边30个蛋鸡场ALV-A/B抗体阳性率为70.00%(21/30)，阳性率由高至低依次为:特佳蛋鸡群 11.39%(63/553)、罗曼蛋鸡群 11.32%(58/512)、海兰蛋鸡群 8.54%(51/597)和伊莎蛋鸡群 7.61%(37/486).样品ALV-A/B抗体阳性率合计为9.73%(209/2148)(表1).

若α1≥α2，则sα1≥sα2，从式(14)有(ma+ mb)2- mc2- 1≥mc2+ 1- (ma- mb)2，即ma2+ mb2≥mc2+ 此过程倒退回去，各式也成立。故对αmax有结论：

表1 ALV-A/B和ALV-J抗体检测结果Table 1 The subgroup antibody test results of ALV-A/B and ALV-J

2.2 ALV-J抗体测定结果

尽管养鸡业很早就意识到禽白血病的危害，但由于禽流感、新城疫等急性、烈性、高死亡率传染病的活跃，常将禽白血病忽视.直到1997－1998年，ALV-J在世界范围的大爆发，给养禽业造成了巨大的经济损失，禽白血病才开始受到高度重视，同时也成为学术界关注和研究的热点[9].我国于1999年在市场上商品代肉鸡中分离到ALV-J[10]，十余年来，ALV-J的宿主范围已由肉种鸡扩大到蛋鸡以及地方品种鸡，是目前严重危害我国养禽业的传染病之一[11－12].

2.3 ALV-A/B和ALV-J抗体双阳性测定结果

ALV-A/B抗体检测结果判定:S/P≤0.4，判为阴性;S/P＞0.4，判为阳性，表明存在ALV-A/B抗体.ALV-J抗体检测结果判定:S/P≤0.6，判为阴性;S/P＞0.6，判为阳性，表明存在ALV-J抗体.

3 讨论

福州市周边30个蛋鸡场ALV-J抗体阳性率为36.70%(11/30)，阳性率由高至低依次为:特佳蛋鸡群5.24%(29/553)、罗曼蛋鸡群 4.10%(21/512)、伊莎蛋鸡群 3.51%(13/486)和海兰蛋鸡群 3.18%(19/597).样品ALV-J抗体阳性率合计为3.82%(82/2148)(表1).

ADC模数转换芯片AD9230与可变增益放大器VGA芯片ADL5243的写控制类比于ADF4350芯片,鉴于文章篇幅的限制,本文以ADF4350芯片为例讲解芯片的写控制过程。

本研究发现，S6K1抑制剂PF-4708671和PI3K/mTOR激酶抑制剂NVP-BEZ235联用于乳腺癌细胞MDA-MB-436和肺癌细胞A549，可显著增强单用时对肿瘤细胞的生长抑制作用。

表1为各支流生态需水量和生态景观用水流量表。从表1可知，通过分析流域面积大的大岸冲、八尺江、良凤江、四塘江，天然来水量是满足要求的，其余支流虽然生态用水满足要求，但是保证率90%的来水量难以满足景观水量要求。

本次调查中，福州市周边30个蛋鸡场ALV-A/B抗体阳性率为70.00%(21/30)，高于ALV-J抗体阳性率36.7%(11/30);2148份样品中，ALV-A/B抗体阳性率为9.73%(209/2148)，高于ALV-J抗体阳性率3.82%(82/2148).可见，相比 ALV-J，ALV-A/B 流行更为普遍.

1.2.1 对照组 采用常规围手术期康复管理。①健康教育:阶段性健康宣教，告知围手术期可能出现的情况及注意事项。②术前肠道管理:术前4 h禁饮、8～12 h禁食，术前一晚予果导4～6片缓泻。③疼痛管理:术后给予自控镇痛泵(PCA)，疼痛难忍时予肌注盐酸哌替啶75～100 mg镇痛。④康复指导:全麻清醒后6～12 h开始协助患者行肢体主、被动活动。⑤胸管拔除：胸腔闭式引流无漏气、胸引量<100 ml/d(非血性、乳糜、脓性液)、胸片提示肺复张良好。

ALV-A/B和ALV-J抗体双阳性测定结果表明，近年我国鸡群出现不同亚群的ALV同时长期存在于同一只蛋鸡中，预示着我国蛋鸡业面临更严重的ALV的危害[13].

为了解福州市周边蛋鸡场禽白血病亚群的流行情况，本次调查采用ELISA方法对分别采集自福州市周边30个蛋鸡场共2148羽血样进行ALV-A/B和ALV-J抗体检测的结果表明，福州市周边蛋鸡场不同品系和不同鸡群间存在不同程度的ALV流行，相比于ALV-J，ALV-A/B流行更为普遍，且存在ALV-A/B和ALV-J抗体双阳性样品，应予重视.

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