微生物限度培养器在微生物限度检查中的适用性研究

任嘉 柳海霞730000甘肃奇正藏药有限公司

微生物限度培养器在微生物限度检查中的适用性研究

任嘉 柳海霞
730000甘肃奇正藏药有限公司

目的：微生物限度培养器在微生物限度检查中的适用性。方法：借助微生物限度培养器检验5种标准菌株及其回收率，并对屈臣氏水、含抑菌成分的药品进行相应的微生物限度检验。结果：用《微生物限度培养器》与用《药典》规定的薄膜过滤法的检验结果相比，差异无统计学意义（P＞0.05）。结论：在微生物限度检查中，微生物限度培养器适用于日常的微生物检验，比药典规定的过滤方法操作更便捷，且增大了滤膜面积，提高过滤效果。

微生物限度；微生物限度培养器；适用性

根据《中华人民共和国药典》（以下简称《药典》）2010年版一部附录《微生物限度检查法》[1]的规定，所有药品生产用工艺用水都需要用薄膜过滤法进行微生物限度检查，且用薄膜过滤法对含有抑菌作用的产品进行检查。但是，在实际实验操作过程中，薄膜过滤法主要通过滤膜过滤样品后在培养基表面粘贴培养，计数、判定结果。实验操作步骤比较繁琐，操作也易造成污染，影响实验结果。近年来，随着微生物限度检查技术的日益成熟，很多新技术，如微生物限度培养器的应用逐渐得到行业内的使用认可。这里根据《中国药品检验标准操作规范》[2]、《药品微生物检验技术》[3]及有关文献，有针对性地分析微生物限度培养器在微生物限度检查中的适用性[4，5]。

实验材料

实验设备：HTY-302G型微生物限度检验仪；S60微生物限度培养器。

菌种：①大肠埃希菌[CMCC（B）44 102]；②枯草芽孢杆菌[CMCC（B）63 501]；③白色念珠菌[CMCC（F）98001]；④金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003]；⑤黑曲霉[CMCC（F）98003]；⑥黏质沙雷氏菌[CMCC41003]。上述标准菌株均购自中国医学细菌保藏中心，验证试验所用的菌株均为第3代。

实验培养基：硫乙醇酸盐液体培养基（1405132）、营养琼脂（140606）、营养肉汤培养基（140125）、改良马丁培养基（141124）、改良马丁琼脂培养基（140105），以上培养基均购自北京三药科技有限公司。

供试品：青鹏软膏、红花如意丸、板蓝根颗粒、洁白丸；饮用水为外购屈臣氏水。

方法

培养器的性能确认：微生物限度培养器工作原理与薄膜过滤法一致；培养基安装在微生物限度检测仪上，杯内注入供试液，减压过滤后取下培养皿并翻转，将培养基浇注于滤膜集菌反面，凝固后于规定温度培养。①检查密闭性能：检查滤膜支撑体与杯体是否紧密连接；加入供试液后静置观察，看滤膜支撑体和杯体的接缝处是否存在渗漏现象（可以用滤纸测试）；操作时需要培养器能便捷快速安装与拆卸至底座上（防止操作污染）。②检查过滤性能：在滤座上安装培养器后，向下按压，使培养器的滤膜紧贴滤座表面的多孔板上；然后将杯盖取下，用供试液加入杯体中，打开开关，进行抽滤；在抽滤过程中，培养器应保持抽滤顺畅、不漏液，观察滤膜是否有破裂现象。③检查无菌性能：用于微生物限度检查，微生物限度培养器应符合无菌检验标准；取检查过上述功能的10套培养器，过滤体积为100mL、浓度0.9％的生理盐水（已灭菌），收集滤液，合并后按《药典》2010年版二部附录进行薄膜过滤法无菌检查，结果均符合无菌要求。④检查截留性能：微生物限度培养器应能有效截留微生物的能力；选取黏质沙雷氏菌为挑战菌[6]，将含有50～100个CFU的黏质沙雷氏菌浓度0.9％的100mL无菌生理盐水加入培养器中进行过滤，收集滤液，接种到两份装量为40mL的营养肉汤培养基中，置于35℃无菌培养48h后观察结果，应无菌生长；将过滤后的滤膜接种在营养肉汤培养基中同条件进行培养，应有菌生长，同法检查10套培养器，结果均应符合要求。⑤检查微生物的回收率：为了更好地完成日常工作，借助培养器看能否准确反映样品中的微生物菌落数。选取《药典》2010年版收载的验证用5种试验菌进行试验。按药典规定，制备5种菌稀释液，采用平皿法准确计数，将5种菌液分别通过培养器和一般过滤器过滤，培养器为试验组，《药典》收载的薄膜过滤法为对照组，对比两组数据来判断有无统计学差异；判断培养器的回收性能。将两组数据进行t检验，结果显示对所实验的5种菌的回收率无统计学差异（P＞0.05），见表1。

表1 5种试验菌的回收率实验结果

确定培养器的适用性：选取青鹏软膏、红花如意丸、板蓝根颗粒、洁白丸、屈臣氏水作供试品，按《药典》2010年版规定的薄膜过滤法进行计数，同上试验组为培养器，对照组为药典规定薄膜过滤法，以两组数据之间有无明显的统计学差异作为判断；选取上述药品制备供试液，按《药典》规定消除抑菌性后制成1：10供试液备用，取10mL供试液加入培养器与过滤器中，等稀释液冲洗滤膜；饮用水按上法操作，不用稀释液冲洗，将培养器和滤膜置规定条件培养（上述实验均做平行样品），逐日点计，计数结果进行对比。对两组数据进行t检验，5种样品的细菌计数结果无统计学差异（P＞0.05），见表2。

表2 微生物限度的适用性结果分析

讨论

培养器与传统滤器通过薄膜过滤法对5种试验菌金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、黑曲霉、白色念珠菌、枯草芽孢杆菌的回收率都达70％以上；且水质样品和4种含有抑菌性成分的药品经两种过滤方式对比测定的结果，无统计学差异。实验结果显示，微生物限度培养器与《药典》规定的过滤方法在应用原理、性能特点和基本结构上，检测结果均一致，完全适用于水质以及药品的微生物限度检查，并且对于普通薄膜过滤法存在着很大优势。

在微生物回收率的实验过程中，发现在菌落形成的速度方面及典型菌落形态方面，微生物限度培养器也都要优于传统过滤方法，更适合日常检验工作中实验人员对菌落的认知与判断，更适用于微生物限度的检查。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）2010年版[S].北京：中国医药科技出版社,2010：附录79-88.

[2]中国药品生物制品检定所,中国药品检验总所.中国药品检验标准操作规范2010年版[M].北京：中国医药科技出版社,2010：351-407.

[3]苏德模,马绪荣.药品微生物学检验技术[M].北京：华龄出版社,2007：221-227.

[4]黄英.14种中成药微生物限度检验方法研究[J].中国执业药师,2013,10（3）：27-30.

[5]肖雨清,汪选斌,姜美蓉,等.薄膜过滤反注培养基法检查抑菌药品微生物限度[J].中国医院药学杂志,2012,25（3）：200-202.

[6]张海婴,梁巧,高冬梅,等.微生物检测的挑战性试验[J].生命科学仪器,2010,12（8）：50-54.

表1 两组患者的诊断效果比较[例（％）]

高压注射器是一种可控制注射速率的注射仪器，将它使用在造影剂的注射过程中，具有以下优点：①高压注射器的注射速率始终保持一致，克服了手推式注射法注射速率不均的缺陷；同时，它还允许注射造影与CT扫描同时进行，机动灵活地抓扫各脏器的动脉期及静脉期，甚至可以得到任何时期的图像，对疾病的诊断具有很大作用。②高压注射器的针筒加热功能良好，能够帮助造影剂顺利进入患者体内，减少了造影失败的几率。基于以上几个优点，16层螺旋CT增强扫描所得到的诊断结果才会优于MRI。需要注意的是，在16层螺旋CT增强扫描中应用高压注射器需要做好以下几点：①高压注射器的操作程序要严格，严禁随意更改、颠倒操作程序，以防止高压注射器死机。②在造影剂抽吸完毕之后，要对针筒进行检查，查看其中是否还有空气没有排出，如果有，则要将其排出。③在调用高压注射器的预案之前，首先要对预案进行确认，如确认高压注射器的注射剂量、注射速率，在核对无误后按确认键。

综上所述，16层螺旋CT增强扫描中应用高压注射器进行注射，能够提高诊断效果，而在应用过程中则需要注意严格操作程序等问题。

参考文献

[1]金镝,王耀春.32层螺旋CT增强扫描中高压注射器的应用与护理体会[J].中国实用医药,2012,19（13）：193-194.

[2]邓八妹,梁焕莲.高压注射器在螺旋CT增强扫描中的应用及效果观察[J].齐鲁护理杂志,2012,9（16）：33-34.

[3] 张冬梅.CT增强扫描中应用高压注射器的护理研究[J].药物与人,2014,12（6）：255-256.

[4]德吉.螺旋CT增强扫描中高压注射器的应用及护理体会[J].西藏科技,2014,16（3）：45-46.

[5]沈文,张灵敏,刘金有.高压注射器在64排螺旋CT增强扫描中的护理应用[J].哈尔滨医药,2014,22（4）：270-271.

Applicabilityofmicrobiallimitcultureinmicrobiallimittest

RenJia,LiuHaixia
GansuQizhengTibetanMedicineCoLtd730000

Objective：Applicabilityofmicrobiallimitcultureinmicrobiallimittest.Methods：Testingof5standardstrainsand theirrecoveryratebymicrobiallimit,themicrobiallimittestofWatsonswateranddrugcontainingantimicrobialcomponents. Results：Comparisonofmembranefiltrationmethodwithmicrobiallimitcultureformembranefiltration,therewasnostatistical significance（P＞0.05）.Conclusion：Inmicrobiallimittest,microbiallimitculturedeviceissuitableforroutinemicrobiological examination,anditismoreconvenienttooperateandincreasethesizeofthefilter,andimprovethefilteringeffect.

Microbiallimit,Microbiallimitculture,Applicability

10.3969/j.issn.1007-614x.2015.30.64