奶牛场主要病毒性繁殖障碍疫病感染情况调查

罗玉江，李 静，苏贵成，屈勇刚，曹树珠，李 岩

（1.石河子大学动物科技学院，新疆石河子 832000；2.新疆生产建设兵团畜牧兽医工作总站，新疆乌鲁木齐 830063）

奶牛场主要病毒性繁殖障碍疫病感染情况调查

罗玉江1，李 静2，苏贵成2，屈勇刚，曹树珠1，李 岩2

（1.石河子大学动物科技学院，新疆石河子 832000；2.新疆生产建设兵团畜牧兽医工作总站，新疆乌鲁木齐 830063）

［目的］调查4个奶牛场主要病毒性繁殖障碍疫病的感染情况，为进一步进行病原学研究，揭示其致病作用，以及为制定防治措施奠定基础。［方法］选取4个规模化奶牛场，采集死胎、流产胎儿的肺、肝、脾、肾、淋巴结等组织，伴有肺炎症状犊牛的鼻拭子和耳组织，腹泻犊牛粪便，初乳以及冻精样品，共计248份。采用实时荧光RT-PCR/PCR检测方法，对牛病毒性腹泻/黏膜病病毒（BVDV）、牛副流感病毒3型（BPIV-3）、牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）进行检测。［结果］发现BVDV、BPIV-3、IBRV的总阳性率分别为11.29%（28/248）、10.00%（18/180）、9.26%（15/162）。［结论］这4个奶牛场存在BVDV、BPIV-3、IBRV的感染，调查结果为规模化奶牛场繁殖障碍类主要病毒性疫病的防控提供了流行病学数据。

BVDV；BPIV-3；IBRV；实时荧光RT-PCR/PCR

随着经济发展，生活条件改善，人类对奶制品需求量不断增加，加之国家对农业产业结构调整的不断深入，我国奶牛规模化养殖得到快速发展。目前，我国奶牛存栏量和奶产量均已位居世界第三。但同畜牧业发达国家相比，我国奶业发展基础依然薄弱，奶牛疫病防控方面仍面临诸多问题亟待解决[1]。新疆土地面积辽阔、草场资源丰富，畜牧业在国内长期占有重要地位。近年来，新疆部分地区发生奶牛繁殖障碍类疫病日趋严重，在

很大程度上制约了新疆奶产业的健康持续发展。2011年，新疆生产建设兵团畜牧兽医工作总站对新疆生产建设兵团第一、第七、第八师规模化奶牛场开展调查，结果显示奶牛繁殖障碍类传染病的感染率达到11.2%。因此，本研究选取4个规模化奶牛场，对牛病毒性腹泻/黏膜病病毒（Bovine viral diarrhea virus，BVDV）、牛副流感病毒3型（Bovine parainfluenza virus 3，BPIV-3）、牛传染性鼻气管炎病毒（infectious bovine rhinotracheitis virus，IBRV）进行了实时荧光RT-PCR/PCR检测分析，以期为相关疫病的防控提供流行病学数据支持。

1 材料和方法

1.1 样品的来源

样品来源为新疆北部4个规模化奶牛场，主要饲养品种为中国荷斯坦奶牛，存栏量在2000头以上，牛场位于农牧区，周围无其它养殖场。于2014年3月至2014年12月，采集流产死胎的肝、脾、肺、肾脏及淋巴结等组织59头份；1～2月龄患有肺炎的犊牛的鼻拭子81头份及耳组织31头份；2月龄内腹泻犊牛的粪便37头份；流产死胎母牛所产的初乳18头份；总共226头份。22份冻精由新疆生产建设兵团畜牧兽医工作总站提供，样品采集来源情况如表1所示。

表1 4个规模化奶牛场样品采集情况统计表

1.2 主要试剂

牛病毒性腹泻（BVD）实时荧光RT-PCR检测试剂盒（批号：BVD20140926P）、牛副流感病毒3型（BPIV-3）实时荧光RT-PCR检测试剂盒（批号：BPI20140926P）、牛疱疹病毒1型（BHV-1）实时荧光PCR检测试剂盒（批号：BH20140926P）均购于北京世纪元亨动物防疫技术有限公司。

1.3 主要仪器

LightCycler® 480 Ⅱ荧光PCR仪，PikoReal TCR0024/TCR0096 荧光PCR仪。

1.4 检测方法

BVDV、BPIV-3、IBRV的检测均参照试剂盒说明书进行。

2 结果

采用实时荧光RT-PCR/PCR检测方法，从59份流产死胎和81份患有肺炎的犊牛的鼻拭子中，检出BVDV、BPIV-3和IBRV；而在31份患有肺炎的犊牛耳组织和37份腹泻的粪便样品中，对BVDV进行了检测，未检出有该病毒；从母牛流产死胎与配公牛的冻精中，未检出病毒；从流产死胎母牛的初乳中，未检测到BVDV和BPIV-3。在所检测的组织病料样品中，BVDV、BPIV-3和IBRV的总阳性率分别为11.29%（28/248）、10.00%（18/180）、9.26%（15/162）。

其中，对每头流产死胎犊牛的组织进行混样检测，59份流产死胎中BVDV、BPIV-3、IBRV的阳性率分别为25.42%（15/59）、25.42%（15/59）、5.08%（3/59）；81份患有肺炎的犊牛的鼻拭子中BVDV、BPIV-3、IBRV阳性率分别为16.05%（13/81）、3.70%（3/81）、14.81%（12/81），详见表2。

表2 4个规模化奶牛场三种病毒检测结果

在同一份样品中，同时检测到2～3种病毒的情况。在流产死胎中同时检测到BVDV、BPIV-3和IBRV三种病毒的占3.39%（2/59）；在鼻拭子中，BVDV与BPIV-3同时检测到的占2.47%（2/81），而BVDV与IBRV同时检测到的也占2.47%（2/81）。

3 讨论

据报道，BVDV和IBRV均可通过子宫感染，引起孕畜流产和产死胎、弱胎、不育等症状，是造成奶牛繁殖障碍的重要病毒性病原。其中，BVDV已被证明是世界范围内导致牛病尤其是繁殖性疾病的最主要的病毒之一，同时，BVDV还可引起免疫抑制和持续性感染，继而导致其他病原体对机体的致病性增强[2]。IBRV主要引起牛严重的上呼吸道疾病及气管黏膜发炎、呼吸困难、流鼻液等，还可引起怀孕母牛流产、产死胎及生殖道感染、结膜炎、乳腺炎等多种病症［3-5］。BPIV-3是引起牛急性呼吸道疾病的主要病毒之一，也可通过子宫感染，引起孕畜流产[5]。

本研究采用实时荧光RT-PCR/PCR检测方法，对4个规模化奶牛场进行BVDV、BPIV-3、IBRV感染情况调查，证实存在感染。同时，对59份流产死胎组织检测，BVDV、BPIV-3、IBRV在流产死胎中具有较高的感染率，还存在BVDV、BPIV-3和IBRV三种病毒在同一份组织混样中同时检测到的情况，提示该3种病毒在致奶牛繁殖障碍中存在混合感染或继发感染的可能，为后期制定相应防控措施提供了依据。

在1～2月龄发病犊牛的鼻拭子中，BVDV和IBRV的检出率较高，也存在两种病毒在同一份样品中同时检测到的情况。若BVDV感染孕期胎儿，出生犊牛则可能成为持续性感染者，处于免疫耐受状态，持久带毒排毒。而对于持续性感染的犊牛，耳组织检测具有很高的敏感性和特异性，但从发病犊牛的耳组织中未检测到BVDV，说明犊牛发病可能是通过外界感染BVDV或别的致病菌造成的。因此，及时对发病动物进行隔离治疗或淘汰，避免相互感染传播，同时搞好环境卫生及消毒工作，可减少有害致病菌的滋生。对感染率较高的牛场和在高发季节，可通过疫苗预防，降低发病率；加强饲养管理，保证饲料营养全价，增强牛的体质；消除不利条件，如冬季注意保暖，夏季注意避暑等。

对流产死胎的组织检测发现BVDV和BPIV-3的感染率较高，因此，对其母牛所分泌的初乳进行这两种病毒的检测，但未检测到这两种病毒。BVDV可引起牛的严重腹泻，青年牛最易发生，而3月龄内犊牛可能受母源抗体的保护，由BVDV引起的腹泻很少发生，因此从2月龄内腹泻犊牛的粪便中未检测出该病毒。

BVDV、BPIV-3、IBRV均可通过子宫感染，引起母牛的繁殖障碍。因此提高繁殖技术，控制传染性因素，如对引起繁殖障碍频率较高的与配公牛的精液进行检测，淘汰被污染的冻精，可减少母牛繁殖障碍的发生。

4 结论

4.1 通过实时荧光探针PCR/RT-PCR检测，从流产死胎组织中检测出BVDV、BPIV-3、IBRV，且检出率较高，存在几种病毒在同一样品中同时检测到的情况，揭示这些病毒在致奶牛繁殖障碍中起着重要的作用，存在有混合感染或继发感染的可能，但其致病性有待于进一步研究。

4.2 IBRV和BPIV-3也是引发呼吸道疾病的重要病毒，在发病牛中检出率较高，呈现出混合感染的趋势。因此，及时对发病动物进行隔离治疗或淘汰，避免相互感染传播，同时搞好环境卫生及消毒工作，可有效减少有害致病菌的滋生，防止继发感染。在感染率较高牛场和高发季节，可提前采取一些相应的预防措施，做好防疫性的工作。

4.3 通过对组织病料进行病原学检测，初步确定了致奶牛繁殖障碍的主要病毒性病原种类及感染情况，为进一步进行病原学的研究，揭示其致病作用，以及为制定防治措施奠定了基础。

[1] 王洪梅，侯佩莉，宋玲玲，等. 国内外奶牛主要病毒病的流行现状及防控技术研究进展[J].中国畜牧杂志，2014，50（10）：42-49.

[2] 安德鲁斯AH.牛病学-疾病与管理[M].韩博，译.2版.北京：中国农业大学出版社，2006：230-244.

[3] 王海燕，朱远茂，薛飞，等.牛传染性鼻气管炎病毒gE基因的截短克隆与表达[J].中国预防兽医学报，2006，28（3）：289-293.

[4] 颜邦芬.牛传染性鼻气管炎病毒抗体间接ELISA 的建立及其在流行病学研究中的应用[D] .华中农业大学，2007：5-7.

[5] 陈溥言.兽医传染病学[M].5版.北京：中国农业出版社，2011：299-300.

An Investigation of Main Viral Disease Infections Causing Reproductive Failure in 4 Dairy Farms

Luo Yujiang1，Li Jing2，Su Guicheng2，Qu Yonggang1，Cao Shuzhu1，Li Yan2
（1. College of Animal Science and Technology，Shihezi University，Shihezi，Xinjiang 832000；2.The General Station of Animal Husbandry and Veterinary Medicine of Xinjiang Production and Construction Corps，Urumqi，Xinjiang 830063）

[Objective] To investigate main viral disease infection causing reproductive failure in 4 dairy farms，reveal its pathogenic role by further etiology study，and lay a foundation for the development of prevention and control measures.[Method] 248 samples，including tissues of lung，liver，spleen，kidney，lymph nodes，etc from miscarriages or stillbirth，nasal swab and ear tissue from calves with pneumonia ，stool from calves with diarrhea，colostrum and frozen semen were collected from four scale dairy farms for detection of bovine viral diarrhea virus（BVDV），bovine parainfluenza virus 3（BPIV-3）and infectious bovine rhinotracheitis virus（IBRV）by real-time fluorescence RT-PCR / PCR . [Result] The results showed that the infection rate of BVDV，BPIV-3 and IBRV were 11.29%（28/248），10.00%（18/180）and 9.26%（15/162），respectively.[Conclusion] The survey indicated that it was existence of the three viral infection in 4 dairy farms.The results would provide epidemiological data for the diseases prevention and control in scale dairy farms.

BVDV；BPIV-3；IBRV；real-time RT-PCR / PCR

S858.23

B

1005-944X（2015）06-0015-03

新疆生产建设兵团重点领域科技攻关计划项目（2013BA004）

李 岩，屈勇刚